【摘要】：調(diào)節(jié)性免疫細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)是目前移植免疫領(lǐng)域研究熱點內(nèi)容之一,其中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Regulatory B cells,Bregs)是新近發(fā)現(xiàn)的一群具有負(fù)向調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞,該類細(xì)胞可通過多種作用方式從而促進(jìn)器官移植術(shù)后免疫耐受形成,以及維持耐受狀態(tài)。Bregs的發(fā)現(xiàn)及作用機制的研究,為誘導(dǎo)移植耐受策略提供了新方向。但是目前對于Bregs細(xì)胞的表型、功能、及調(diào)節(jié)機制沒有深入的認(rèn)識,尤其在移植免疫中Bregs細(xì)胞發(fā)揮的作用至今尚未明確。在已有報道的基礎(chǔ)上,我們進(jìn)行了以下研究。首先,我們建立了同種異基因小鼠胰島移植動物模型,按以下方式分組:對照組(n=5);單純移植1周組(n=5);移植+雙抗體1周組(n=5);單純移植2周組(n=5);移植+雙抗體2周組(n=5);長期耐受組(即移植物存活超過90天)(n=4)。流式細(xì)胞儀檢測移植后受體小鼠脾細(xì)胞中CD19+CD5+CD1d+B10細(xì)胞和CD19+Tim-1+B細(xì)胞比例。結(jié)果表示,只有移植+雙抗體2周組小鼠體內(nèi)的B10細(xì)胞有明顯增加,最高增加至5.9%(P0.05)。單純移植2周組、移植+雙抗體2周組,以及長期耐受組小鼠體內(nèi)的CD19+Tim-1+B細(xì)胞則均有明顯增加(P0.05)。為進(jìn)一步明確Bregs是通過與哪些免疫細(xì)胞作用而促進(jìn)耐受形成,我們同期檢測了CD4+CD25+Tregs以及CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞和CD4+IL-4+Th2細(xì)胞。結(jié)果表明,移植+雙抗體2周組小鼠體內(nèi)的CD4+CD25+Tregs和CD4+IL-4+Th2均有顯著增加(P0.05),CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞則明顯減少(P0.05)。并且,除Th2細(xì)胞外,長期耐受小鼠的各淋巴細(xì)胞比例變化趨勢都與術(shù)后2周數(shù)據(jù)一致。以上結(jié)果提示在抗CD45RB/抗Tim-1聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠移植耐受過程中,調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在耐受的初期及維持過程中都起到了重要作用,其具體機制可能是通過與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,Th1細(xì)胞以及Th2細(xì)胞的相互作用參與免疫調(diào)節(jié)。之后,我們對調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的擴增條件進(jìn)行了初步探索。結(jié)果表明LPS可刺激B10細(xì)胞在體外進(jìn)行增殖,LPS的作用時間(72h)與細(xì)胞的增殖成正相關(guān)(P0.05)。
【圖文】：

配制膠原酶 P 150mg/100ml 的濃度，稱取適量膠原酶 P 粉末，溶于 HBSS 緩沖冰上備用。摘取胰腺 用 1%濃度的戊巴比妥鈉溶液，按 0.3ml/30g 小鼠體重的劑量，麻 將麻醉后的小鼠固定于操作臺上； 碘伏消毒手術(shù)區(qū)域； 開腹并打開胸腔，剪破心臟放血； 暴露膽總管，用止血鉗夾閉十二指腸乳頭處； 用連接 30G 針頭的 2.5ml 注射器行膽總管逆行灌注，將 2.5ml 的注到胰腺組織，，充盈前后胰腺對比如圖 2-1：

組織與酶溶液的 50ml 離心管，置于 37℃水輕震蕩搖勻 3 到 4 次；后，用力快速搖勻約 20 秒；后胰腺的離心管加入配制好的中止液，加滿菌燒杯上，過濾中止消化后的胰腺； 胞胰島細(xì)胞分裝于 50ml 離心管中，1200r 離心清液，用移液器接 10ml 移液管，將剩余部圖 2-2 完整取出的胰腺
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 王以巧;祝哲誠;沈柏用;邵去非;鄭聰;彭承宏;李宏為;;Th1/Th2細(xì)胞因子變化在大鼠肝移植免疫耐受中的作用[J];外科理論與實踐;2014年04期

2 秦瑤;張梅;蔣瑞妹;孔璐璐;許馨予;陳恒;楊濤;;小鼠B10細(xì)胞的分離、鑒定及功能特征[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2013年11期

本文編號：2650685