【摘要】：目的:通過3日齡新生SD大鼠建立未成熟大鼠缺氧缺血腦損傷模型,觀察腦組織內(nèi)EPOR被阻斷后,重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)對分裂原活化抑制劑/細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(mitogen-activatedprotein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信號通路的影響,一定程度上闡明EPOR在rh-EPO通過ERK信號通路促早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷模型鼠腦血管生成中的上游關(guān)鍵作用。方法:本實驗采用合籠分娩后選取新生3日齡清潔級新生SD大鼠,采用隨機(jī)數(shù)余分組法分為假手術(shù)組(Sham)、缺血缺氧血組(hypoxia-ischemia,HI)、缺血缺氧+EPO組、缺血缺氧+EPOR拮抗劑組(ab193235),缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組,建立腦室周圍白質(zhì)損傷(Periventricular white matter damage,PWMD)動物模型。分組處理后60分鐘,90分鐘,每組取不少于6只,異氟烷吸入麻醉后斷頭取腦,游離出大鼠右側(cè)大腦半球,免疫印跡(Western Blot)法檢測總促紅細(xì)胞生成素受體(erythropoietin receptor,EPOR)、磷酸化促紅細(xì)胞生成素受體(phosphorylated erythropoietin receptor,p-EPOR)、總細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinas)及磷酸化的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinas,p-ERK)蛋白。分組處理后2d、4d,每組取不少于6只,游離出幼鼠右側(cè)大腦半球,Western Blot法檢測白細(xì)胞分化抗原34(cluster of differentiation34,CD34)、血管內(nèi)皮生長因子受體2(vascular endothelial growth factor receptor2,VEGFR2)蛋白。實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法檢測血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)。結(jié)果:分組處理完成后60和90分鐘,仔鼠腦組織EPOR蛋白表達(dá)在假手術(shù)組呈較低水平;在缺血缺氧組、缺血缺氧+EPO組和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組表達(dá)增加,高于假手術(shù)組;在缺血缺氧+EPO組高于缺血缺氧組和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組;在缺血缺氧+EPOR拮抗劑組低于缺血缺氧組;差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F值分別為30.154和20.265,P值均0.05)。p-EPOR和p-ERK,以及分組處理完成后2和4天VEGFR2、CD34蛋白,在各組的表達(dá)差異與EPOR一致,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05);且分組處理完成后4天,VEGFR2表達(dá)在缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組低于缺血缺氧組(P0.05)。完成分組處理后60和90分鐘,各組仔鼠腦組織ERK表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(F值分別為1.117和0.734,P值均0.05)。VEGF mRNA,分組處理后2天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與HI組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);分組處理后4天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與各組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。Ang-1 mRNA,分組處理后2、4天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與HI組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:3日齡未成熟新生大鼠缺血缺氧后腦損傷符合早產(chǎn)兒缺血缺氧腦白質(zhì)損傷的神經(jīng)病理學(xué)改變。在早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷模型鼠中EPOR被阻斷后,影響重組人促紅細(xì)胞生成素通過ERK信號通路調(diào)節(jié)腦白質(zhì)損傷后腦白質(zhì)部位的CD34、VEGF、Ang-1和VEGFR2的表達(dá)。
【圖文】：

圖 1：右側(cè)頸總動脈游離并結(jié)扎 圖 2：混合氣體通入在缺氧容器中進(jìn)行缺氧處理1.2.1.3 立體定位試注射美藍(lán)觀察缺血缺氧術(shù)后，異氟烷吸入麻醉后，固定于腦立體定位儀上, 75% 醫(yī)用酒精皮膚消毒 ,作一切口暴露前囟點 ,立體定位于右側(cè)腦室 (坐標(biāo) :前囟點后 1.0mm, 側(cè) 1.0mm,深 2.5mm), 經(jīng)幼鼠腦定位儀將美藍(lán)經(jīng)微量注射器緩慢入腦內(nèi)持續(xù)約 5 分鐘，然后留針1-2 分鐘緩慢拔出。縫合切口，再次消毒縫合切口。術(shù)后 2 小時，異氟烷吸入麻醉后冰上斷頭取腦，游離出幼鼠右側(cè)大半球觀察注射的情況。見圖 3、4。

圖 1：右側(cè)頸總動脈游離并結(jié)扎 圖 2：混合氣體通入在缺氧容器中進(jìn)行缺氧處理1.2.1.3 立體定位試注射美藍(lán)觀察缺血缺氧術(shù)后，異氟烷吸入麻醉后，固定于腦立體定位儀上, 75% 醫(yī)用酒精皮膚消毒 ,作一切口暴露前囟點 ,立體定位于右側(cè)腦室 (坐標(biāo) :前囟點后 1.0mm, 側(cè) 1.0mm,深 2.5mm), 經(jīng)幼鼠腦定位儀將美藍(lán)經(jīng)微量注射器緩慢入腦內(nèi)持續(xù)約 5 分鐘，，然后留針1-2 分鐘緩慢拔出。縫合切口，再次消毒縫合切口。術(shù)后 2 小時，異氟烷吸入麻醉后冰上斷頭取腦，游離出幼鼠右側(cè)大半球觀察注射的情況。見圖 3、4。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R-332;R722.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2676820