【摘要】：背景:腸缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷是多種危重疾病和器官損傷共同的病理生理過程,它不僅引起局部炎癥反應(yīng)和黏膜損傷,也可引起全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征。Toll樣受體4(toll-like receptors,TLR4)是介導(dǎo)機(jī)體天然免疫和炎癥反應(yīng)的主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,但它在腸I/R損傷中的作用仍有極大爭議目的:本實(shí)驗(yàn)利用TLR4基因敲除小鼠,研究TLR4在腸I/R損傷中的作用,以明確TLR4信號到底是起致病作用還是保護(hù)作用,并揭示TLR4信號在腸I/R損傷中的作用機(jī)理。方法:采用腸系膜上動脈夾閉方法(superior mesenteric artery occlusion,SMAO)建立不同輕重程度(30min,50min,90min和120min腸缺血)的腸I/R損傷小鼠模型,復(fù)制高致死性、亞致死性、低致死性和非致死性SMAO休克,觀察TLR4基因敲除對病死率、腸粘膜損傷及腸粘膜炎癥反應(yīng)的影響。病死率觀察采用生存率分析,腸粘膜損傷采用大體檢查和組織學(xué)檢查,腫瘤壞死因子-α(TNF-?)和白細(xì)胞介素-1?(IL-1?)及白細(xì)胞介素-10(IL-10)表達(dá)水平采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定方法檢測,腸粘膜多形核中性粒細(xì)胞(PMNs)浸潤采用髓過氧化物酶活性分析、腸粘膜核因子?B(NF-?B)活化采用電泳遷移率改變分析(EMSA)檢測。結(jié)果:TLR4基因敲除顯著增加致死性腸I/R休克的生存率、不影響亞致死休克的病死率、顯著增加低致死性休克的病死率、不影響非致死性休克的病死率。TLR4基因敲除顯著減輕嚴(yán)重腸I/R(120min腸缺血)引起的腸粘膜損傷、不影響中度腸I/R(90min腸缺血)引起的腸粘膜損傷、顯著加重輕度腸I/R(50min腸缺血)引起的腸粘膜損傷。在嚴(yán)重腸I/R(120min腸缺血)時,TLR4基因敲除顯著降低血清TNF-?和IL-1?水平,顯著增加血清IL-10’水平;在中度腸I/R(90min腸缺血)時,TLR4基因敲除不影響血清TNF-?、IL-1?和IL-10’水平;在輕度腸I/R(50min腸缺血)時,TLR4基因敲除顯著增加血清TNF-?和IL-1?水平,明顯降低血清IL-10’水平。TLR4基因敲除顯著減輕嚴(yán)重腸I/R(120min腸缺血)誘導(dǎo)的腸粘膜PMNs浸潤,不影響中度腸I/R(90min腸缺血)誘導(dǎo)的PMNs浸潤、顯著增加輕度腸I/R(50min腸缺血)誘導(dǎo)的腸粘膜PMNs浸潤。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)TLR4在腸I/R損傷具有致病和保護(hù)雙重作用,并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)這與這一作用可能與其促炎和抗炎作用有關(guān)。本研究支持TLR4在維持腸穩(wěn)態(tài)中的關(guān)鍵作用,但其作用機(jī)制尤其是抗炎機(jī)制仍有待研究。另外,本研究中TLR4對低致死性腸I/R休克的保護(hù)作用提示對于以TLR4及其相關(guān)信號分子作為靶點(diǎn)的抗炎治療,臨床上應(yīng)持慎重態(tài)度。
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圖 1. TLR4 （ -/- ） 小 鼠 和 WT 小 鼠 在 不 同 輕 重 程 度 腸 I/R(120min,90min,50min,and 30min 腸缺血)時的生存率。*P < 0.05 vs WTFig.1. Survival of TLR4(-/-) and WT mice in intestinal I/R with difischemia duration (120 min, 90 min,50 min, and 30 min). *P < 0.05mice.TLR4（-/-）小鼠和 WT 小鼠在不同輕重程度腸 I/R 時小腸黏膜大體損傷情照片見圖 2。假手術(shù)組 WT 小鼠和 TLR4（-/-）小鼠腸管外觀大體正常。在I/R（120min 缺血）時，WT 小鼠腸管擴(kuò)張，水腫明顯，，節(jié)段性\

本文編號：2601095