【摘要】：目的:觀察Notch信號通路在不同時間高氧暴露和降鈣素基因相關(guān)肽干預(yù)后肺損傷修復(fù)的病理改變,并通過Notch信號通路部分成員Notchl、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表達水平變化,來探討降鈣素基因相關(guān)肽通過Notch信號通路對高氧肺損傷發(fā)揮保護作用及其機制。方法:將新生早產(chǎn)鼠暴露于95%氧,誘導(dǎo)高氧肺損傷模型,分為6組,即空氣組、高氧組、高氧+CGRP組、高氧+MWl67組、高氧+CGRP+CGRP8-37組、高氧+CGRP+MWl67組。通過HE染色,光鏡下觀察各組第3、7、14d肺組織病理學(xué)改變,得出肺損傷病理評分變化,并應(yīng)用免疫組化法檢測肺組織中Notch1的分布及表達變化,同時應(yīng)用Western blot、Q-PCR法檢測各組肺組織中Notch1、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表達水平變化。結(jié)果:1、各組肺組織病理改變:(1)空氣對照組:第3、7、14d肺組織結(jié)構(gòu)較規(guī)整,細胞排列整齊。(2)高氧組:第3d可見少許炎性細胞;第7d肺泡間隔明顯斷裂,間質(zhì)水腫,肺泡融合;第14d肺組織氣管、血管廣泛破壞,管壁增厚。(3)高氧+MWl67組:高氧暴露第3d肺組織可見肺泡間隔斷裂,肺泡融合;第7d可見明顯炎性細胞浸潤,大量空泡,間質(zhì)水腫。第14 d可見毛細血管廣泛破壞,氣管管壁明顯增厚。(4)高氧+CGRP組:CGRP干預(yù)后高氧暴露第3d氣管、血管基本正常;第7d可見肺泡間隔斷裂,肺泡融合,伴炎性細胞浸潤;第14d可見纖維增生,氣管、血管管壁增厚。(5)高氧+CGRP+CGRP8-37組:高氧暴露第3d可見肺泡間隔少量斷裂,肺泡融合,炎性細胞浸潤;第7d可見大量空泡,肺泡間質(zhì)水腫,炎性滲出明顯;第14d可見氣管、血管破壞,管壁增厚。(6)高氧+CGRP+MWl67組:高氧暴露第3d肺組織可見少許炎性滲出;第7d肺泡間隔斷裂,肺泡融合,間質(zhì)水腫;第14d氣管、血管破壞,管壁增厚。2、各組肺損傷病理評分變化:(1)高氧暴露第3、7、14d早產(chǎn)鼠肺損傷病理評分均高于同時間點空氣組(P0.05),差異顯著。且高氧組組內(nèi)比較,病理評分第3d最低,第14d最高,提示病理評分與高氧暴露時間正相關(guān)。(2)高氧+MWl67組第3、7、14d肺損傷病理評分均高于同時間點高氧組(P0.05),差異顯著。(3)高氧+CGRP組第3、7、14d肺損傷病理評分均低于同時間點高氧組(P0.05),差異顯著。(4)高氧+CGRP+CGRP8-37組第3、7、14d肺損傷病理評分均高于同時間點高氧+CGRP組(P0.05),差異顯著。(5)高氧+CGRP+MWl67組第3、7、14d肺損傷病理評分均高于同時間點高氧+CGRP組(P0.05),差異顯著。(6)高氧+CGRP+MWl67組第3、7、14d肺損傷病理評分低于同時間點高氧組(P0.05),差異顯著。3、免疫組化檢測Notch1的分布及表達變化:Notch1在下氣道和肺泡上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞均有表達,主要分布在氣道上皮細胞中。高氧組第3、7、14d比同時間點空氣組Notch1表達陽性細胞減少。高氧+MW167組第3、7、14d比同時間點高氧組Notch1陽性細胞減少。高氧+CGRP組第3、7、14d比同時間點高氧組Notch1陽性細胞增加。高氧+CGRP+CGRP8-37組第3、7、14d比同時間點高氧+CGRP組Notch1陽性細胞減少。高氧+CGRP+MW167組第3、7、14d比同時間點高氧+CGRP組Notch1陽性細胞減少。4、Western blot、Q-PCR法檢測各組肺組織中Notch1、heRP、Hes蛋白含量及mRNA表達水平變化:(1)高氧組第3、7、14d比同時間點空氣組Notchl、heRP、Hes表達降低(P0.05),差異顯著。(2)高氧+MWl67組第3、7、14d比同時間點高氧組Notchl、heRP、Hes表達進一步降低(P0.05),差異顯著。(3)高氧+CGRP組第3、7、14d比同時間點高氧組Notch1、heRP、Hes表達增加(P0.05),差異顯著。(4)高氧+CGRP+CGRP8-37組第3、7、14d比同時間點高氧+CGRP組Notch1、heRP、Hes表達下降(P0.05),差異顯著。(5)高氧+CGRP+MW167組第3、7、14d比同時間點高氧+CGRP組Notch1、Hes、heRP表達下降(P0.05),差異顯著。高氧+CGRP+MW167組第3、7、14d比同時間點高氧組Notch1、heRP、Hes表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、高氧暴露后,Notch1、heRP、Hes表達下調(diào),肺組織出現(xiàn)病理損傷改變,說明Notch信號通路參與了BPD的發(fā)生發(fā)展。2、CGRP可明顯減輕高氧暴露后早產(chǎn)鼠肺組織病理損傷程度,說明CGRP可能是機體高氧肺損傷的保護性因子。3、CGRP可能通過促進Notch信號的表達對高氧肺損傷發(fā)揮保護效應(yīng)。并且,Notch信號通路可能只是CGRP對高氧肺損傷發(fā)揮效應(yīng)的其中一條途徑。
【圖文】：

圖 2.1 不同時間高氧暴露后各組肺組織病理改變(HE 染色，×200，n=6)2.3.2.2 各組肺損傷病理評分（1）高氧暴露第 3、7、14d 的早產(chǎn)鼠肺損傷病理評分均高于同時間點空氣對照組（p＜0.05），，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。且高氧組組內(nèi)相比較，肺損傷病理評分

圖 2.3 各組肺組織 Notch1 表達變化（免疫組化，×20，n=6）2.3.4 Western blot 分析不同時間高氧暴露后各組早產(chǎn)鼠肺組織中Notchl、heRP、Hes 蛋白含量的變化
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R722.6;R-332

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本文編號：2643436