發(fā)布時間：2020-04-18 09:40

【摘要】：世界正在邁入后“抗生素時代”,多重耐藥、廣泛耐藥、全耐藥致病菌在全球快速蔓延,對公共健康構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)。銅綠假單胞菌是引起院內(nèi)感染的常見條件致病菌之一,耐藥機(jī)制復(fù)雜,常導(dǎo)致囊性纖維化病人、燒傷病人、AIDS等免疫功能缺陷病人出現(xiàn)致死性感染。2017年2月27日,世界衛(wèi)生組織將碳青霉烯類耐藥的銅綠假單胞菌列為迫切需要新型藥物治療的超級細(xì)菌之一。噬菌體是感染細(xì)菌并在其內(nèi)復(fù)制的病毒總稱,具有數(shù)量豐富、研發(fā)周期短、成本低、宿主特異性強(qiáng)、安全有效等優(yōu)點(diǎn),有望成為治療細(xì)菌耐藥感染的新趨勢。本研究分別以銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)AO1和ATCC 9027為宿主,從環(huán)境樣品中分離到四株烈性噬菌體,分別命名為v B_Pae M_SCUT-S1、v B_Pae M_SCUT-S2、v B_Pae S_SCUT-S3和v B_Pae S_SCUT-S4,并對它們的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,包括形態(tài)結(jié)構(gòu),宿主譜,基因組分析,結(jié)構(gòu)蛋白鑒定,穩(wěn)定性,一步生長曲線,裂解動力學(xué)和生物膜清除作用。噬菌體S1和S2屬于肌尾噬菌體科,分別是Pbunavirus屬和Pakpunavirus屬成員,噬菌體S3和S4屬于長尾噬菌體科,Septima3virus屬成員。在測試的7株銅綠假單胞菌中,噬菌體S2能感染全部,S1能感染其中6株,而S3和S4宿主譜較窄,僅能感染其中3株。S1基因組長度為66089 bp,共編碼94 ORFs。S2基因組長度為94434 bp,共編碼179 ORFs和11個t RNA。S3基因組長度為42633 bp,共編碼62 ORFs。S4基因組長度為42929 bp,共編碼59 ORFs。它們的基因組中均未發(fā)現(xiàn)整合酶,切除酶,阻遏蛋白等溶原相關(guān)基因,證明它們均屬于烈性噬菌體,此外均不攜帶抗生素耐藥基因和毒力基因。噬菌體S1 S4在一定p H和溫度范圍內(nèi)均能維持穩(wěn)定,對環(huán)境變化適應(yīng)能力強(qiáng)。一步生長曲線顯示噬菌體S1 S4裂解量分別為134 pfu/infected cell,40 pfu/infected cell,95 pfu/infected cell和20 pfu/infected cell。體外培養(yǎng)條件下S1和S2能抑制PAO1生長,但12 h后細(xì)菌開始產(chǎn)生抗性,同樣S3和S4前期能抑制ATCC 9027生長,但6 h后細(xì)菌開始產(chǎn)生抗性,此外噬菌體的聯(lián)合處理無明顯協(xié)同優(yōu)勢,低感染復(fù)數(shù)曲線出現(xiàn)延遲效應(yīng)。噬菌體S1 S4均能有效減少已形成的生物膜,24 h清除率分別為44%,69%,74%和82%。目前我國銅綠假單胞菌耐藥形勢嚴(yán)峻,噬菌體作為抗生素替代品具有廣闊研發(fā)前景。本研究不僅豐富了我們對噬菌體生物多樣性和進(jìn)化關(guān)系的理解,同時噬菌體S1 S4可作為儲備資源,為噬菌體改造和治療銅綠假單胞菌感染提供重要基礎(chǔ)和依據(jù)。
【圖文】：

ermenting bacillus），廣泛存在于各類生態(tài)環(huán)境中，在動植物條件致病菌（opportunisticpathogen），它常導(dǎo)致皮膚、角膜系統(tǒng)出現(xiàn)急性或持續(xù)性感染，尤其是囊性纖維化病人（CystDS 等免疫功能缺陷病人[2,3]。銅綠假單胞菌的致病性主要與，包括黏附素（adhesin），脂多糖（lipopolysaccharide），彈性蛋pyocyanin）等，在定植和感染過程中發(fā)揮重要作用，引起機(jī)重干擾宿主免疫系統(tǒng)[4]。單胞菌耐藥機(jī)制素的不合理使用，臨床上常見的“ESKAPE”致病菌（Enters aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannidEnterobacterspecies）耐藥形勢日益嚴(yán)峻，已經(jīng)成為威脅公

圖 1-2 銅綠假單胞菌生物膜的形成與發(fā)展[11]1.3 銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)狀世界正在邁入“后抗生素時代（post-antibioticera）”，多重耐藥（multidrug-resiR），廣泛耐藥（extensivelydrug-resistant,XDR），全耐藥（pandrug-resistant,PDR菌對全球公共健康構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)[14]。在美國，，每年約有 51000 例銅綠假單胞菌疾病發(fā)生，其中 13%是由多重耐藥銅綠菌（MDR-PA）引起的，約 400 人因此死亡[
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R37

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本文編號：2631959