【摘要】：目的:深入了解慢加急性肝衰竭的具體代謝過程,為慢加急性肝衰竭的機制研究指明方向。同時探索診斷及評價慢加急性肝衰竭的新指標(biāo),改變臨床依賴生化等單一指標(biāo)的困境,為疾病的診斷及評估提供新的可能指標(biāo)。方法:通過膽管結(jié)扎制作膽汁淤積型肝硬化的SD大鼠,飼養(yǎng)1月后,使用D-半乳糖胺誘導(dǎo)制造慢加急性肝衰竭的大鼠模型。分別在給藥前Oh和給藥后的不同時間點(24h,36h,48h)麻醉大鼠并取材。并取Control組.(行假手術(shù))大鼠作為對照。部分組織樣本送病理室切片,其余進(jìn)行勻漿。將組織勻漿及血漿樣本進(jìn)行基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)的代謝組學(xué)的分析。獲得的原始數(shù)據(jù)使用R軟件進(jìn)行處理后,得到原始數(shù)據(jù)表。將原始數(shù)據(jù)表導(dǎo)入SIMCA-P等軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,篩選組織中的差異性代謝產(chǎn)物,分析慢加急性肝衰竭過程中涉及的重要代謝通路,并追蹤這些產(chǎn)物在血漿中的變化趨勢。結(jié)果:大鼠手術(shù)后出現(xiàn)腹水、膽管膨出等表現(xiàn),生化指標(biāo)提示,與Control組相比,BDL組與ACLF組均出現(xiàn)肝臟損傷,病理HE染色證實肝衰竭模型造模成功。多元統(tǒng)計學(xué)分析示各組區(qū)分度良好,通過VIP值等篩選鑒定出組織與血漿中發(fā)生明顯變化的產(chǎn)物主要集中在氨基酸類、部分糖類及少量脂肪酸。涉及的代謝通路主要是支鏈與芳香族、含硫氨基酸等的生物合成與代謝,淀粉、蔗糖、半乳糖等糖類的代謝及甘油酯、類固醇、部分磷脂的合成與代謝。動態(tài)監(jiān)測這這些差異性物質(zhì)的含量變化,發(fā)現(xiàn)其中6種與肝損傷程度有良好的相關(guān)性,為磷酸、酪氨酸、色氨酸、尿素、甘油、磷酰乙醇胺,可作為臨床評估肝損傷的可能指標(biāo)。結(jié)論:運用代謝組學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)磷酸、酪氨酸、色氨酸、尿素、甘油、磷酰乙醇胺其動態(tài)變化具有一定的臨床意義,且通過代謝通路富集,多集中在氨基酸及糖類代謝中,尤以支鏈及芳香族氨基酸的合成及代謝最為突出,為疾病的臨床診療及基礎(chǔ)機制研究提供了證據(jù)。
【圖文】：

將三組大鼠的肝俎織用ＨＥ及Ｍａｓｓｏｎ染色后，病理片置于光學(xué)顯微鏡下觀察，逡逑可見慢加急性肝衰竭的不同階段的典型病理表現(xiàn)：逡逑正常大鼠的肝臟組織中（圖３－１Ａ），肝小葉結(jié)構(gòu)明顯，匯管區(qū)清晰，膽管細(xì)胞逡逑無增生，結(jié)締組織無明顯增生；膽汁淤積性肝硬化大鼠，即ＢＤＬ組的肝臟組織中逡逑（圖３－１Ｂ１）可見肝組織結(jié)構(gòu)不清，肝小葉被破壞，膽菅細(xì)胞大量增生，以及少量逡逑炎細(xì)胞浸潤，Ｍａｓｓｏｎ染色可見結(jié)締組織明顯增生（圖３－１Ｂ２）；邋ＡＣＬＦ組大鼠的肝逡逑臟（圖３RG見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤’肝組織出現(xiàn)點灶狀壞死，ｆ死灶的ＩＥｔ逡逑細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失。逡逑Ａ逡逑ｒ—逡逑ｍｍｍｍｍ逡逑ｉｉ逡逑

步的進(jìn)祥和后續(xù)分析。在轉(zhuǎn)化過程中，衍生化條件的穩(wěn)定性和可重復(fù)性對實驗起逡逑到了重要影響。因此我們隨機挑選了一個樣本，在處理過程中制作３份，進(jìn)樣時逡逑隨機插入在編好的隊列中進(jìn)樣。重疊三個同一組織來源的ＴＩＣ圖譜（圖３－３Ａ），可逡逑見重疊度良好，沒有明顯的偏移，證明實驗衍生化方法及條件穩(wěn)定可靠，具有良逡逑好的可重復(fù)性。逡逑在ＧＣ－ＭＳ的分析過程中，，機器的穩(wěn)定性無疑也是最重要的一環(huán)，它直接關(guān)系逡逑到ＴＩＣ圖的質(zhì)量及后續(xù)的分析結(jié)果。為驗證機器的穩(wěn)定性，我們將同一個祥本在逡逑不同時間點隨機進(jìn)樣三次。重疊三張色譜圖（圖３－３Ｂ），可見色譜圖重疊良好，沒逡逑有明顯偏移，峰強度類似，局部放大（圖３－３Ｃ）可見，對單一峰來說，三次進(jìn)祥逡逑出峰時間和強度基本相同，證明機器時間穩(wěn)定性良好，本次實驗數(shù)據(jù)有效可靠。逡逑１４逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.3;R-332

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本文編號：2597643