【摘要】：背景:在圍術(shù)期腦血管疾病患者發(fā)生腦血管意外的風(fēng)險大大增加,容易引起致殘、死亡等嚴重后果,威脅生命安全。在腦血管疾病中,以缺血性腦血管病居多,腦組織缺血恢復(fù)灌注后,引起一系列病理生理變化,反而導(dǎo)致?lián)p傷進一步加重,即為腦缺血再灌注損傷。及時采取積極有效的措施可以減輕腦缺血再灌注損傷,避免情況進一步惡化。腦缺血再灌注損傷的機制非常復(fù)雜,涉及多種因素,并且相互影響。炎癥反應(yīng)是缺血再灌注損傷重要的病理生理改變特征之一,減輕炎癥反應(yīng)是治療缺血再灌注損傷的有效策略之一。腦缺血后,小膠質(zhì)細胞迅速活化,活化的小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生大量促炎癥因子,導(dǎo)致?lián)p傷加重,抑制小膠質(zhì)細胞活化可以減輕缺血再灌注損傷。右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)是一種高選擇性的α_2受體激動劑,具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗交感興奮等作用,在臨床中應(yīng)用廣泛。大量臨床和基礎(chǔ)研究結(jié)果表明,右美托咪定對腦、肝、腎、脊髓、肺、心等重要器官損傷具有保護作用,可能涉及多種機制,尚不明確。有研究發(fā)現(xiàn)右美托咪定可通過抑制小膠質(zhì)細胞活化減少炎癥因子釋放減輕脊髓損傷,關(guān)于右美托咪定是否可以通過小膠質(zhì)細胞影響腦缺血再灌注損傷的在體實驗研究未見報道,值得進一步研究。目的:本實驗通過建立大鼠大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型和小鼠小膠質(zhì)細胞株BV2細胞氧糖剝奪/復(fù)氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模型,在動物和細胞水平模擬缺血再灌注損傷,從小膠質(zhì)細胞活化角度,探討右美托咪定的腦保護作用,以及其可能的機制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:采用線栓法建立大鼠MCAO模型。取60只SD雄性大鼠隨機分為3組(n=20):假手術(shù)組(Sham組)、MCAO模型組(I/R組)和右美托咪定+MCAO組(Dex+I/R組)。再灌注24h后各組同時檢測各項指標。采用Longa's評分法評估神經(jīng)功能情況,HE染色觀察梗死側(cè)大腦皮層病理改變,TUNEL染色檢測半暗帶細胞凋亡情況,組織免疫熒光染色觀察半暗帶小膠質(zhì)細胞活化情況,ELISA試劑盒檢測大腦梗死側(cè)皮層TNF-α水平。建立小膠質(zhì)細胞氧糖剝奪/復(fù)氧(Oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。將培養(yǎng)的BV2小膠質(zhì)細胞分為對照組(Control組)、模型組(OGD/R組)、1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組。于復(fù)氧培養(yǎng)24h后檢測各項指標。采用ELISA試劑盒檢測細胞上清液TNF-α濃度,Western blot檢測BV2細胞內(nèi)CD68、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表達情況。結(jié)果:1.Dex對MCAO模型大鼠神經(jīng)功能評分的影響與Sham組比較,I/R組神經(jīng)功能評分顯著增加(P0.01),與I/R組比較,Dex+I/R組神經(jīng)功能評分降低(P0.05)。2.Dex對MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層腦組織顯微結(jié)構(gòu)的影響與Sham組比較,I/R組細胞數(shù)量減少,大量細胞壞死,細胞呈空泡樣變性,間質(zhì)水腫疏松,Dex干預(yù)后細胞核部分固縮,少量細胞呈空泡樣變性,間質(zhì)水腫減輕。3.Dex對MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶細胞凋亡的影響與Sham組比較,I/R組大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶細胞凋亡率顯著升高(P0.01),Dex干預(yù)后細胞凋亡率較I/R組降低(P0.05)。4.Dex對MCAO模型大鼠梗死側(cè)皮層半暗帶小膠質(zhì)細胞活化和皮層區(qū)TNF-α水平的影響與Sham組比較,I/R組大鼠梗側(cè)皮層區(qū)呈活化狀態(tài)的小膠質(zhì)細胞數(shù)明顯增多(P0.01),腦組織TNF-α濃度顯著升高(P0.01);而與I/R組比較,Dex+I/R組小膠質(zhì)細胞活化率降低(P0.05),腦組織TNF-α濃度下降(P0.05)。5.Dex對OGD/R BV2細胞活化和分泌TNF-α的影響B(tài)V2細胞經(jīng)OGD/R后,CD68表達明顯增加(P0.01),較低濃度(1μM)Dex對OGD/R BV2細胞CD68表達無顯著影響,而經(jīng)10μM Dex處理的OGD/R BV2細胞CD68表達降低(P0.05)。與Control組比較,OGD/R組細胞上清液TNF-α濃度增加(P0.01),與OGD/R組比較,1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組細胞上清液TNF-α濃度均降低(P0.05)。6.Dex對OGD/R BV2細胞NF-κB表達及活化影響與Control組比較,OGD/R組BV2細胞NF-κB p65、p-NF-κB p65表達增加(P0.01)。與OGD/R組比較,1μM Dex+OGD/R組、10μM Dex+OGD/R組NF-κB p65表達無顯著差異(P0.05),10μM Dex+OGD/R組細胞p-NF-κB p65表達減少(P0.05)。結(jié)論:右美托咪定通過抑制小膠質(zhì)細胞活化減輕大鼠腦缺血再灌注損傷發(fā)揮腦保護作用,可能與其抑制小膠質(zhì)細胞NF-κB活化有關(guān)。
【圖文】：

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文待測標本吸光度代入標準曲線計，采用 SPSS 24.0 統(tǒng)計軟件，方用 LSD 檢驗，方差不齊時行 KruO 模型梗死灶，Sham 組無白色梗死區(qū)，

組別 樣本數(shù) longa 評分Sham 組 10 0±0I/R 組 10 2.60±0.52aDex+I/R 組 10 1.90±0.57ba：P<0.01，與 Sham 組比較；b：P<0.05，與 I/R 組比較2.2.3 右美托咪定降低腦缺血再灌注大鼠腦組織病理損傷程度在光鏡下觀察 HE 染色切片標本梗側(cè)大腦皮層病理改變。Sham組：細胞排列有細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細胞核圓形，核仁清晰，胞漿均勻淡染，細胞周圍間隙致密。組：腦組織著色淺，細胞數(shù)量減少，，排列紊亂，大量細胞壞死，細胞胞體縮小，胞固縮或碎裂，細胞呈空泡樣變性，間質(zhì)水腫疏松。Dex+I/R 組：細胞壞死程度較 組減輕，細胞核部分固縮，少量細胞呈空泡樣變性，間質(zhì)水腫減輕，說明右美托咪干預(yù)減輕腦缺血再灌注后病理損傷，見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R614;R-332

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