發(fā)布時間：2020-05-17 00:03

【摘要】：目的本研究旨在通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方法用人生長激素(Human growth hormone,hGH)和人胸腺素β4(Human Thymosin beta 4,hTβ4)基因真核過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(hADSCs),并檢測其在hADSCs中的表達(dá)以及對其生物學(xué)特性的影響,為研究組織工程皮膚探索新的種子來源。方法收集我院手術(shù)病人廢棄正常脂肪組織標(biāo)本,分離培養(yǎng)原代hADSCs,進(jìn)行細(xì)胞鑒定,并傳代。慢病毒轉(zhuǎn)染法制備hGH與hTβ4過表達(dá)hADSCs細(xì)胞系。病毒載體中攜帶嘌呤霉素(Puromysin)抗性基因,使用含Puromysin的培養(yǎng)基篩選感染后的細(xì)胞來以到穩(wěn)轉(zhuǎn)株。對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性檢測,分別使用RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后的hADSCs在基因水平上的變化、Elisa和Weston-blot檢測轉(zhuǎn)染后的hADSCs在蛋白水平上的變化。結(jié)果經(jīng)細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定,hADSCs表面標(biāo)志物CD90和CD44呈陽性表達(dá),而CD34呈陰性。RT-PCR檢測結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染hGH的hADSCs較未轉(zhuǎn)染的hADSCs,hGH表達(dá)量提高1.78倍,轉(zhuǎn)染hTβ4的hADSCs較未轉(zhuǎn)染的hADSCs,hTβ4表達(dá)量提高1.65倍。Weston-Blot條帶灰度分析數(shù)據(jù)顯示過表達(dá)hGH的hADSCs hGH表達(dá)量高于hADSCs;過表達(dá)hTβ4的hADSCs hTβ4表達(dá)量高于hADSCs;過表達(dá)hGH的hADSCs和過表達(dá)hTβ4的hADSCs的ERK表達(dá)量高于hADSCs;過表達(dá)hGH的hADSCs和過表達(dá)hTβ4的hADSCs的p-ERK表達(dá)量高于hADSCs。Elisa結(jié)果顯示hGH-hADSCs上清蛋白含量顯著高于hADSCs上清蛋白(*P0.01);hGH-hADSCs胞漿蛋白含量顯著高于hADSCs胞漿蛋白含量(**P0.01);hTβ4-hADSCs上清蛋白含量顯著高于hADSCs上清蛋白含量(*P0.01);hTβ4-hADSCs胞漿蛋白含量顯著高于hADSCs胞漿蛋白含量(**P0.01)。結(jié)論(1)慢病毒轉(zhuǎn)染法可以成功構(gòu)建hADSCs過表達(dá)hGH與hTβ4細(xì)胞系。(2)hADSCs過表達(dá)hGH與hTβ4細(xì)胞系較hADSCs細(xì)胞系的hGH與hTβ4表達(dá)量顯著提高。
【圖文】：

圖 2.1 不同代數(shù) hADSCs 的生長情況（A）原代 hADSCs；(B)第 4 代 hADSCs（100×）結(jié)果如圖 2.1 所示：細(xì)胞密度均勻。原代 hADSCs 形態(tài)偏圓，旋渦狀分布，第 4 代的 hADSCs態(tài)較細(xì)長，以梭型的為主。2.2 hADSCs 增殖能力的檢測

（A）原代 hADSCs；(B)第 4 代 hADSCs（100×）結(jié)果如圖 2.1 所示：細(xì)胞密度均勻。原代 hADSCs 形態(tài)偏圓，，旋渦狀分布，第 4 代的 hADS形態(tài)較細(xì)長，以梭型的為主。2.2 hADSCs 增殖能力的檢測
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2667570