【摘要】：沙眼衣原體感染是全球性公共衛(wèi)生問題之一,所致性病已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)最常見的細菌性傳播疾病。沙眼衣原體生殖道感染多呈慢性和隱匿性,對于部分患者,感染可上升至上生殖道,造成病理損傷,引起輸卵管纖維化和輸卵管積水,最終導(dǎo)致異位妊娠或不孕。此外,臨床和動物模型研究發(fā)現(xiàn)宿主感染衣原體后的感染過程及結(jié)局存在個體差異。衣原體進入宿主細胞后可被快速感知進而引發(fā)炎癥反應(yīng)。然而,適度的炎癥有利于宿主抵抗衣原體感染,而過度的炎癥反應(yīng)可引起組織病理損傷。從臨床和實驗動物可以得出,沙眼衣原體感染引起的炎癥反應(yīng)是其致病機制的基礎(chǔ)。其中,局部組織的中性粒細胞等急、慢性炎性細胞浸潤與生殖道組織病理損傷和炎癥反應(yīng)密切相關(guān),炎性介質(zhì)如IL-1β,TNF-α等,在該進程中起重要作用。衣原體慢性感染所引起的免疫病理損傷也是疫苗開發(fā)中最為棘手的問題。顆粒蛋白前體(Progranulin,PGRN),是一種在多種組織廣泛表達的多功能分泌性生長因子,如神經(jīng)組織、骨組織、生殖道組織等。研究表明,PGRN在多種急、慢性炎癥性疾病,如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等,發(fā)揮重要的調(diào)控作用。近來有研究顯示PGRN在急性感染性疾病中發(fā)揮重要保護作用,但人們對其在慢性感染性疾病進程中的作用知之甚少,特別是對免疫病理的影響及機制。因此,本研究旨在探討PGRN在衣原體生殖道感染中的作用,尤其是對慢性感染所致上生殖道炎性病理損傷的影響。第一部分:PGRN在易感性不同小鼠衣原體生殖道感染模型中的表達特點目的:比較PGRN在遺傳背景不同小鼠衣原體生殖道感染時的表達差異,探討PGRN與生殖道感染所致炎性病理損傷的關(guān)系。方法:選取對衣原體敏感性不同的C57BL/6(C57)小鼠和C3H/HeN(C3H)小鼠,陰道接種衣原體(Chlamydia muridarum,C.muridarum)構(gòu)建鼠生殖道感染模型。觀察小鼠一般情況,檢測小鼠陰道分泌物中衣原體包涵體形成單位(IFUs);通過肉眼對生殖道組織病變觀察和顯微鏡下對組織HE染色結(jié)果分析,比較兩組小鼠的生殖道組織病理變化。在感染后不同時間點,采用ELISA和實時定量PCR分別檢測陰道分泌物中前炎性細胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌以及上生殖道局部組織中上述細胞因子mRNA的表達。同時,檢測PGRN蛋白在兩種小鼠陰道分泌物中的表達,以及上生殖道組織中PGRNmRNA的表達。結(jié)果:與C57小鼠相比,C3H小鼠陰道分泌物中的載菌量較高,且衣原體清除時間延長。自感染14天開始,C3H小鼠輸卵管組織有更多的炎性細胞浸潤,同時炎性細胞因子IL-1β和TNF-α在陰道分泌物及上生殖道組織中的表達顯著增加。感染后56天,C3H小鼠輸卵管積水?dāng)U張發(fā)生率更高、程度更重。兩種品系小鼠陰道分泌物和上生殖道組織中的PGRN表達在感染早期均顯著升高,并隨病情慢性化逐漸呈下降趨勢。自感染后14天至56天,C3H小鼠的PGRN水平均低于C57小鼠。兩組小鼠的PGRN表達與輸卵管病理炎性評分及擴張評分均呈負(fù)相關(guān),但在C3H小鼠更為明顯。結(jié)論:在衣原體生殖道感染時,C3H小鼠清除感染時間更長、上生殖道病理損傷更重,是易感表型。衣原體感染誘導(dǎo)生殖道局部PGRN表達升高并隨病程慢性化而逐漸降低,PGRN表達水平與輸卵管炎性病理損傷呈負(fù)相關(guān),提示在衣原體生殖道感染中,PGRN可能具有潛在的保護作用。第二部分:PGRN在衣原體生殖道感染中的作用目的:明確PGRN在小鼠衣原體生殖道感染中的作用。方法:采用PGRN敲除(KO)鼠和野生型小鼠,陰道接種衣原體C.muridarum。感染后不同時間點檢測小鼠陰道分泌物中IFUs;通過肉眼直接觀察和鏡下對組織HE染色結(jié)果分析,比較兩組小鼠的生殖道組織病理變化情況。分別采用ELISA和實時定量PCR方法檢測陰道分泌物中IL-1β、TNF-α和IL-6的蛋白分泌以及上生殖道局部組織中上述細胞因子mRNA的表達。制備小鼠腹腔巨噬細胞,建立C.muridaru 體外細胞感染模型,觀察外源重組PGRN蛋白加入后前炎性細胞因子的表達情況。結(jié)果:肉眼及鏡下觀察發(fā)現(xiàn),PGRNKO鼠生殖道病變更為嚴(yán)重,尤其是輸卵管積水?dāng)U張發(fā)生率及程度較野生型小鼠顯著增加,炎性細胞浸潤更嚴(yán)重。但PGRN KO鼠生殖道內(nèi)衣原體Cmuridar.載量及持續(xù)時間與野生型小鼠相比無顯著差別。PGRNKO鼠陰道分泌物及上生殖道組織中IL-1β、TNF-α和IL-6的表達較野生型小鼠顯著提高。在體外衣原體巨噬細胞感染模型中,重組PGRN蛋白處理組的IL-1β、TNF-α和IL-6表達較對照組顯著降低。結(jié)論:在衣原體生殖道感染中,PGRN缺失導(dǎo)致小鼠上生殖道組織炎性病理損傷明顯加重,但對衣原體的清除速率無顯著影響。PGRN可通過抑制促炎因子分泌減輕衣原體感染所致輸卵管炎性病損。本研究首次報道了PGRN對衣原體所致輸卵管炎性病理損傷具有一定的保護作用,為衣原體生殖道感染所致疾病的防治提供了新思路和實驗依據(jù)。
【圖文】：

正常未感染小鼠生殖道組織無充血水腫、子宮角和輸卵管呈細長狀（圖逡逑２Ａ）。在感染后１４天，Ｃ５７和Ｃ３Ｈ小鼠的生殖道組織均可見明顯充血和水腫，逡逑子宮角擴張伴有血管擴張充血（圖２Ｂ），兩種小鼠的組織病理改變基本相似。感逡逑染后４２天，肉眼可見部分小鼠單側(cè)或雙側(cè)子宮角擴張；輸卵管腫脹，腔內(nèi)充盈逡逑有透明液體（圖２Ｃ）。感染后５６天，兩組小鼠輸卵管擴張和積水更明顯（圖２Ｄ），逡逑其中，Ｃ３Ｈ小鼠的輸卵管積水尤其是雙側(cè)輸卵管積水的發(fā)生率明顯高于Ｃ５７小逡逑鼠（表１）。上述結(jié)果表明，衣原體感染時，與Ｃ５７小鼠相比，Ｃ３Ｈ小鼠的上生逡逑殖道病變更為嚴(yán)重。逡逑２７逡逑

２．邋２生殖道組織顯微鏡下觀察結(jié)果逡逑進一步對生殖道組織標(biāo)本固定切片后ＨＥ染色，進行鏡下觀察。感染后１４逡逑天，兩組小鼠輸卵管均可觀察到病理改變（圖３Ａ），與Ｃ５７小鼠相比，Ｃ３Ｈ小逡逑鼠的組織病理變化較重，輸卵管粘膜及粘膜下層炎性細胞浸潤較多，部分小鼠管逡逑腔內(nèi)可見有膿性分泌物，兩組之間的輸卵管炎癥評分差異明顯（ｐ＜０．０１，圖３Ｂ）。逡逑衣原體感染后５６天，病變輸卵管的管腔明顯擴張，管腔內(nèi)大量炎性滲出。輸卵逡逑管上皮部分脫落，部分上皮內(nèi)中性粒細胞等浸潤，上皮表面纖毛減少，，上皮下間逡逑質(zhì)內(nèi)血管充血擴張，伴周圍淋巴細胞、漿細胞及中性粒細胞等急慢性炎細胞浸潤逡逑及纖維細胞增生（圖３Ａ）。其中，Ｃ３Ｈ小鼠輸卵管的炎性細胞浸潤和管腔擴張較逡逑Ｃ５７更為嚴(yán)重（ｐ＜０．０５，圖３Ｂ；邋ｐ＜０．０５，圖３Ｃ）。上述結(jié)果與肉眼觀察結(jié)果相符，逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R374

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本文編號：2681181