發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 08:48

【摘要】：乳酸桿菌(Lactobacillus)是一種革蘭氏陽(yáng)性菌,被廣泛應(yīng)用于食品、藥品等工業(yè)。乳酸桿菌不僅安全無(wú)毒,還具有多種益生效果,也被證明可以作為活菌載體遞送抗原。由于乳酸桿菌種類較多,且生化生理特性、分子構(gòu)成及免疫特性均不同,種間轉(zhuǎn)錄和翻譯的差異也很大,因此其遞呈抗原的能力不同,不同菌株對(duì)同一抗原的表達(dá)水平和表達(dá)產(chǎn)物不同,對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的抗體水平以及刺激淋巴細(xì)胞表達(dá)不同細(xì)胞因子也有差別。雖然乳酸桿菌作為活菌載體有諸多優(yōu)點(diǎn),但是其基因工程發(fā)展較慢,其作為受體菌依舊有許多難題需要攻克。金黃色葡萄球菌(S.aureus)是一種分布廣泛的人畜共患病原菌,能引發(fā)菌血癥、感染性心內(nèi)膜炎等多種疾病。近年來,由于抗生素的濫用,耐藥菌株逐年增加,呈現(xiàn)多重耐藥趨勢(shì),這導(dǎo)致S.aureus的預(yù)防和治療難度增大。目前,尚無(wú)有效的S.aureus疫苗問世。S.aureus通過黏膜感染機(jī)體,且尚未有關(guān)于S.aureus黏膜疫苗的報(bào)道。在本研究中,首先從本實(shí)驗(yàn)室的菌庫(kù)中篩選獲得3株野生型乳桿菌作為受體菌株,分別是開菲爾乳桿菌SXJ29、干酪乳桿菌SXJ30、植物乳桿菌WXD234。以egfp作為報(bào)告基因,構(gòu)建了不同的重組乳酸桿菌SXJ29/SXJ30/WXD234(pNZ8148-egfp),通過Western blot和激光共聚焦檢測(cè),證明外源基因egfp可以在3株野生型乳酸桿菌成功表達(dá)。3株重組乳酸桿菌與野生菌株相比,生理特性無(wú)明顯變化,依舊有耐酸耐膽鹽特性,外源質(zhì)粒也能穩(wěn)定遺傳。證明了基于開菲爾乳桿菌SXJ29、干酪乳桿菌SXJ30和植物乳桿菌WXD234為載體的乳酸桿菌遞送系統(tǒng)的可行性。該乳酸桿菌遞送系統(tǒng)能成功表達(dá)S.aureus抗原鐵-異羥肟酸攝取蛋白D2(FhuD2)和無(wú)毒突變的ɑ-溶血素(Hla _(H35L))。以重組乳酸菌口服免疫小鼠后,在S.aureus引發(fā)的肺炎感染模型中能為小鼠提供不同程度的保護(hù)。其中免疫重組菌WXD234(pNZ8148-hla_(H35L))的保護(hù)效果最好,該重組菌能在S.aureus引發(fā)的肺炎模型中提高小鼠的存活率,一定程度緩解肺部感染程度,減少S.aureus在肺部的定植。本研究建立了基于開菲爾乳桿菌SXJ29、干酪乳桿菌SXJ30和植物乳桿菌WXD234為載體的乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng),該表達(dá)系統(tǒng)能遞送S.aureus抗原并對(duì)S.aureus肺部感染提供一定的免疫保護(hù)效果,為乳酸桿菌表達(dá)外源抗原以及S.aureus黏膜疫苗的開發(fā)提供了新思路和理論指導(dǎo)。
【圖文】：

同時(shí)也導(dǎo)致了免疫反應(yīng)的有效性（見圖1.1）[22]。因此盡管口服免疫可以在小腸、升結(jié)腸、乳腺和唾液腺中誘導(dǎo)產(chǎn)生大量抗體，但在大腸、扁桃體或女性生殖道黏膜誘導(dǎo)產(chǎn)生 IgA 抗體的效率相對(duì)較低[23-25]。相反，直腸免疫在直腸能引發(fā)強(qiáng)烈的局部免疫反應(yīng)，，但在小腸和近端結(jié)腸幾乎沒有反應(yīng)[24-26]。人的鼻腔或扁桃體免疫可導(dǎo)致上呼吸道黏膜和局部分泌物（唾液、鼻腔分泌物）產(chǎn)生抗體，但不會(huì)引起腸道的免疫反應(yīng)[27, 28]。

egfp片段的PCR結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392-33

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本文編號(hào)：2594820