【摘要】：多重耐藥性金黃色葡萄球菌由于爆發(fā)地區(qū)廣、感染人數(shù)多、死亡率高而引起臨床廣泛關(guān)注。全球細(xì)菌耐藥監(jiān)測數(shù)據(jù)表明,近年來耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)檢出率呈不斷上升的趨勢,且與乙肝、艾滋病并列為世界三大最難解決的感染性疾患。更為嚴(yán)重的是,某些MRSA菌株進(jìn)一步突變降低了對萬古霉素的敏感性,出現(xiàn)了耐藥性更強(qiáng)的萬古霉素中度耐藥菌株(VISA)和耐萬古霉素的金葡菌(VRSA)。研發(fā)安全有效的抗多重耐藥性金黃色葡萄球菌感染的新藥和新型治療方法已成為亟待解決的全球性公共衛(wèi)生問題之一。免疫療法是一種極具前景的新型抗耐藥菌感染療法,可在很大程度上避免因選擇性壓力引起的病原菌耐藥性的問題。目前已有十幾種免疫調(diào)節(jié)肽作為抗感染藥物處于臨床研究階段。Cathelicidin是脊椎動(dòng)物體內(nèi)的一類十分重要的免疫調(diào)節(jié)肽家族,除具有直接殺菌活性外,還表現(xiàn)出多種免疫調(diào)節(jié)活性,包括直接或間接誘導(dǎo)免疫細(xì)胞趨化與分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和趨化因子水平、抑制過度炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)血管生成和傷口修復(fù)等。本論文圍繞從緬甸蟒(Python bivittatu)體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種兼具廣譜高效in vitro殺菌活性與優(yōu)異免疫調(diào)節(jié)活性的新型cathelicidin家族免疫調(diào)節(jié)肽(CATHPbl)的動(dòng)物感染模型評(píng)價(jià)、初步用藥參考及其抗MRSA/VRSA感染的多重作用機(jī)制開展研究,主要內(nèi)容如下:(1)利用RACE-PCR技術(shù)從緬甸蟒體內(nèi)首次克隆獲得六條全長的cathelicidins免疫調(diào)節(jié)肽(CATHPbl-6),并對其invitro殺菌、抗生物膜、免疫調(diào)節(jié)活性及毒性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。CATHPbl,2,4表現(xiàn)出很強(qiáng)的廣譜快速殺菌活性,尤其對一些臨床分離的耐藥菌;CATHPbl-4能顯著抑制病原菌生物膜的形成,并有效消除已形成的成熟生物膜;CATHPbl,2,4,6具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)合毒理及初級(jí)成藥性評(píng)價(jià),CATHPbl表現(xiàn)出最優(yōu)的藥理學(xué)活性及成藥性,可用于體內(nèi)抗感染活性研究。(2)In vivo抗感染效果評(píng)價(jià)結(jié)果表明:CATHPbl在多種小鼠感染模型,尤其是MRSA/VRSA感染模型中均表現(xiàn)出良好的治療效果。感染前或感染后給藥,均能顯著降低小鼠死亡率及腹腔液和脾臟中的細(xì)菌總負(fù)荷,5 mg/kg劑量的作用效果優(yōu)于20 mg/kg的頭孢哌酮/舒巴坦鈉;藥效不受給藥途徑的限制,局部或系統(tǒng)給藥均有良好的治療效果;對人正常細(xì)胞毒副作用低,極少引起肥大細(xì)胞脫顆粒,血清穩(wěn)定性較好。(3)抗耐藥金葡菌感染多重機(jī)制研究表明:CATHPbl具備兩親性α螺旋結(jié)構(gòu),可通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜完整性引起細(xì)菌死亡,發(fā)揮in vitro殺菌活性;此外,可通過調(diào)控MAPK/NF-kB信號(hào)通路,抑制VRSA感染引起的小鼠腹腔炎癥反應(yīng)。其免疫調(diào)節(jié)抗感染活性依賴于中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,且可能主要是通過對中性粒細(xì)胞的誘導(dǎo)趨化和功能調(diào)控實(shí)現(xiàn)invivo抗病原菌感染功效。(4)對中性粒細(xì)胞的功能調(diào)控研究表明:CATHPb1可顯著促進(jìn)中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā),且相同劑量的CATHPb1作用下被誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧量遠(yuǎn)多于巨噬細(xì)胞;同時(shí)還可顯著促進(jìn)中性粒細(xì)胞胞外陷阱(Neutrophil extracellular traps,NETs)的形成,在提高NETs耐核酸酶降解能力的同時(shí)增強(qiáng)NETs誘捕病原菌的能力。
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年到２０１５年的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測結(jié)果顯示，全國各地臨床分離的細(xì)菌的耐藥現(xiàn)象普遍存逡逑在，且部分耐藥嚴(yán)重。雖然屎腸球菌和金黃色葡萄球菌的耐藥性檢出率有所降低，但鮑逡逑曼不動(dòng)桿菌和凝固酶陰性葡萄球菌等的耐藥檢出率仍然很高（圖１．１）。２０１６年世界衛(wèi)生逡逑組織（ＷＨＯ）報(bào)告指出，目前全球每個(gè)國家都存在細(xì)菌耐藥性問題，且多個(gè)國家已證實(shí)氟逡逑喹諾酮類藥物治療大腸桿菌引起的尿道感染，以及碳青霉烯類抗生素治療耐藥肺炎克雷逡逑伯菌感染的無效率均在５０％以上。在因鮑曼不動(dòng)桿菌感染引起的肺炎及膿毒癥的患者逡逑中，耐藥菌檢出率超過８０％，且一些標(biāo)準(zhǔn)的膿毒癥治療策略對這種耐藥菌無效碳青逡逑霉烯類、超廣譜Ｐ－內(nèi)酰胺類及氟喹諾酮類抗生素對目前膿毒癥患者的治療效果也收效甚逡逑微［８］。耐藥菌與抗菌藥物之間的角斗是一個(gè)漫長的過程，新興感染和再度感染已成為危逡逑害人類健康的嚴(yán)重問題。據(jù)報(bào)道，目前全球每年因耐藥菌感染死亡的患者人數(shù)約有７０逡逑萬，且大部分發(fā)生在發(fā)展中國家及貧困地區(qū)。且如果細(xì)菌耐藥的問題得不到控制，預(yù)計(jì)逡逑到２０５０年，這個(gè)數(shù)字將X棾ぃ保幢叮�，达祫Ρ０００蜐}焓苯嚶諛殼耙蚨裥災(zāi)琢鏊勞齙膩義先聳鈴義希澹卞澹義

本文編號(hào)：2645975