【摘要】：世界正在邁入后“抗生素時(shí)代”,多重耐藥、廣泛耐藥、全耐藥致病菌在全球快速蔓延,對(duì)公共健康構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)。銅綠假單胞菌是引起院內(nèi)感染的常見(jiàn)條件致病菌之一,耐藥機(jī)制復(fù)雜,常導(dǎo)致囊性纖維化病人、燒傷病人、AIDS等免疫功能缺陷病人出現(xiàn)致死性感染。2017年2月27日,世界衛(wèi)生組織將碳青霉烯類(lèi)耐藥的銅綠假單胞菌列為迫切需要新型藥物治療的超級(jí)細(xì)菌之一。噬菌體是感染細(xì)菌并在其內(nèi)復(fù)制的病毒總稱(chēng),具有數(shù)量豐富、研發(fā)周期短、成本低、宿主特異性強(qiáng)、安全有效等優(yōu)點(diǎn),有望成為治療細(xì)菌耐藥感染的新趨勢(shì)。本研究分別以銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)AO1和ATCC 9027為宿主,從環(huán)境樣品中分離到四株烈性噬菌體,分別命名為v B_Pae M_SCUT-S1、v B_Pae M_SCUT-S2、v B_Pae S_SCUT-S3和v B_Pae S_SCUT-S4,并對(duì)它們的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,包括形態(tài)結(jié)構(gòu),宿主譜,基因組分析,結(jié)構(gòu)蛋白鑒定,穩(wěn)定性,一步生長(zhǎng)曲線,裂解動(dòng)力學(xué)和生物膜清除作用。噬菌體S1和S2屬于肌尾噬菌體科,分別是Pbunavirus屬和Pakpunavirus屬成員,噬菌體S3和S4屬于長(zhǎng)尾噬菌體科,Septima3virus屬成員。在測(cè)試的7株銅綠假單胞菌中,噬菌體S2能感染全部,S1能感染其中6株,而S3和S4宿主譜較窄,僅能感染其中3株。S1基因組長(zhǎng)度為66089 bp,共編碼94 ORFs。S2基因組長(zhǎng)度為94434 bp,共編碼179 ORFs和11個(gè)t RNA。S3基因組長(zhǎng)度為42633 bp,共編碼62 ORFs。S4基因組長(zhǎng)度為42929 bp,共編碼59 ORFs。它們的基因組中均未發(fā)現(xiàn)整合酶,切除酶,阻遏蛋白等溶原相關(guān)基因,證明它們均屬于烈性噬菌體,此外均不攜帶抗生素耐藥基因和毒力基因。噬菌體S1 S4在一定p H和溫度范圍內(nèi)均能維持穩(wěn)定,對(duì)環(huán)境變化適應(yīng)能力強(qiáng)。一步生長(zhǎng)曲線顯示噬菌體S1 S4裂解量分別為134 pfu/infected cell,40 pfu/infected cell,95 pfu/infected cell和20 pfu/infected cell。體外培養(yǎng)條件下S1和S2能抑制PAO1生長(zhǎng),但12 h后細(xì)菌開(kāi)始產(chǎn)生抗性,同樣S3和S4前期能抑制ATCC 9027生長(zhǎng),但6 h后細(xì)菌開(kāi)始產(chǎn)生抗性,此外噬菌體的聯(lián)合處理無(wú)明顯協(xié)同優(yōu)勢(shì),低感染復(fù)數(shù)曲線出現(xiàn)延遲效應(yīng)。噬菌體S1 S4均能有效減少已形成的生物膜,24 h清除率分別為44%,69%,74%和82%。目前我國(guó)銅綠假單胞菌耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻,噬菌體作為抗生素替代品具有廣闊研發(fā)前景。本研究不僅豐富了我們對(duì)噬菌體生物多樣性和進(jìn)化關(guān)系的理解,同時(shí)噬菌體S1 S4可作為儲(chǔ)備資源,為噬菌體改造和治療銅綠假單胞菌感染提供重要基礎(chǔ)和依據(jù)。
【圖文】：

ermenting bacillus），廣泛存在于各類(lèi)生態(tài)環(huán)境中，在動(dòng)植物條件致病菌（opportunisticpathogen），它常導(dǎo)致皮膚、角膜系統(tǒng)出現(xiàn)急性或持續(xù)性感染，尤其是囊性纖維化病人（CystDS 等免疫功能缺陷病人[2,3]。銅綠假單胞菌的致病性主要與，包括黏附素（adhesin），脂多糖（lipopolysaccharide），彈性蛋pyocyanin）等，在定植和感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用，引起機(jī)重干擾宿主免疫系統(tǒng)[4]。單胞菌耐藥機(jī)制素的不合理使用，臨床上常見(jiàn)的“ESKAPE”致病菌（Enters aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannidEnterobacterspecies）耐藥形勢(shì)日益嚴(yán)峻，已經(jīng)成為威脅公

圖 1-2 銅綠假單胞菌生物膜的形成與發(fā)展[11]1.3 銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)狀世界正在邁入“后抗生素時(shí)代（post-antibioticera）”，多重耐藥（multidrug-resiR），廣泛耐藥（extensivelydrug-resistant,XDR），全耐藥（pandrug-resistant,PDR菌對(duì)全球公共健康構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)[14]。在美國(guó)，，每年約有 51000 例銅綠假單胞菌疾病發(fā)生，其中 13%是由多重耐藥銅綠菌（MDR-PA）引起的，約 400 人因此死亡[
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R37

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本文編號(hào)：2631959