【摘要】：第一部分兔急性心肌梗死后纖維化模型建立目的以新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象建立急性心肌梗死后纖維化模型,并采用對(duì)比術(shù)前術(shù)后心電圖變化及后續(xù)取心肌組織進(jìn)行膠原染色等方法確定模型建立是否成功。方法隨機(jī)選擇同批新西蘭大白兔,經(jīng)麻醉后選用冠狀動(dòng)脈左前降支(Left anterior descending coronary artery,LAD)結(jié)扎誘導(dǎo)建立急性心肌梗死(Myocardial infarction,MI)模型,飼養(yǎng)一個(gè)月后取心肌組織制作病理切片并進(jìn)行膠原染色。結(jié)果術(shù)后心電圖V1導(dǎo)聯(lián)表現(xiàn)為ST段明顯弓背向上抬高,結(jié)扎遠(yuǎn)端心肌呈青紫色,證明兔急性心肌梗死模型成功建立;術(shù)后1月心肌組織HE染色及膠原染色證實(shí)心肌梗死模型成功,表現(xiàn)為梗死區(qū)心肌組織被膠原纖維所代替。結(jié)論采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法可成功建立兔急性心肌梗死后纖維化模型。第二部分CNA35膠原靶向氟碳納米粒體內(nèi)靶向性研究目的制備一種由CNA35介導(dǎo)的新型液-氣相變超聲分子探針(CNA35-PFP NPs),并評(píng)價(jià)其在體內(nèi)的靶向性。方法薄膜水化-聲振法制備包含液態(tài)氟碳的脂質(zhì)納米粒(PFP NPs-Di I),通過碳二亞胺法與CNA35-FITC相連,制備帶熒光的CNA35膠原靶向氟碳納米粒(CNA35-FITC-PFP NPs-Di I)。隨機(jī)選擇同批急性心肌梗死后纖維化模型兔和正常兔,麻醉后經(jīng)耳緣靜脈注射稀釋后的PFP NPs-Di I和CNA35-FITC-PFP NPs-Di I(2m L/kg),1小時(shí)后于避光條件下取出相應(yīng)部位的心肌組織制備冰凍切片,通過DAPI染色進(jìn)行細(xì)胞核定位,并在熒光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行定性觀察。結(jié)果注射CNA35-FITC-PFP NPs-Di I后,急性梗死后心肌纖維化模型組在熒光共聚焦顯微鏡下可觀察到呈綠色熒光的膠原纖維與紅色熒光的脂質(zhì)納米粒球,而在其余三組未能觀察到。結(jié)論CNA35膠原靶向氟碳納米粒(CNA35-PFP NPs)在體內(nèi)能有效與心肌纖維化部位結(jié)合,證實(shí)CNA35-PFP NPs可通過血管內(nèi)皮間隙,并可與纖維化心肌組織的I型膠原特異性結(jié)合,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。第三部分CNA35膠原靶向氟碳納米粒檢測(cè)心肌纖維化的超聲分子顯像研究目的制備一種由CNA35介導(dǎo)的新型液-氣相變超聲分子探針(CNA35-PFP NPs),并評(píng)價(jià)其檢測(cè)心肌纖維化超聲分子成像效果。方法使用超聲診斷儀于二維(B型)模式下定位心尖的位置,并通過左心室長(zhǎng)軸及短軸切面觀察心臟形態(tài)結(jié)構(gòu),初步判斷心肌梗死的部位。記錄觀察到的急性梗死后纖維化模型組心肌厚度、運(yùn)動(dòng)情況與回聲強(qiáng)度后,分別通過耳緣靜脈注射PFP NPs與CNA35-PFP NPs。5分鐘后,記錄各組數(shù)據(jù)以做對(duì)比,然后使用LIFU以3W/cm2功率的在標(biāo)記處進(jìn)行超聲輻射聚焦3分鐘,百勝超聲系統(tǒng)再次用于觀察B型模式和超聲造影(Contrast enhanced ultrasound,CEUS)模式中心肌顯像的變化,并記錄各組數(shù)據(jù)。結(jié)果急性梗死后纖維化模型組在二維超聲模式下可見左室前壁和(或)前間壁間或者右心室前壁處心肌變薄(p0.05),回聲增強(qiáng)(p0.05),提示梗死該部位位于前壁及前間隔,在超聲造影模式下未觀察到顯影增強(qiáng)。CNA35-PFP NPs+LIFU組,經(jīng)LIFU照射后,心肌梗死部位顯示明顯增強(qiáng)的回聲信號(hào)(p0.05),且在CEUS模式下也觀察到了梗死部位的顯影增強(qiáng),而在PFP NPs+LIFU組中,沒有觀察到梗死區(qū)域的顯影增強(qiáng),且CEUS模式下也未觀察到顯影增強(qiáng)。結(jié)論CNA35-PFP NPs可以有效通過血管內(nèi)皮間隙,靶向到達(dá)心肌纖維化部位并與纖維化心肌的I型膠原特異性結(jié)合,經(jīng)LIFU輻照后相變?cè)鰪?qiáng)纖維化心肌組織的超聲顯影。而PFP NPs缺乏靶向性,無法在纖維化心肌組織聚集及增強(qiáng)纖維化心肌的顯影。
【圖文】：

圖 1-1：兔急性心肌梗死造模術(shù)前術(shù)后心電圖：(A) Preoperative and (B) postoperative electrocardiogram ofmyocardial infarction modeling.織學(xué)檢查開胸腔可見明顯的組織粘連，尤其在心臟表面結(jié)扎部正常對(duì)照組相比，，實(shí)驗(yàn)組梗死區(qū)心肌顏色灰白，厚度染色可觀察到梗死區(qū)正常結(jié)構(gòu)破壞。Masson 染色顯示細(xì)胞呈紅色。天狼星紅染色光鏡下顯示膠原纖維為紅且在偏振光顯微鏡下觀察則可發(fā)現(xiàn)呈黃色的 I 型膠原（圖 1-2,1-3）。使用 ImageJ 半定量分析膠原含量可發(fā)用百分比表示，表 1，圖 1-4）遠(yuǎn)大于正常組（P<0.05

2 心肌梗死后心肌纖維化組織與正常組心肌組織膠原染色結(jié)果（標(biāo)尺：5002 Collagen staining results of myocardial fibrosis tissue and normal group mtissue (scale bar:500μm)圖 1-3 偏振光顯微鏡下觀察心肌組織天狼星紅染色結(jié)果（標(biāo)尺：500μm）ure 1-3 Observation of myocardial tissue Sirius red staining under polarizedmicroscope,(A) control and (B) myocardial fibrosis (scale bar:500μm)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R542.23;R-332

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本文編號(hào)：2663575