發(fā)布時間：2020-04-07 20:50

【摘要】：目的:本研究通過監(jiān)測不同嚴(yán)重程度的膿毒癥大鼠的早期代謝組學(xué)變化,篩選出與膿毒癥大鼠相關(guān)的差異代謝物,探索可能的代謝通路。方法:主要通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)建立不同嚴(yán)重程度的膿毒癥大鼠模型,前期我們通過預(yù)實驗,觀察膿毒癥大鼠的死亡率,收集不同組織標(biāo)本行HE染色查看病理學(xué)變化。本研究中,膿毒癥大鼠造模后分別在6小時和24小時行心臟采血,結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(UHPLC-Q-TOF-MS/MS),對其行血清代謝組學(xué)分析,進(jìn)而對數(shù)據(jù)行預(yù)處理,將得到的歸一化后的數(shù)據(jù)矩陣全部導(dǎo)入SIMCA-P+14.1軟件包進(jìn)行多變量分析,利用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計計算,通過student’s t檢驗測試平均值的統(tǒng)計學(xué)顯著性(p0.05)。VIPs序列由多變量統(tǒng)計分析產(chǎn)生,項目得分的變量影響(VIP1.0)確定了顯著變化的代謝物,使用HMDB數(shù)據(jù)庫鑒定代謝物,最后導(dǎo)入MetaboAnalyst網(wǎng)站進(jìn)行代謝途徑分析。結(jié)果:1、通過CLP建立的膿毒癥大鼠模型,觀察到重度膿毒癥大鼠的形態(tài)學(xué)變化(如活動減少、警惕性降低、反應(yīng)遲緩等)較輕度膿毒癥大鼠更為明顯,其死亡率也遠(yuǎn)高于輕度膿毒癥大鼠,輕重度膿毒癥大鼠各組間的肝、腎、肺HE染色病理切片在顯微鏡下可見不同程度的損傷(如結(jié)構(gòu)紊亂、炎性細(xì)胞浸潤等),以上結(jié)果提示造模成功。2、不同嚴(yán)重膿毒癥大鼠6小時和12小時所取的血清代謝物檢測結(jié)果示,對照組與假手術(shù)組存在顯著的代謝差異,假手術(shù)組和膿毒癥大鼠的代謝表達(dá)不同,但輕度與重度膿毒癥大鼠之間的代謝輪廓無明顯差異。3、術(shù)后6小時的血清代謝物檢測中,與假手術(shù)組比,輕度膿毒癥大鼠有6種差異代謝產(chǎn)物,即:3-羥基馬尿酸、肌酐、法尼焦磷酸、葡萄糖-6-磷酸、甘油-3-醛酸、5-磷酸吡哆醛。重度膿毒癥大鼠有8種差異代謝產(chǎn)物,即:3-羥基馬尿酸、9,10-環(huán)氧十八烷酸、β-丙氨酸、肌酐、葡萄糖-6-磷酸、甘油-3-醛酸、L-棕櫚酰、5-磷酸吡哆醛。輕度與重度膿毒癥大鼠之間有4種差異代謝物,即:25-羥基維生素D2、3α,7α-二羥基前列腺烷酸、甘草次酸、瓦拉尼酸。術(shù)后12小時的血清代謝物檢測中,與假手術(shù)組比,輕度膿毒癥大鼠有12種差異代謝產(chǎn)物,分別是:2-糠基甘氨酸、腺嘌呤、氨基己二酸、D-α-氨基丁酸、D半乳糖、法尼焦磷酸、葡萄糖-6-磷酸、同型半胱氨酸、L-2-羥基戊二酸、5-磷酸吡哆醛、尿素、溶血卵磷脂。重度膿毒癥大鼠有6種差異代謝產(chǎn)物,分別是:2-糠基甘氨酸、腺嘌呤、D-α-氨基丁酸、同型半胱氨酸、5-磷酸吡哆醛、尿素。輕度與重度膿毒癥大鼠之間有4種差異代謝物,即:25-羥基維生素D2、3α,7α-二羥基前列腺烷酸、甘草次酸、L-2-羥基戊二酸。4、對輕、重度膿毒癥大鼠的6小時和12小時各組間的差異代謝物通過代謝途徑分析,結(jié)果示均與維生素B6代謝途徑相關(guān),但6小時和12小時兩個時間段的輕重度之間的差異代謝物未找到明顯相關(guān)的代謝途徑。結(jié)論:通過本研究發(fā)現(xiàn),在大鼠膿毒癥模型中,代謝物的差異在不同的嚴(yán)重程度和時間點之間均有所不同。通過對差異代謝物的分析發(fā)現(xiàn),其所參與的代謝途徑大部分與氨基酸代謝、糖酵解及脂肪分解代謝有關(guān)。
【圖文】：

動脈、回盲瓣和盲腸結(jié)扎的解剖位置

輕度（Q）、重度（Z）膿毒癥組大鼠和假手術(shù)組（J）大鼠的7天生存率曲線圖
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 王雁;趙忠新;;代謝組學(xué)在帕金森病生物標(biāo)記研究中的應(yīng)用[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2016年04期

2 高嘉元;嚴(yán)玉澄;;代謝組學(xué)技術(shù)在腎臟病研究中的應(yīng)用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2011年05期

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1 孫璐璐;大鼠革蘭陰性菌和革蘭陽性菌感染膿毒癥模型的構(gòu)建及代謝組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

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本文編號：2618375