【摘要】：目的:擬靶向結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染多階段特異性表達的抗原,設(shè)計并構(gòu)建包含多個靶抗原的融合蛋白SHR3;檢測SHR3及其亞組分蛋白能否被安徽省淮南市M.tb感染者外周血T淋巴細(xì)胞免疫識別;以SHR3聯(lián)合佐劑DMT免疫C57BL/6小鼠,并評價其免疫原性。方法:1.選擇M.tb感染后的分泌期、潛伏期和復(fù)蘇期特異性表達抗原Rv1626、Rv2866和Rv1884,構(gòu)建融合蛋白SHR3及其亞組分蛋白的重組表達質(zhì)粒,分別進行原核表達、純化、SDS-PAGE 和 Western blotting 鑒定。。2.依據(jù)結(jié)核病(Tuberculosis,TB)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)篩選臨床受試者,分為感染者(包括TB患者和潛伏感染者)與健康對照者。利用全血干擾素釋放分析技術(shù)(Whole-blood IFN-γrelease assay,WBIA)檢測 SHR3 及其亞組分蛋白誘導(dǎo)M.tb感染者及健康對照者外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的特異性干擾素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)水平及其差異;并在特異性抗原SHR3刺激受試者外周血淋巴細(xì)胞后,以流式細(xì)胞術(shù)檢測抗原特異性IFN-γ和IL-2單陽及雙陽的CD4+、CD8+T細(xì)胞總數(shù)并比較差異。3.制備亞單位融合蛋白疫苗SHR3/DMT,將C57BL/6小鼠分為PBS陰性對照組、DMT對照組、BCG陽性對照組、SHR3/DMT組和BCG+SHR3/DMT組。按相應(yīng)的免疫方案皮下免疫各組小鼠,9周后處死。以ELISA檢測其抗原特異性抗體滴度;脾淋巴細(xì)胞分泌的抗原特異性IL-4、IL-2、TNF-α和IFN-γ水平;以及以qRT-PCR檢測肺臟抗原特異性IL-4、IL-2、TNF-α和iNOS的表達水平。結(jié)果:1.成功構(gòu)建、表達、純化融合蛋白SHR3及其亞組分蛋白,以SDS-PAGE和Western blotting證實SHR3及其亞組分蛋白鑒定正確,同時具有較高的純度和生物學(xué)活性。2.SHR3及其亞組分蛋白刺激M.tb感染者淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ水平,以及誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-γ、IL-2單陽及雙陽的CD4+和CD8+T細(xì)胞數(shù)均顯著性高于健康對照組。3.SHR3/DMT誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生顯著高水平的IgG抗體及其亞類,IgG2a/IgG1結(jié)果顯示趨向Th1型應(yīng)答;同時誘導(dǎo)小鼠肺臟組織IFN-γ、TNF-α及iNOS表達水平顯著高于PBS組和DMT組。無論以PPD或SHR3刺激,BCG+SHR3/DMT組小鼠均誘導(dǎo)分泌最高水平的總IL-2、IFN-γ和TNF-α,且顯著高于PBS組和DMT組(P0.05)。結(jié)論:以安徽省淮南市M tb感染者T細(xì)胞識別的M tb多階段靶抗原構(gòu)建融合蛋白SHR3,可誘導(dǎo)M tb感染者外周血淋巴細(xì)胞分泌高水平IFN-γ,以及誘導(dǎo)數(shù)量較多的IFN-γ、IL-2單陽及雙陽的CD4+和CD8+T細(xì)胞。SHR3/DMT可誘導(dǎo)免疫后小鼠產(chǎn)生顯著高水平IL-2和IFN-γ。上述實驗結(jié)果均證實SHR3可誘導(dǎo)高水平的抗原特異性CD4+Th1型應(yīng)答。本研究為在動物模型中進一步評價SHR3抗Mtb感染的保護性建立了研究基礎(chǔ)。圖15;表8;參57;
【圖文】：

圖２邋ｐＥＴ－３０ｂ圖譜逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｐＥＴ－３０ｂ邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑

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【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R392

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8 于銘;鞏雪;孫園園;葉菁;;超聲微泡攜帶HSP70-MAGEA1融合蛋白疫苗腫瘤治療的實驗研究[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第十一屆全國腹部超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2016年

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4 曾瑞紅;RSV重組蛋白疫苗的制備及其免疫原性和保護性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

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6 李金耀;通過共免疫鼠卵透明帶3 DNA和蛋白疫苗技術(shù)增強免疫不孕效果及降低卵巢炎癥反應(yīng)的研究[D];新疆大學(xué);2007年

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8 劉波;雙功能HPV治療性融合蛋白疫苗的抗癌作用實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

9 宋欣欣;提高HPV融合蛋白疫苗療效策略研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

10 李曉楠;手足口病新型疫苗的初步研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

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4 任繼玲;口蹄疫重組蛋白疫苗的計算機輔助設(shè)計及功能研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 崔珂;CpG ODN對口蹄疫重組蛋白疫苗增效作用的研究[D];吉林大學(xué);2010年

6 李菲;結(jié)核潛伏抗原篩選與治療性融合蛋白疫苗的制備[D];蘭州大學(xué);2016年

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本文編號：2597030