【摘要】：目的:食欲素A(orexin-A)是下丘腦分泌的參與攝食的重要腦腸肽之一,攝食與肥胖的發(fā)生發(fā)展有密不可分的聯(lián)系。本研究旨在探討orexin-A對正常大鼠、高脂飲食誘導(dǎo)肥胖(DIO)大鼠及肥胖抵抗(DR)大鼠基底內(nèi)側(cè)杏仁核(BMA)胃牽張敏感(GD)神經(jīng)元興奮性及攝食量的影響及潛在機(jī)制。方法:選取健康雄性Wistar大鼠,高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建肥胖(DIO)和肥胖抵抗(DR)大鼠模型。采用細(xì)胞外記錄神經(jīng)元放電方法,觀察orexin-A以及μ阿片受體拮抗劑納洛酮對正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠BMA GD神經(jīng)元放電活動的影響;通過腦核團(tuán)置管及核團(tuán)微量注射藥物,比較和分析orexin-A和納洛酮對正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠攝食量的影響及潛在機(jī)制;采用免疫組化染色方法,觀察正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)orexin-1受體(OX-1R)和μ阿片受體免疫陽性細(xì)胞的分布;應(yīng)用Real-time PCR和Elisa方法,檢測正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)OX-1R和μ阿片受體的m RNA和蛋白含量的表達(dá)。結(jié)果:(1)BMA微量注射orexin-A,正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)GD敏感神經(jīng)元放電頻率均顯著增加(P0.01),該效應(yīng)可被OX-1R受體拮抗劑SB-334867完全阻斷,納洛酮可部分阻斷orexin-A該促放電效應(yīng);與正常大鼠相比,orexin-A對DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)GD-E(P0.05)或GD-I(P0.05)神經(jīng)元的促放電作用顯著增強(qiáng),但DIO大鼠和DR大鼠間比較無顯著差異(P0.05);納洛酮可顯著抑制上述三組大鼠BMA內(nèi)GD-E和GD-I神經(jīng)元放電頻率,且與正常大鼠相比,納洛酮對DIO大鼠GD-E和GD-I神經(jīng)元的抑制作用顯著增強(qiáng)(P0.05),對DR大鼠GD-E和GD-I神經(jīng)元的抑制作用強(qiáng)于DIO大鼠(P0.05)。結(jié)果提示,orexin-A可能參與胃傳入信息調(diào)控,該效應(yīng)可能經(jīng)OX-1R信號通路實(shí)現(xiàn),且μ阿片受體信號可能也參與該影響過程。(2)BMA微量注射orexin-A,正常大鼠、DIO大鼠和DR大鼠0-2 h攝食量顯著增加(P0.01),但對大鼠2-4 h攝食量無顯著影響(P0.05)。與正常大鼠組相比,BMA微量注射orexin-A,DIO大鼠和DR大鼠0-2 h攝食量顯著增加(P0.05),但DIO大鼠和DR大鼠間比較攝食量無明顯差異(P0.05)。預(yù)先BMA注射SB-334867可阻斷orexin-A對大鼠促攝食作用(P0.05)。BMA微量注射納洛酮,可顯著抑制大鼠0-2 h攝食量(P0.05),且該效應(yīng)在DR大鼠顯著強(qiáng)于DIO大鼠(P0.05)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),納洛酮可部分阻斷orexin-A促大鼠攝食效應(yīng)(P0.05)。提示,orexin-A可能通過OX-1R信號通路參與攝食調(diào)控,μ阿片受體信號可能也參與影響了此過程。(3)熒光免疫組化研究顯示,與正常大鼠相比,DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)OX-1R免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)均顯著增加(P0.05),但DIO大鼠與DR大鼠相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DIO大鼠和DR大鼠BMA內(nèi)μ阿片受體免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞的表達(dá)也顯著高于正常大鼠(P0.05),且在DR大鼠,BMA內(nèi)μ阿片受體免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞的表達(dá)顯著高于DIO大鼠(P0.05)。提示,高脂飲食可能通過誘導(dǎo)大鼠BMA內(nèi)orexins受體表達(dá)改變進(jìn)而影響大鼠攝食。(4)Real-time PCR研究結(jié)果顯示,DIO大鼠和DR大鼠BMA OX-1R m RNA表達(dá)均顯著高于正常大鼠(P0.05),但DIO大鼠和DR大鼠間比較無顯著差異(P0.05);DR大鼠μ阿片受體m RNA含量顯著高于DIO大鼠(P0.05),且DIO或DR大鼠μ阿片受體m RNA表達(dá)均顯著高于正常大鼠(P0.05)。提示,OX-1R或μ阿片受體信號通路可能參與這三組大鼠BMA神經(jīng)元興奮性和攝食差異性調(diào)控。(5)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,DIO大鼠和DR大鼠BMA OX-1R蛋白含量均顯著高于正常大鼠(P0.05),但DIO大鼠和DR大鼠間比較無顯著差異(P0.05);BMA內(nèi)μ阿片受體蛋白表達(dá)高低依次為DR大鼠、DIO大鼠及正常大鼠(P0.05)。本結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)這三組大鼠BMA神經(jīng)元興奮性和攝食差異可能與中樞OX-1R或μ阿片受體表達(dá)量改變有關(guān)。結(jié)論:BMA orexin-A通過OX-1R信號通路參與正常、肥胖及肥胖抵抗大鼠胃牽張傳入信息和攝食調(diào)控,μ阿片受體信號通路可能也參與了該影響過程。orexin-A對正常、肥胖及肥胖抵抗大鼠攝食量調(diào)控可能與OX-1R或μ阿片受體表達(dá)差異有關(guān)。
【圖文】：

10圖 1 Orexin-A 對正常大鼠 BMAGD 敏感神經(jīng)元放電活動的影響B(tài)MA 注射 orexin-A 可顯著增加正常大鼠 GD-E 神經(jīng)元（A 和 C）和 GD-I 神經(jīng)元（B 和 D）的放電頻率，BMA 內(nèi)預(yù)先注射 orexin-A 受體拮抗劑 SB-334867，其可完全阻斷 orexin-A 誘導(dǎo)的促放電效應(yīng)（A 和 B）；預(yù)先 BMA 注射阿片受體拮抗劑納洛酮，orexin-A 對 GD-E 或 GD-I 神經(jīng)元的促放電作用可被納洛酮部分阻斷（C 和 D）。BMA 單獨(dú)注射納洛酮，GD 神經(jīng)元放電頻率顯著降低。單獨(dú)注射 SB-334867 對 GD 神經(jīng)元的放電活動無顯著影響。*P<0.05，**P<0.01，與生理鹽水組相比；#P<0.05，##P<0.01，與1Orexin-A 組相比；△P<0.05，與1Orexin-A/naloxone 組相比。GD 敏感神經(jīng)元放電頻率變化率 = 100 ×(給藥后 GD 神經(jīng)元放電頻率  給藥前 GD 神經(jīng)元放電頻率) / (給藥前GD 神經(jīng)元放電頻率)。圖 E 和 F 分別對應(yīng)圖 A、B 和 C、D 的放電頻率百分比圖。Fig. 1 Effects of orexin-A on the firing frequency of BMA GD-responsive neurons in the normal ratsAdministration of orexin-A in the BMA induced a significant increase in neuronal firing frequency of GD-E neurons (A and C) and GD-I neurons (B and D) in the normal rats. Pre-administration of SB-334867 inthe BMA blocked the discharge-promoting effect of orexin-A (A and B); With naloxone pretreatment, theresponses induced by orexin-A were partially abolished (C and D). Naloxone injected alone into the BMAsubstantially decreased firing frequency of GD neurons. SB-334867 alone had no effect on firingfrequency. *P<0.05, **P<0.01, vs. NS group;#P<0.05,##P<0.01, vs.1Orexin-A group; △P<0.

12圖 2 Orexin-A 對 DIO大鼠 BMAGD 敏感神經(jīng)元放電的影響B(tài)MA 注射 orexin-A 可顯著增加 DIO 大鼠 GD-E 神經(jīng)元（A 和 C）和 GD-I 神經(jīng)元（B 和 D）的放電頻率，BMA 內(nèi)預(yù)先注射 orexin-A 受體拮抗劑 SB-334867，其可完全阻斷 orexin-A 誘導(dǎo)的促放電效應(yīng)（A 和 B）；預(yù)先 BMA 注射阿片受體拮抗劑納洛酮，orexin-A 對 GD-E 或 GD-I 神經(jīng)元的促放電作用可被納洛酮部分阻斷（C 和 D）。BMA 單獨(dú)注射納洛酮，GD 神經(jīng)元放電頻率顯著降低。單獨(dú)注射 SB-334867 對 GD 神經(jīng)元的放電活動無顯著影響。*P<0.05，**P<0.01，，與生理鹽水組相比#P<0.05，##P<0.01，與1Orexin-A 組相比；△P<0.05，與1Orexin-A/naloxone 組相比。GD 敏感神經(jīng)元放電頻率變化率 = 100 ×(給藥后 GD 神經(jīng)元放電頻率  給藥前 GD 神經(jīng)元放電頻率) / (給藥前GD 神經(jīng)元放電頻率)。圖 E 和 F 分別對應(yīng)圖 A、B 和 C、D 的放電頻率百分比圖。Fig. 2 Effects of orexin-A on the firing frequency of BMA GD-responsive neurons in DIO ratsAdministration of orexin-A in the BMA induced a significant increase in neuronal firing frequency of GD-E neurons (A and C) and GD-I neurons (B and D) in DIO rats. Pre-administration of SB-334867 in theBMA blocked the discharge-promoting effect of orexin-A (A and B); With naloxone pretreatment, theresponses induced by orexin-A were partially abolished (C and D). Naloxone injected alone into the BMAsubstantially decreased firing frequency of GD neurons. SB-334867 alone had no effect on firingfrequency. *P<0.05, **P<0.01, vs. NS group;#P<0.05,##P<0.01, vs.1Orexin-A group; △P<0.05, vs1Orexin-A
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號：2668101