【摘要】：白色念珠菌是一種常見的條件性致病真菌,是一類長期寄居在人類粘膜、皮膚、口腔、消化道、陰道等器官中的菌群。它可以以孢子體、菌絲體及假菌絲體三種形態(tài)存在。在免疫力正常的人體中,白色念珠菌可引起淺部感染,包括口腔炎、口角炎、皮膚念珠菌病、腳氣病及陰道炎等。在艾滋病患者,癌癥化療患者等免疫力低下的人體內(nèi),白色念珠菌可導(dǎo)致深部感染,稱為系統(tǒng)性感染,甚至危及生命。在真菌中,Gin4蛋白是Nim1蛋白激酶家族的成員之一,是一個(gè)非常重要的細(xì)胞周期調(diào)控因子,Gin4能夠調(diào)控細(xì)胞的胞質(zhì)分裂、septin環(huán)組裝、極性生長。雖然白色念珠菌Gin4是一個(gè)全長1349個(gè)氨基酸的蛋白,但是蛋白質(zhì)序列比對(duì)只發(fā)現(xiàn)它的N端有一個(gè)260個(gè)氨基酸的蛋白激酶區(qū)段,其C端1000多個(gè)氨基酸都沒有保守的功能區(qū)段,對(duì)C端的功能研究也比較缺乏。Hof1是白色念珠菌細(xì)胞分裂的重要調(diào)節(jié)因子,Bem1是白色念珠菌中重要的極性生長調(diào)控因子。Gin4、Hof1和Bem1蛋白對(duì)白色念珠菌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生都發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)室前期通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Gin4分別與Hof1、Bem1蛋白在體內(nèi)具有相互作用,為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果,本研究進(jìn)行了融合蛋白體外結(jié)合實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明Gin4的C端區(qū)段Gin4-CT1(氨基酸1051-1349)可以結(jié)合到Hof1的C端區(qū)段(氨基酸300-599),說明Gin4與Hof1蛋白在體外具有相互作用;Gin4的C端區(qū)段Gin4-CT1(氨基酸1051-1349)可以結(jié)合到Bem1的C端區(qū)段(氨基酸301-632),說明Gin4與Bem1蛋白在體外具有相互作用。為了進(jìn)一步驗(yàn)證Gin4與Hof1在功能上是否相互影響,分別構(gòu)建了Gin4關(guān)閉菌株、Gin4敲除菌株和Hof1敲除菌株,形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),野生型細(xì)胞呈橢圓形的酵母態(tài),Gin4敲除菌和Hof1敲除菌株細(xì)胞呈假菌絲生長,細(xì)胞不能正常分裂。形態(tài)學(xué)觀察Gin4關(guān)閉菌株,細(xì)胞形態(tài)與敲除菌相似。在Gin4敲除菌中過表達(dá)Hof1蛋白,Gin4敲除菌的細(xì)胞形態(tài)與野生型細(xì)胞的形態(tài)相似,即呈橢圓形的酵母形態(tài);在Gin4關(guān)閉菌株中過表達(dá)Hof1蛋白,幾乎完全恢復(fù)了Gin4關(guān)閉菌的形態(tài)缺陷,呈橢圓形的酵母形態(tài)。同樣地,在Hof1敲除菌中過表達(dá)Gin4蛋白時(shí),Hof1敲除菌的生長形態(tài)與野生型菌株類似,呈橢圓形的酵母形態(tài)。這些結(jié)果充分證明Gin4與Hof1在不僅具有直接的相互作用,而且在功能上可以互補(bǔ)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證Gin4與Bem1在功能上是否相互影響,對(duì)Gin4-GFP在Bem1 on菌株和Bem1 shut off菌株中的分布進(jìn)行了觀察,結(jié)果表明在Bem1 on菌株中Gin4-GFP分布在細(xì)胞的芽頸處,這一結(jié)果與前期報(bào)道一致。在Bem1 shut off菌株中Gin4-GFP雖然在小部分細(xì)胞中仍然可以分布在芽頸處,但是在大多數(shù)細(xì)胞中無法觀察到Gin4-GFP的熒光分布,說明Bem1直接影響Gin4的極性分布。綜合上述,本研究從以下幾個(gè)方面對(duì)Gin4與Hof1之間的相互作用進(jìn)行了驗(yàn)證。首先,通過免疫共沉淀和質(zhì)譜分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Gin4和Hof1形成一個(gè)穩(wěn)定的復(fù)合體(本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果);其次,通過融合蛋白體外結(jié)合實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)Gin4-CT1051-1349可以直接結(jié)合到Hof1-CT300-599;第三,在Gin4關(guān)閉菌或敲除菌中過表達(dá)Hof1蛋白,幾乎可以完全恢復(fù)Gin4關(guān)閉菌或敲除菌的形態(tài)缺陷;最后,在Hof1敲除菌中過表達(dá)Gin4蛋白,也幾乎可以完全恢復(fù)Hof1敲除菌的形態(tài)缺陷。這些結(jié)果充分證明Gin4和Hof1不僅具有直接的相互作用,而且在功能上可以互補(bǔ)。由于Hof1是白色念珠菌細(xì)胞分裂的重要調(diào)節(jié)因子,所以Gin4在白色念珠菌細(xì)胞分裂過程中也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。此外,本研究也通過融合蛋白體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)和觀察Gin4-GFP在Bem1關(guān)閉菌株中的熒光分布進(jìn)一步驗(yàn)證了Gin4和Bem1之間的相互作用。Bem1是白色念珠菌中重要的極性生長調(diào)控因子,這些結(jié)果表明Gin4在白色念珠菌極性生長過程中也發(fā)揮著重要作用。
【圖文】：

白色念珠菌（ＣｍＡ而又稱白色假絲酵母菌，，是一種常見的條件逡逑性致病真菌，是一類長期寄居在人類粘膜、皮膚、口腔、消化道、陰道等器官中逡逑的菌群⑴。白色念珠菌是一種多態(tài)性真菌，可以生長為卵形的芽殖酵母（圖１．１），逡逑平行壁真菌絲（圖１．２）或作為在隔膜收縮的細(xì)長橢球細(xì)胞（假菌絲）（圖１．３）。逡逑圖ｉ．ｉ酵母態(tài)逡逑Ｆｉｇ．ｌ．ｌ邋Ｙｅａｓｔ逡逑畫逡逑圖１．２菌絲態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｈｙｐｈａｅ逡逑圖１．３假菌絲態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐｓｅｕｄｏｈｙｐｈａｅ逡逑在免疫力正常的人體中，白色念珠菌可引起淺部感染，包括皮膚念珠菌病、逡逑口腔炎、口角炎、中樞神經(jīng)念珠菌病、腳氣病及陰道炎等。在艾滋病患者、癌逡逑１逡逑

白色念珠菌（ＣｍＡ而又稱白色假絲酵母菌，是一種常見的條件逡逑性致病真菌，是一類長期寄居在人類粘膜、皮膚、口腔、消化道、陰道等器官中逡逑的菌群⑴。白色念珠菌是一種多態(tài)性真菌，可以生長為卵形的芽殖酵母（圖１．１），逡逑平行壁真菌絲（圖１．２）或作為在隔膜收縮的細(xì)長橢球細(xì)胞（假菌絲）（圖１．３）。逡逑圖ｉ．ｉ酵母態(tài)逡逑Ｆｉｇ．ｌ．ｌ邋Ｙｅａｓｔ逡逑畫逡逑圖１．２菌絲態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｈｙｐｈａｅ逡逑圖１．３假菌絲態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐｓｅｕｄｏｈｙｐｈａｅ逡逑在免疫力正常的人體中，白色念珠菌可引起淺部感染，包括皮膚念珠菌病、逡逑口腔炎、口角炎、中樞神經(jīng)念珠菌病、腳氣病及陰道炎等。在艾滋病患者、癌逡逑１逡逑
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R379.4

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本文編號(hào)：2646504