【摘要】：目的:通過3日齡新生SD大鼠建立未成熟大鼠缺氧缺血腦損傷模型,觀察腦組織內EPOR被阻斷后,重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)對分裂原活化抑制劑/細胞外信號調節(jié)激酶(mitogen-activatedprotein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信號通路的影響,一定程度上闡明EPOR在rh-EPO通過ERK信號通路促早產兒腦白質損傷模型鼠腦血管生成中的上游關鍵作用。方法:本實驗采用合籠分娩后選取新生3日齡清潔級新生SD大鼠,采用隨機數余分組法分為假手術組(Sham)、缺血缺氧血組(hypoxia-ischemia,HI)、缺血缺氧+EPO組、缺血缺氧+EPOR拮抗劑組(ab193235),缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組,建立腦室周圍白質損傷(Periventricular white matter damage,PWMD)動物模型。分組處理后60分鐘,90分鐘,每組取不少于6只,異氟烷吸入麻醉后斷頭取腦,游離出大鼠右側大腦半球,免疫印跡(Western Blot)法檢測總促紅細胞生成素受體(erythropoietin receptor,EPOR)、磷酸化促紅細胞生成素受體(phosphorylated erythropoietin receptor,p-EPOR)、總細胞外信號調節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinas)及磷酸化的細胞外信號調節(jié)激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinas,p-ERK)蛋白。分組處理后2d、4d,每組取不少于6只,游離出幼鼠右側大腦半球,Western Blot法檢測白細胞分化抗原34(cluster of differentiation34,CD34)、血管內皮生長因子受體2(vascular endothelial growth factor receptor2,VEGFR2)蛋白。實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法檢測血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)。結果:分組處理完成后60和90分鐘,仔鼠腦組織EPOR蛋白表達在假手術組呈較低水平;在缺血缺氧組、缺血缺氧+EPO組和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組表達增加,高于假手術組;在缺血缺氧+EPO組高于缺血缺氧組和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組;在缺血缺氧+EPOR拮抗劑組低于缺血缺氧組;差異均有統(tǒng)計學意義(F值分別為30.154和20.265,P值均0.05)。p-EPOR和p-ERK,以及分組處理完成后2和4天VEGFR2、CD34蛋白,在各組的表達差異與EPOR一致,差異均有統(tǒng)計學意義(P值均0.05);且分組處理完成后4天,VEGFR2表達在缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗劑組低于缺血缺氧組(P0.05)。完成分組處理后60和90分鐘,各組仔鼠腦組織ERK表達差異均無統(tǒng)計學意義(F值分別為1.117和0.734,P值均0.05)。VEGF mRNA,分組處理后2天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與HI組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學差異(P0.01);分組處理后4天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與各組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。Ang-1 mRNA,分組處理后2、4天,HI組與Sham組,HI+EPOR拮抗劑組與HI組,HI+rh-EPO組與各組,HI+EPOR拮抗劑+rh-EPO組與HI+EPOR拮抗劑組間,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:3日齡未成熟新生大鼠缺血缺氧后腦損傷符合早產兒缺血缺氧腦白質損傷的神經病理學改變。在早產兒腦白質損傷模型鼠中EPOR被阻斷后,影響重組人促紅細胞生成素通過ERK信號通路調節(jié)腦白質損傷后腦白質部位的CD34、VEGF、Ang-1和VEGFR2的表達。
【圖文】：

圖 1：右側頸總動脈游離并結扎 圖 2：混合氣體通入在缺氧容器中進行缺氧處理1.2.1.3 立體定位試注射美藍觀察缺血缺氧術后，異氟烷吸入麻醉后，固定于腦立體定位儀上, 75% 醫(yī)用酒精皮膚消毒 ,作一切口暴露前囟點 ,立體定位于右側腦室 (坐標 :前囟點后 1.0mm, 側 1.0mm,深 2.5mm), 經幼鼠腦定位儀將美藍經微量注射器緩慢入腦內持續(xù)約 5 分鐘，然后留針1-2 分鐘緩慢拔出�？p合切口，再次消毒縫合切口。術后 2 小時，異氟烷吸入麻醉后冰上斷頭取腦，游離出幼鼠右側大半球觀察注射的情況。見圖 3、4。

圖 1：右側頸總動脈游離并結扎 圖 2：混合氣體通入在缺氧容器中進行缺氧處理1.2.1.3 立體定位試注射美藍觀察缺血缺氧術后，異氟烷吸入麻醉后，固定于腦立體定位儀上, 75% 醫(yī)用酒精皮膚消毒 ,作一切口暴露前囟點 ,立體定位于右側腦室 (坐標 :前囟點后 1.0mm, 側 1.0mm,深 2.5mm), 經幼鼠腦定位儀將美藍經微量注射器緩慢入腦內持續(xù)約 5 分鐘，，然后留針1-2 分鐘緩慢拔出。縫合切口，再次消毒縫合切口。術后 2 小時，異氟烷吸入麻醉后冰上斷頭取腦，游離出幼鼠右側大半球觀察注射的情況。見圖 3、4。
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R-332;R722.6

【參考文獻】

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本文編號：2676820