【摘要】：肝臟是人體的排毒器官,容易受到各種因素影響而損傷。臨床中常需要應(yīng)用化療為病人進一步治療創(chuàng)造機會,不可避免會引起肝損傷。因此,在化療中常輔以保肝藥物。肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一種多功能生長因子,在肝臟再生中起重要作用。然而HGF的半衰期極短,來源有限,極大限制了臨床應(yīng)用。再者HGF作為生長因子,大量迅速入血會產(chǎn)生全身中毒作用,需要高效和安全使用HGF。聚乳酸羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)有良好的生物相容性和降解性,已被美國FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于藥物制劑。研究表明,載生長因子PLGA納米粒能使生長因子不易被降解,增加在機體的穩(wěn)定性并提高生物利用度。[目的]應(yīng)用實驗室構(gòu)建的PLGA納米粒緩釋體系,制備含不同濃度HGF的納米粒,對納米粒的質(zhì)量進行評估,并用于治療CC14誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型,驗證納米粒的作用。[方法]CCK-8測定HGF對HepG2增殖最佳刺激濃度。實驗室構(gòu)建的納米粒緩釋體系制備含不同濃度HGF納米粒,納米粒度儀檢測粒徑大小、多分散系數(shù)和zeta電位;透射電鏡觀察表面和內(nèi)部結(jié)構(gòu);BCA和ELISA檢測載藥量和體外釋放曲線;電子天平稱量計算回收率。設(shè)置對照、模型、HGF60ng、HGF120ng、NPs、HGF-NPs-2μg和HGF-NPs-4μg組小鼠。尾靜脈注射HGF溶液或納米粒72h造模,24h后取材。ELISA檢測血液和肝組織HGF濃度。觀察肝臟大體和HE切片,計算肝臟系數(shù)和病變率。全自動生化分析儀測定AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN和Scr濃度。ELISA測定肝組織中SOD、GPX和MDA含量。[結(jié)果]HGF濃度為40ng/ml和80ng/ml時,能顯著促進HepG2增殖。制備的三種納米粒物理性質(zhì)良好,大小分布均勻,單峰分布,回收率穩(wěn)定,約40%。能達到藥物突釋和緩釋效果,載藥量為(4.21±0.15)%、(0.001268±0.000058)%和(0.002422 ±0.000030)%。與相同量HGF溶液比,HGF納米粒組小鼠血液和肝組織中HGF濃度更高,AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN 和 Scr 濃度更低,SOD、GPX 含量更高,MDA較少,肝組織壞死面積減少,肝臟水腫程度降低。[結(jié)論]成功制備含不同載藥量HGF的納米粒,物理性質(zhì)良好穩(wěn)定,大小分布均勻,呈單峰分布,回收率穩(wěn)定,能夠達到藥物突釋和緩釋的效果。HGF納米粒能在更長的時間內(nèi),使HGF在小鼠血液和肝組織中維持更高的濃度。當(dāng)小鼠肝臟受到CCl4損傷時,能更顯著降低血液中AST、ALT、ALP、T-BIL、BUN和Scr的濃度,提高肝組織中SOD、GPX的含量,降低MDA的生成,減少肝組織壞死、炎癥浸潤,降低組織水腫,維持小鼠肝功能和腎功能。
【圖文】：

逑７２、９６、１２０ｈ檢測ＯＤ４５０的吸光度。根據(jù)ＣＣＫ－８測定的結(jié)果（見表１－１）繪逡逑制成ＯＤ４５０吸光度曲線，結(jié)果如下圖１－２所示。ＨＧＦ在一定濃度范圍內(nèi)對ＨｅｐＧ２逡逑細(xì)胞系呈濃度相關(guān)性。當(dāng)ＨＧＦ濃度為４０ｎｇ／ｍｌ和８０ｎｇ／ｍｌ時，ＨｅｐＧ２細(xì)胞的增逡逑殖最為明顯，而當(dāng)ＨＧＦ濃度逐漸升高時，其對ＨｅｐＧ２增殖的影響并不明顯。逡逑當(dāng)ＨＧＦ濃度達到６４０ｎｇ／ｍｌ和１２８０ｎｇ／ｍｌ時，甚至出現(xiàn)了抑制細(xì)胞生長的情況。逡逑表１－１不同濃度的ＨＧＦ刺激ＨｅｐＧ２細(xì)胞增殖的統(tǒng)計（ｎ＝５，邋Ｉ±ｓ）逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＨｅｐＧ２邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ逡逑ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＨＧＦ邋（ｎ＝５，邋ｘ±ｓ）逡逑組別邐時間逡逑（ｎｇ／ｍｌ）邐１２ｈ邐２４ｈ邐４８ｈ邐７２ｈ邐９６ｈ逡逑對照組邐０．３１５±０．０３０４邐０．６９０±０．０２３８邐０．９４１±０．０２９０邐１．２３７±０．０５８９邐１．２４２±０．０３９１逡逑１邐０．３０５±０．０２２２邐０．６３８士０．０５０４邐０．８８４±０．０５４２邐１．１８９士０．０２２０邐１．１９０±０．０２２３逡逑１０邐０．３０９±０．０２１６邐０．６４３土０．０３４６邐０．８８５土０．０６３８邐１．２０５±０．１０９６邐１．２１０±０．１０２０逡逑２０邐０．３２２±0

完成３種納米粒，包括空白納米粒（ＮＰｓ），ＨＧＦ初始投藥量為２｜ｉｇ的低濃逡逑度納米粒（ＨＧＦ－ＮＰｓ－２ｎｇ）和ＨＧＦ初始投藥量為４ｐｇ的高濃度納米粒逡逑（ＨＧＦ－ＮＰｓ－４＾ｇ）的制備后，首先觀察各種納米粒的表面和內(nèi)部形態(tài)。如圖２－１逡逑所示，將納米粒制備成混懸液后滴進銅網(wǎng)并用磷鎢酸進行染色，通過透射電鏡逡逑觀察可見，在放大２００００倍觀察時，３種納米粒的形態(tài)和大小非常接近，均在逡逑約２００ｎｍ左右，納米粒呈球狀，膜殼藥庫型，表面光滑。納米粒冷凍干燥后，逡逑為乳白色粉沫狀，如圖２－１結(jié)果所示。逡逑丨，，，ｖｊｊ逡逑ＮＰｓ邐ＨＧＦ－ＮＰｓ－２＾ｉｇ邋ＨＧＦ－ＮＰｓ－４＾ｇ逡逑圖２－１邐３種納米粒的透射電鏡圖（＞＜２００００倍）及凍干產(chǎn)品逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ邋ｅｌｅｃｔｒｏｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋ｉｍａｇｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｋｉｎｄｓ邋ｏｆ邋ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ邋（＞＜２００００）逡逑ａｎｄ邋ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ邋ｐｒｏｄｕｃｔ逡逑２．３．２邐３種納米粒的粒徑大小、Ｚｅｔａ電位和多分散系數(shù)逡逑透射電鏡下觀察到３種納米粒均呈球狀，且大小接近。為進一步測量納米逡逑粒的大小分布、穩(wěn)定性情況等性質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575;R-332

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本文編號：2596558