【摘要】：背景:炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種腸道的慢性非特異性炎癥性疾病,其病因還未明確。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)參與多種疾病的發(fā)病機(jī)制,包括IBD。Cyp4a14是一種肝臟產(chǎn)生的與脂質(zhì)過(guò)氧化及氧化應(yīng)激密切相關(guān)的酶。然而Cyp4a14基因?qū)ρ装Y性腸病ERS影響仍不清楚。目的:探究ERS相關(guān)蛋白在葡聚糖硫酸鈉(dextra sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的Cyp4a14基因敲除小鼠腸炎模型中的表達(dá)及意義。方法:選取6-8周齡,體重為19-25g,健康清潔級(jí)129S1/SvJ種系Cyp4a14基因敲除(knockout,KO)和野生型(wild type,WT)雄性小鼠,隨機(jī)分為WT對(duì)照組、WT DSS組、KO對(duì)照組和KO DSS組,每組8只,4只每籠,并適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,確認(rèn)小鼠健康且適應(yīng)環(huán)境。對(duì)照組自由飲用雙蒸水,DSS組則飲用3.0%DSS溶液。造模周期為6天,第6天造模結(jié)束后終止所有干預(yù)措施。通過(guò)體重變化情況、疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分(disease activity index,DAI)、結(jié)腸長(zhǎng)度和HE染色等方法以及白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-αmRNA水平評(píng)估腸道炎癥程度,采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、IRE1α、XBP1u、XBP1s、IRE1β、PERK、ATF6和CHOP,及肝臟Cyp4a14 mRNA的表達(dá)水平,采用免疫組化及western blot法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織GRP78、ATF6和CHOP蛋白的表達(dá)情況,采用western blot法檢測(cè)小鼠肝臟Cyp4a14蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.WT和KO對(duì)照組均無(wú)腸炎表現(xiàn),而KO DSS組有輕度腸炎、WT DSS組有重度腸炎。WT和KO DSS組組織病理學(xué)評(píng)分及DAI評(píng)分與對(duì)照組相比均顯著增高(均P0.05),且WT DSS組與KO DSS組相比升高更為明顯(P0.05);WT DSS組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短(均P0.05);2.炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平在WT DSS組與KO DSS組表達(dá)明顯升高(均P0.05),且IL-6和TNF-αmRNA在WT DSS組比KO DSS組升高更為顯著(P0.05)。3.炎癥組與對(duì)照組比較IRE1α、XBP1u和PERK mRNA表達(dá)無(wú)差異;IRE1βmRNA在WT和KO DSS組表達(dá)明顯下調(diào)(均P0.05);XBP1s在WT DSS組與WT對(duì)照組相比表達(dá)降低(P0.05),而ATF6和CHOP mRNA表達(dá)升高(均P0.05),但KO DSS組與KO對(duì)照組相比無(wú)差異。4.Cyp4a14 mRNA及蛋白在WT DSS組肝臟表達(dá)明顯下調(diào)(均P0.05)。5.WT DSS組GRP78、ATF6和CHOP mRNA及蛋白與WT對(duì)照組比較明顯升高(均P0.05)。結(jié)論:1.Cyp4a14基因敲除小鼠可以抵抗DSS誘導(dǎo)的腸炎。2.Cyp4a14基因可能通過(guò)影響ATF6、CHOP和XBP1s mRNA的表達(dá)參與ERS的調(diào)控,從而在IBD的病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。3.GRP78-ATF6-CHOP通路在小鼠結(jié)腸炎模型中被激活,可能參與了IBD的發(fā)展過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R574;R-332

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本文編號(hào)：2661589