【摘要】：目的:通過構(gòu)建黃褐斑大鼠模型并提取、培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),收集脂肪干細(xì)胞上清液(conditioned medium from adipose-derived stem cells,ADSC-CM)治療黃褐斑大鼠模型皮損,觀察其療效。通過檢測大鼠皮膚勻漿中前列腺素2(PGE-2)、干細(xì)胞因子(SCF)以及一氧化氮(NO)的含量并比較變化情況,探討其對黃褐斑大鼠模型皮損處炎癥反應(yīng)的影響,為黃褐斑的治療新策略提供更多實驗依據(jù)。方法:取大鼠腹股溝脂肪組織,分離、提取大鼠脂肪干細(xì)胞并予以鑒定,待脂肪干細(xì)胞傳至第三代后,細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)瓶底部面積約80-90%,更換無血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),收集脂肪干細(xì)胞上清液。選用8周齡的清潔級健康雌性SD大鼠42只,12只予以正常飼養(yǎng),30只用于造模。采用黃體酮肌肉注射聯(lián)合紫外線照射法構(gòu)建黃褐斑大鼠模型,通過肉眼觀、病理學(xué)檢查及皮膚勻漿超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量測定判斷黃褐斑模型是否構(gòu)建成功。造模時間截止后,從30只參與造模的大鼠中隨機(jī)取出6只,從12只正常飼養(yǎng)的大鼠中隨機(jī)取出6只,用作模型鑒定。將正常飼養(yǎng)的剩余6只大鼠納為正常組,剩余24只參與造模的大鼠隨機(jī)分為4組,分別為模型組、空白對照組、陽性對照組及治療組。模型組在造模成功后未予以干預(yù),空白對照組使用無血清DMEM培養(yǎng)液予以治療;陽性對照組使用氨甲環(huán)酸注射液;治療組使用脂肪干細(xì)胞上清液。治療方法采取在大鼠背部皮損區(qū)域分多點注射的方法。治療結(jié)束后通過肉眼觀察黃褐斑大鼠皮損區(qū)域變化,病理學(xué)檢查及檢測皮膚勻漿中PGE-2、SCF及NO含量,判定療效及對炎癥反應(yīng)的影響。結(jié)果:1.大鼠脂肪干細(xì)胞貼壁后在倒置相差顯微鏡下可見細(xì)胞以梭形為主,在細(xì)胞密度較高時呈漩渦樣生長。2.流式細(xì)胞儀檢測脂肪干細(xì)胞免疫表型顯示CD29、CD90呈陽性表達(dá),CD45、CD106呈陰性表達(dá)。3.黃褐斑大鼠模型的鑒定:肉眼觀可見大鼠背部裸露皮膚出現(xiàn)紅斑、色素沉著、干燥,毛發(fā)光澤度下降。皮膚病理提示表皮增生,厚薄不一,真皮淺層見大量炎細(xì)胞浸潤,毛細(xì)血管增多且擴(kuò)張明顯,毛囊皮脂腺增生。生化檢測提示SOD降低、MDA升高。4.治療結(jié)束后觀察各組大鼠背部皮膚發(fā)現(xiàn),陽性對照組與治療組未見明顯皮損,但較正常組皮膚顏色深,毛發(fā)光澤度低,肉眼觀該兩組間差距較小;模型組皮膚顏色仍較紅,可見散在色素沉著;空白對照組可見散在紅斑及色素沉著。皮膚病理提示,模型組表皮較前變薄,但仍厚于其余各組,真皮內(nèi)仍有大量毛細(xì)血管擴(kuò)張,炎細(xì)胞浸潤,毛囊皮脂腺仍有增生,空白對照組表皮較模型組薄但厚于陽性對照組及治療組,陽性對照組及治療組病理表現(xiàn)相似,表皮明顯變薄,炎性細(xì)胞浸潤減少,毛細(xì)血管擴(kuò)張改善明顯。5.皮膚勻漿PGE-2、SCF及NO含量檢測提示,模型組在撤離了危險因素后經(jīng)自身恢復(fù),炎性因子仍與正常組存在明顯差異,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),陽性對照組與治療組炎性因子均在干預(yù)后明顯降低,且分別與空白對照組比較,存在明顯差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.脂肪干細(xì)胞上清液對黃褐斑大鼠模型具有治療意義;2.脂肪干細(xì)胞上清液對黃褐斑大鼠模型皮損處炎癥因子PGE-2、SCF及NO具有下調(diào)作用。
【圖文】：

脂肪干細(xì)胞 P2 代（40×） 圖 1-2 脂肪干細(xì)胞 P5 代（200×）

圖 2 大鼠 ADSCs 表面抗原流式分析Fig.2 The flow cytometric analysis of rat ADSCs surface antigen2 黃褐斑大鼠模型的鑒定2.1 肉眼觀察
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.42;R-332

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本文編號：2615767