【摘要】：背景:炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種腸道的慢性非特異性炎癥性疾病,其病因還未明確。內(nèi)質網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress,ERS)參與多種疾病的發(fā)病機制,包括IBD。Cyp4a14是一種肝臟產(chǎn)生的與脂質過氧化及氧化應激密切相關的酶。然而Cyp4a14基因對炎癥性腸病ERS影響仍不清楚。目的:探究ERS相關蛋白在葡聚糖硫酸鈉(dextra sulfate sodium,DSS)誘導的Cyp4a14基因敲除小鼠腸炎模型中的表達及意義。方法:選取6-8周齡,體重為19-25g,健康清潔級129S1/SvJ種系Cyp4a14基因敲除(knockout,KO)和野生型(wild type,WT)雄性小鼠,隨機分為WT對照組、WT DSS組、KO對照組和KO DSS組,每組8只,4只每籠,并適應性喂養(yǎng)1周,確認小鼠健康且適應環(huán)境。對照組自由飲用雙蒸水,DSS組則飲用3.0%DSS溶液。造模周期為6天,第6天造模結束后終止所有干預措施。通過體重變化情況、疾病活動指數(shù)評分(disease activity index,DAI)、結腸長度和HE染色等方法以及白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-αmRNA水平評估腸道炎癥程度,采用實時定量PCR技術檢測小鼠結腸組織內(nèi)質網(wǎng)應激相關蛋白GRP78、IRE1α、XBP1u、XBP1s、IRE1β、PERK、ATF6和CHOP,及肝臟Cyp4a14 mRNA的表達水平,采用免疫組化及western blot法檢測小鼠結腸組織GRP78、ATF6和CHOP蛋白的表達情況,采用western blot法檢測小鼠肝臟Cyp4a14蛋白表達情況。結果:1.WT和KO對照組均無腸炎表現(xiàn),而KO DSS組有輕度腸炎、WT DSS組有重度腸炎。WT和KO DSS組組織病理學評分及DAI評分與對照組相比均顯著增高(均P0.05),且WT DSS組與KO DSS組相比升高更為明顯(P0.05);WT DSS組結腸長度明顯縮短(均P0.05);2.炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平在WT DSS組與KO DSS組表達明顯升高(均P0.05),且IL-6和TNF-αmRNA在WT DSS組比KO DSS組升高更為顯著(P0.05)。3.炎癥組與對照組比較IRE1α、XBP1u和PERK mRNA表達無差異;IRE1βmRNA在WT和KO DSS組表達明顯下調(均P0.05);XBP1s在WT DSS組與WT對照組相比表達降低(P0.05),而ATF6和CHOP mRNA表達升高(均P0.05),但KO DSS組與KO對照組相比無差異。4.Cyp4a14 mRNA及蛋白在WT DSS組肝臟表達明顯下調(均P0.05)。5.WT DSS組GRP78、ATF6和CHOP mRNA及蛋白與WT對照組比較明顯升高(均P0.05)。結論:1.Cyp4a14基因敲除小鼠可以抵抗DSS誘導的腸炎。2.Cyp4a14基因可能通過影響ATF6、CHOP和XBP1s mRNA的表達參與ERS的調控,從而在IBD的病理過程中發(fā)揮重要作用。3.GRP78-ATF6-CHOP通路在小鼠結腸炎模型中被激活,可能參與了IBD的發(fā)展過程。
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R574;R-332

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