【摘要】：背景:在圍術(shù)期腦血管疾病患者發(fā)生腦血管意外的風(fēng)險(xiǎn)大大增加,容易引起致殘、死亡等嚴(yán)重后果,威脅生命安全。在腦血管疾病中,以缺血性腦血管病居多,腦組織缺血恢復(fù)灌注后,引起一系列病理生理變化,反而導(dǎo)致?lián)p傷進(jìn)一步加重,即為腦缺血再灌注損傷。及時(shí)采取積極有效的措施可以減輕腦缺血再灌注損傷,避免情況進(jìn)一步惡化。腦缺血再灌注損傷的機(jī)制非常復(fù)雜,涉及多種因素,并且相互影響。炎癥反應(yīng)是缺血再灌注損傷重要的病理生理改變特征之一,減輕炎癥反應(yīng)是治療缺血再灌注損傷的有效策略之一。腦缺血后,小膠質(zhì)細(xì)胞迅速活化,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生大量促炎癥因子,導(dǎo)致?lián)p傷加重,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化可以減輕缺血再灌注損傷。右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)是一種高選擇性的α_2受體激動(dòng)劑,具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗交感興奮等作用,在臨床中應(yīng)用廣泛。大量臨床和基礎(chǔ)研究結(jié)果表明,右美托咪定對(duì)腦、肝、腎、脊髓、肺、心等重要器官損傷具有保護(hù)作用,可能涉及多種機(jī)制,尚不明確。有研究發(fā)現(xiàn)右美托咪定可通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化減少炎癥因子釋放減輕脊髓損傷,關(guān)于右美托咪定是否可以通過(guò)小膠質(zhì)細(xì)胞影響腦缺血再灌注損傷的在體實(shí)驗(yàn)研究未見(jiàn)報(bào)道,值得進(jìn)一步研究。目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型和小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞氧糖剝奪/復(fù)氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模型,在動(dòng)物和細(xì)胞水平模擬缺血再灌注損傷,從小膠質(zhì)細(xì)胞活化角度,探討右美托咪定的腦保護(hù)作用,以及其可能的機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:采用線栓法建立大鼠MCAO模型。取60只SD雄性大鼠隨機(jī)分為3組(n=20):假手術(shù)組(Sham組)、MCAO模型組(I/R組)和右美托咪定+MCAO組(Dex+I/R組)。再灌注24h后各組同時(shí)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。采用Longa's評(píng)分法評(píng)估神經(jīng)功能情況,HE染色觀察梗死側(cè)大腦皮層病理改變,TUNEL染色檢測(cè)半暗帶細(xì)胞凋亡情況,組織免疫熒光染色觀察半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況,ELISA試劑盒檢測(cè)大腦梗死側(cè)皮層TNF-α水平。建立小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪/復(fù)氧(Oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。將培養(yǎng)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞分為對(duì)照組(Control組)、模型組(OGD/R組)、1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組。于復(fù)氧培養(yǎng)24h后檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。采用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清液TNF-α濃度,Western blot檢測(cè)BV2細(xì)胞內(nèi)CD68、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.Dex對(duì)MCAO模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響與Sham組比較,I/R組神經(jīng)功能評(píng)分顯著增加(P0.01),與I/R組比較,Dex+I/R組神經(jīng)功能評(píng)分降低(P0.05)。2.Dex對(duì)MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層腦組織顯微結(jié)構(gòu)的影響與Sham組比較,I/R組細(xì)胞數(shù)量減少,大量細(xì)胞壞死,細(xì)胞呈空泡樣變性,間質(zhì)水腫疏松,Dex干預(yù)后細(xì)胞核部分固縮,少量細(xì)胞呈空泡樣變性,間質(zhì)水腫減輕。3.Dex對(duì)MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶細(xì)胞凋亡的影響與Sham組比較,I/R組大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶細(xì)胞凋亡率顯著升高(P0.01),Dex干預(yù)后細(xì)胞凋亡率較I/R組降低(P0.05)。4.Dex對(duì)MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞活化和皮層區(qū)TNF-α水平的影響與Sham組比較,I/R組大鼠梗側(cè)皮層區(qū)呈活化狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.01),腦組織TNF-α濃度顯著升高(P0.01);而與I/R組比較,Dex+I/R組小膠質(zhì)細(xì)胞活化率降低(P0.05),腦組織TNF-α濃度下降(P0.05)。5.Dex對(duì)OGD/R BV2細(xì)胞活化和分泌TNF-α的影響B(tài)V2細(xì)胞經(jīng)OGD/R后,CD68表達(dá)明顯增加(P0.01),較低濃度(1μM)Dex對(duì)OGD/R BV2細(xì)胞CD68表達(dá)無(wú)顯著影響,而經(jīng)10μM Dex處理的OGD/R BV2細(xì)胞CD68表達(dá)降低(P0.05)。與Control組比較,OGD/R組細(xì)胞上清液TNF-α濃度增加(P0.01),與OGD/R組比較,1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組細(xì)胞上清液TNF-α濃度均降低(P0.05)。6.Dex對(duì)OGD/R BV2細(xì)胞NF-κB表達(dá)及活化影響與Control組比較,OGD/R組BV2細(xì)胞NF-κB p65、p-NF-κB p65表達(dá)增加(P0.01)。與OGD/R組比較,1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組NF-κB p65表達(dá)無(wú)顯著差異(P0.05),10μM Dex+OGD/R組細(xì)胞p-NF-κB p65表達(dá)減少(P0.05)。結(jié)論:右美托咪定通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化減輕大鼠腦缺血再灌注損傷發(fā)揮腦保護(hù)作用,可能與其抑制小膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB活化有關(guān)。
【圖文】：

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文待測(cè)標(biāo)本吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)，采用 SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)軟件，方用 LSD 檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)行 KruO 模型梗死灶，Sham 組無(wú)白色梗死區(qū)，

組別 樣本數(shù) longa 評(píng)分Sham 組 10 0±0I/R 組 10 2.60±0.52aDex+I/R 組 10 1.90±0.57ba：P<0.01，與 Sham 組比較；b：P<0.05，與 I/R 組比較2.2.3 右美托咪定降低腦缺血再灌注大鼠腦組織病理?yè)p傷程度在光鏡下觀察 HE 染色切片標(biāo)本梗側(cè)大腦皮層病理改變。Sham組：細(xì)胞排列有細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核圓形，核仁清晰，胞漿均勻淡染，細(xì)胞周圍間隙致密。組：腦組織著色淺，細(xì)胞數(shù)量減少，，排列紊亂，大量細(xì)胞壞死，細(xì)胞胞體縮小，胞固縮或碎裂，細(xì)胞呈空泡樣變性，間質(zhì)水腫疏松。Dex+I/R 組：細(xì)胞壞死程度較 組減輕，細(xì)胞核部分固縮，少量細(xì)胞呈空泡樣變性，間質(zhì)水腫減輕，說(shuō)明右美托咪干預(yù)減輕腦缺血再灌注后病理?yè)p傷，見(jiàn)圖 2。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R614;R-332

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