發(fā)布時間：2020-05-26 14:59

【摘要】：多房棘球絳蟲(Echinococcus multilocularis)中絳期幼蟲(泡狀棘球蚴)在人體內(nèi)以類似腫瘤的方式持續(xù)地增殖發(fā)育,引發(fā)嚴重的人獸共患泡狀棘球蚴病(Alveolar echinococcosis)。泡狀棘球蚴體內(nèi)始終保有一定數(shù)量的成體干細胞——生發(fā)細胞,生發(fā)細胞的維持對泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)的生長發(fā)育至關(guān)重要。表皮生長因子受體(EGFR)介導(dǎo)的EGFR信號通路是干細胞維持及干細胞功能調(diào)控的重要通路之一,在進化上具有高度的保守性。本文中主要利用DAPI染色、EdU染色、TUNEL染色、caspase3酶活測定、掃描電鏡觀察、透射電鏡觀察等技術(shù),從以下三個方面探究了 EGFR信號通路在泡狀棘球蚴生發(fā)細胞維持中的機制:(1)抑制EGFR信號通路能誘導(dǎo)泡狀棘球蚴細胞發(fā)生凋亡。泡狀棘球蚴細胞出現(xiàn)凋亡小體,總蛋白中caspase3酶活顯著提高,生發(fā)層細胞從角皮層脫落,生發(fā)層出現(xiàn)損害。(2)抑制EGFR信號通路能誘導(dǎo)泡狀棘球蚴生發(fā)細胞凋亡。EGFR抑制劑BIBW2992與生發(fā)細胞凋亡有濃度梯度效應(yīng)關(guān)系,抑制EGFR信號通路可導(dǎo)致生發(fā)細胞減少。(3)EGFR下游的PI3K/AKT信號通路可能參與了BIBW2992誘導(dǎo)的泡狀棘球蚴細胞凋亡,而MAPK/ERK信號通路和mTOR在這一過程中并未發(fā)揮重要作用。本課題組之前的研究表明EGFR信號通路參與調(diào)控泡狀棘球蚴生發(fā)細胞的增殖和自我更新,本論文研究表明EGFR信號通路同時還參與維持生發(fā)細胞存活。因而EGFR信號通路通過這兩方面協(xié)同調(diào)控生發(fā)細胞功能和維持生發(fā)細胞的細胞群數(shù)量,繼而影響泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)的生長發(fā)育。本研究對EGFR信號通路在生發(fā)細胞功能調(diào)控和維持以及泡狀棘球蚴生長發(fā)育中的作用進行了進一步深入研究,有助于深入理解泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)生長發(fā)育的機制,同時為今后治療泡狀棘球蚴病的新型藥物研發(fā)奠定了一定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ２．３邋Ｔｈｅ邋ｐｏｒｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋ｔｏｔａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋Ｅ．邋ｍｕｌｔｉｌｏｃｎｌａｒｉｓｉｓ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｏｆ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＢＩＢ邋Ｗ２９９２逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號通路后，ＤＡＰＩ染色顯示（如圖２．２），逡逑和對照組相比，３個實驗組出現(xiàn)類似凋亡的現(xiàn)象，如出現(xiàn)凋亡小體（如圖２．２Ｂ，逡逑圖２．２Ｃ，圖２．２Ｄ中白色箭頭所示），說明泡狀棘球蚴細胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號通路后，統(tǒng)計凋亡細胞數(shù)量和細胞逡逑總數(shù)，并且計算凋亡細胞占細胞總數(shù)的百分比，結(jié)果顯示（如圖２．３），對照組逡逑凋亡細胞占總細胞數(shù)的比例為０．９９％±０．３４°／0，２００ｎＭＢＩＢＷ２９９２處理組，比例逡逑為邋１．１１％邋±邋０．３８％，，５００邋ｎＭ邋ＢＩＢＷ２９９２邋處理組比例為邋１．５０％邋±邋０．６６％，２ｐＭ逡逑ＢＩＢＷ２９９２處理組比例為１．９２％±０．９０％，隨著ＢｍＷ２９９２濃度的上升，泡狀棘逡逑球蚴凋亡細胞占細胞總數(shù)的比例也上升。逡逑該實驗說明抑制ＥＧＦＲ信號通路后泡狀棘球蚴細胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑２．１．２．２不同時間相同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號通路對泡狀棘球蚴凋亡逡逑的影響逡逑用相同濃度（２邋＾Ｍ）邋ＢＩＢＷ２９９２分別處理泡狀棘球蝴２天和７天

邐ＩＩ逡逑Ｋ１５邋１邐N邐ＩＩ邐■逡逑｜邋ｉ邐ｉ邐１１逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邋２００邋ｎＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ邋５００邋ｎＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ邋２邋ｕＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ逡逑圖２．３不同濃度ＢＩＢＷ２９９２處理后凋亡細胞數(shù)占細胞總數(shù)比例逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２．３邋Ｔｈｅ邋ｐｏｒｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋ｔｏｔａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋Ｅ．邋ｍｕｌｔｉｌｏｃｎｌａｒｉｓｉｓ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｏｆ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＢＩＢ邋Ｗ２９９２逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號通路后，ＤＡＰＩ染色顯示（如圖２．２），逡逑和對照組相比，３個實驗組出現(xiàn)類似凋亡的現(xiàn)象，如出現(xiàn)凋亡小體（如圖２．２Ｂ，逡逑圖２．２Ｃ，圖２．２Ｄ中白色箭頭所示），說明泡狀棘球蚴細胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號通路后，統(tǒng)計凋亡細胞數(shù)量和細胞逡逑總數(shù)，并且計算凋亡細胞占細胞總數(shù)的百分比，結(jié)果顯示（如圖２．３），對照組逡逑凋亡細胞占總細胞數(shù)的比例為０．９９％±０．３４°／0，２００ｎＭＢＩＢＷ２９９２處理組，比例逡逑為邋１．１１％邋±邋０．３８％，５００邋ｎＭ邋ＢＩＢＷ２９９２邋處理組比例為邋１．５０％邋±邋０．６６％，２ｐＭ逡逑ＢＩＢＷ２９９２處理組比例為１．９２％±０．９０％
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R383.33

【參考文獻】

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本文編號：2682015