【摘要】：目的:為探討酒精暴露對于仔鼠脊髓前角及后角神經(jīng)元是否造成損傷作用,展開了我們的初步研究。方法:將出生后4d小鼠隨機分為兩組,即對照(Control)組、酒精(Alcohol)組。酒精組根據(jù)體重比行酒精皮下注射,對照組則按體重比注射生理鹽水,2h后重復(fù)一次;出生第6d相同時間按上述步驟再次注射,2h后解剖并留取完整脊髓組織,進行免疫組化染色、免疫熒光染色、Western Blot相關(guān)檢測。另一部分小鼠待成年后進行相應(yīng)檢測。結(jié)果:1.酒精暴露可引起仔鼠脊髓Caspase 3陽性細胞顯著增多(P0.01),即脊髓神經(jīng)元凋亡增強。免疫組化圖片上顯示脊髓前角、后角都存在相應(yīng)的Caspase 3表達上調(diào)。免疫熒光圖片顯示酒精造成了PD6仔鼠神經(jīng)元凋亡數(shù)量升高。2.酒精暴露可導(dǎo)致仔鼠脊髓前角Ch AT陽性神經(jīng)元的數(shù)量下降及脊髓后角GAD67陽性神經(jīng)元的數(shù)量減少,免疫熒光雙標結(jié)果可知損傷的細胞類型為Ch AT陽性和GAD67陽性神經(jīng)元,而免疫組化圖片也表現(xiàn)了Ch AT、GAD67的分布區(qū)域。Western Blot結(jié)果表現(xiàn)出Ch AT、GAD67蛋白灰度值下降(P0.05)。3.酒精暴露可引起仔鼠脊髓GFAP、Iba1表達上升,即酒精引起了仔鼠脊髓的炎癥反應(yīng),膠質(zhì)細胞呈活化狀態(tài)。免疫組化圖片中,酒精組脊髓彌漫分布了更密集的GFAP陽性神經(jīng)元(P0.05),而免疫熒光圖片表現(xiàn)得更加明顯(P0.01)。Iba1的表達在免疫組化和免疫熒光圖片中都顯示出更為明顯的增加(P0.01)。4.酒精暴露可導(dǎo)致成年鼠脊髓神經(jīng)元數(shù)量下降,如免疫組化圖示(P0.01)。5.酒精暴露可引起成年鼠脊髓前角Ch AT陽性神經(jīng)元的平均面積減少(P0.01)及脊髓后角GAD67陽性神經(jīng)元的數(shù)量減少(P0.01),Western Blot也有同樣體現(xiàn)。6.酒精暴露可導(dǎo)致仔鼠和成年鼠脊髓SUFU、Shh、Islet1蛋白的表達下降(P0.05)。結(jié)論:1.酒精引起仔鼠脊髓神經(jīng)元凋亡,表現(xiàn)為膽堿能神經(jīng)元、GABA能神經(jīng)元的減少。2.酒精引起仔鼠脊髓炎癥反應(yīng),膠質(zhì)細胞增生。3.酒精引起成年鼠脊髓神經(jīng)元數(shù)量減少,為膽堿能神經(jīng)元、GABA能神經(jīng)元減少。4.酒精引起的膽堿能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元的發(fā)育障礙、數(shù)量減少可能與Sonic hedgehog信號通路的抑制及Islet1的表達下調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 酒精引起 C57 仔鼠脊髓神經(jīng)元凋亡，標尺示 100μm，下同，** P<0.01A-C：對照組和酒精組 C57 仔鼠 cleaved-Capase 3 免疫組化染色，D-G：對照組和酒精組 C57仔鼠 NeuN 和 cleaved-Capase 3 免疫熒光雙標Fig. 1 Alcohol caused neuroapoptosis in the spinal cord of C57 pups. Bar = 100 μm ( The same asbelow). ** P<0.01.A-C:IHC staining of cleaved-Capase 3 in the control and the alcohol group of C57 pups,D-G:Immunofluorescence double label staining of NeuN and cleaved-Capase 3 in the control andthe alcohol group of C57 pups. ** denotes significant difference (p <0.01).4.2 酒精引起 C57 仔鼠脊髓 ChAT 陽性神經(jīng)元數(shù)量減少酒精使得仔鼠脊髓 ChAT 陽性神經(jīng)元數(shù)量銳減（圖 2A，2B）。免疫熒光染色顯示出 ChAT 陽性神經(jīng)元發(fā)生了凋亡（圖 2D，2E，2F），證明了酒精對于仔鼠脊髓 ChAT 陽性神經(jīng)元的損傷作用。Western Blot 結(jié)果也同樣如此。

21圖 2 酒精引起 C57 仔鼠脊髓 ChAT 陽性神經(jīng)元數(shù)量減少，*P <0.05，** P <0.01A-C：對照組和酒精組 C57 仔鼠 ChAT 免疫組化染色，，D-F：對照組和酒精組 C57 仔鼠 ChAT和 cleaved-Capase 3 免疫熒光雙標，G-H：ChAT 蛋白 Western Blot 結(jié)果Fig. 2 Alcohol caused ChAT-positive neuron loss in the spinal cord of C57 pups. *P <0.05.A-C:IHC staining of ChAT in the control and the alcohol group of C57 pups,D-F:Immunofluorescence double label staining of ChAT and cleaved-Capase 3 in the control and thealcohol group of C57 pups, G-H:Western Blot analysis of ChAT. The expression of the protein wasquantified and normalized to the expression of β-actin. Each data point was the mean ± SEM ofthree independent experiments. * denotes significant difference (p <0.05). ** denotes significantdifference (p <0.01).
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R338

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本文編號：2647176