【摘要】：研究背景:近幾年在雌性生殖干細胞(FGSCs)的分化、增殖和凋亡等方面做了較多研究。但其它的生物學(xué)過程,例如細胞自噬,以及其在FGSCs中的調(diào)控機制尚不清楚。此外,小分子化合物因其作用效果具有即時性和可逆性,在細胞自噬的機制研究中發(fā)揮了重要的作用。而苯并硼唑類化合物因其良好的化學(xué)性質(zhì)和廣泛的功能,在臨床研究和治療中具有很大的潛力,但目前為止,尚未有針對此類化合物在FGSCs中作用的研究報道。研究目的:探究苯并硼唑類化合物ZCL-082在FGSCs發(fā)育中的作用及其調(diào)節(jié)機制。研究結(jié)果:在本研究中,我們將化合物ZCL-082(苯并硼唑類雜環(huán)的衍生物)加入FGSCs中以檢測其作用。通過細胞計數(shù)試劑盒8(CCK8)和5-乙炔基-2'-脫氧尿苷(EdU)檢測,顯示ZCL-082可以顯著降低體外培養(yǎng)FGSCs的活力、增殖率和數(shù)量。除此之外,Western-blot結(jié)果顯示,當(dāng)用ZCL-082處理FGSCs 3 h和6 h之后,微管相關(guān)蛋白中輕鏈3β-II(LC3BII)的表達量顯著增加,同時P62蛋白(sequestosome-1,SQSTM1)的表達量顯著降低,免疫熒光顯示LC3B囊泡數(shù)目也顯著上升,表明FGSCs被ZCL-082誘導(dǎo)發(fā)生了自噬。為探討ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs自噬的作用機制,我們檢測了該化合物處理細胞后自噬相關(guān)lncRNA的表達量變化。結(jié)果顯示,ZCL-082可以顯著降低長鏈非編碼RNA即生長停滯特異性5(GAS5)的表達,而GAS5可以直接結(jié)合microRNA-21a(miR-21a)并負性調(diào)控其表達。敲除GAS5可以誘導(dǎo)FGSCs的自噬,而GAS5過表達可以抑制體外FGSCs的自噬�；匮a實驗結(jié)果表明,過表達GAS5可以一定程度的挽救ZCL-082誘導(dǎo)的FGSCs自噬。此外,與對照組相比,miR-21a的過表達顯著增強LC3BII蛋白的表達,同時降低了FGSCs中SQSTM1蛋白的表達和程序性細胞死亡蛋白4(Pdcd4)基因的表達。而抑制miR-21a則顯著降低基礎(chǔ)的或ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs中LC3B-II的表達。與此同時,抑制miR-21a也顯著升高Pdcd4基因的表達,升高基礎(chǔ)的或ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs中SQSTM1的表達。研究結(jié)論:本研究表明,ZCL-082能夠降低體外培養(yǎng)的FGSCs的活力和增殖能力并誘導(dǎo)FGSCs的凋亡和自噬;過表達GAS5能夠一定程度的挽救ZCL-082引起的FGSCs的自噬;ZCL-082通過GAS5/miR-21a軸誘導(dǎo)FGSCs自噬。這些結(jié)果有助于理解FGSCs的生理功能和發(fā)育機制并為女性生育力保持和臨床治療生殖障礙性疾病提供新的思路。
【圖文】：

圖 1-1：ZCL-082 處理 FGSCs 后形態(tài)圖及細胞數(shù)目統(tǒng)計Figure1-1： ZCL-082 reduced the number of FGSCs. Morphology of FGSCs treated withvarious concentrations of ZCL-082. Scale bar, 50 μm. Number of FGSCs per 35 mm plate atvarious concentrations of ZCL-082. Values are presented as mean ±SEM of three biologicalreplicates. **P < 0.01. (ⅰ:Control, ⅱ:0.125 μM, ⅲ:0.25 μM, ⅳ:0.5 μM, ⅴ:1 μM, ⅵ:2μM, ⅶ:4 μM, ⅷ:8 μM). Control: DMSO.

圖 1-2：ZCL-082 導(dǎo)致 FGSCs 活力降低igure1-2： ZCL-082 reduced the viability of FGSCs. Fold-change in cell viabilitent concentrations was detected by CCK8 assay at 24 h (A) and 48 h (B). Valnted as mean ±SEM of three biological replicates. **P < 0.01.
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2

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本文編號：2630717