【摘要】：誘導(dǎo)成功的移植耐受可以使人類跨過免疫系統(tǒng)的天然障礙,真正的完成器官“置換”的終極目標(biāo);成功的免疫耐受不僅可以延長移植物存活時間,而且可以緩解器官移植帶來的巨大經(jīng)濟負(fù)擔(dān)、患者身心壓力和器官短期的醫(yī)療局面�，F(xiàn)階段治療方案雖然能減少急慢性排斥反應(yīng)發(fā)生,卻無法達到耐受。腎移植術(shù)后隨訪4至5年,大約30%病人會呈現(xiàn)慢性排斥的病理表現(xiàn)。因此,當(dāng)前移植學(xué)界的首要目標(biāo)就是探求新的免疫抑制方案。大鼠腎臟移植模型具有通過可適用于人類情況的手段研究耐受性誘導(dǎo)的潛力,研究者可以通過操控大鼠腎移植排斥反應(yīng),理解其發(fā)病機制。泌尿道的重建技術(shù)是大鼠腎移植模型的關(guān)鍵技術(shù)之一,因為大鼠輸尿管的口徑極窄,易導(dǎo)致尿漏、輸尿管壞死和輸尿管狹窄等并發(fā)癥,可致移植腎積水或移植腎功能惡化。不同的泌尿道重建術(shù)式也會導(dǎo)致腎移植的不同結(jié)局。我們在建立大鼠腎移植模型時采用包含輸尿管的供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合技術(shù)重建泌尿道,同時與供體膀胱瓣-受體膀胱吻合的方法進行比較,以期改良泌尿道重建方法,減少并發(fā)癥的產(chǎn)生。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺可以顯著減輕大鼠血管移植物動脈粥樣硬化,減輕移植物血管病。其機制為改善炎癥反應(yīng),減輕淋巴細(xì)胞的浸潤,減少VEGF、PDGF、ICAM、TNF-α及PCNA的表達,延緩移植血管的硬化進程以及減輕內(nèi)膜增生。在本實驗中我們通過建立改良的供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合尿路重建建立大鼠腎移植模型,觀察沙利度胺對大鼠腎移植急、慢性排斥的作用,并闡明其免疫學(xué)機制。通過混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),觀察沙利度胺在體外對異體反應(yīng)性T細(xì)胞的增殖及分化等情況的影響,闡明其對反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的調(diào)控機制。第一部分:改良的供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合建立大鼠腎移植模型目的:應(yīng)用改良的供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合泌尿道重建建立大鼠腎移植模型,與供體膀胱瓣-受體膀胱吻合的方法進行比較,明確改良的大鼠腎移植泌尿道重建方式的效果。方法:分別以供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合泌尿道重建及供體膀觥瓣-受體膀胱吻合泌尿道重建的方式建立大鼠腎移植模型:A組,供體小膀胱瓣-受體膀胱粘膜層漿肌層雙層縫合(n=12):B組,供體膀胱瓣-受體膀胱單層縫合(n=11)。對比泌尿道重建時間及并發(fā)癥。結(jié)果:A組尿路重建時間為14.12±1.73min、B組尿路重建時間為10.16±1.19min,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);A組泌尿道并發(fā)癥發(fā)生率為25%,B組泌尿道并發(fā)癥發(fā)生率為9.09%,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:改良的供體小膀胱瓣-受體膀胱雙層縫合的泌尿道重建方式能減少大鼠腎移植術(shù)后泌尿系統(tǒng)并發(fā)癥,盡管尿路重建時間時間較傳統(tǒng)的單層縫合時間長,但可以顯著減少尿漏的可能性,為可靠性高的重建術(shù)式。第二部分:沙利度胺對大鼠腎移植急性排斥反應(yīng)的作用目的:闡明沙利度胺在大鼠腎移植急性排斥反應(yīng)中的作用。方法:建立Fischer到Lewis大鼠腎移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作為對照。將受體大鼠分為同系移植組(Isograft,Iso)、異系移植組(Allograft,Allo)、環(huán)孢素組(CsA)和沙利度胺組(Thalidomide,Tha)。動態(tài)監(jiān)測術(shù)后肌酐(Scr)的變化,觀察至術(shù)后5天,留取血液標(biāo)本檢測白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6、IL-17和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的濃度,移植腎行病理檢查。結(jié)果:急性排斥模型中Allo組及Tha組大鼠肌酐均進行性升高,Tha組肌酐水平與Allo組相比無明顯差異,均顯著高于同時間點Iso組及CsA組。Tha組移植腎病理學(xué)改變與Allo組相似,均可見急性腎小管損傷表現(xiàn),彌漫性重度炎癥浸潤伴嚴(yán)重腎小球病,內(nèi)膜動脈炎和小動脈透明變性。Allo組IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的濃度顯著升高,Tha組血清中IL-6、IL-17和TNF-α的濃度顯著低于Allo組,但IL-2的濃度顯著高于Allo組。結(jié)論:這些結(jié)果表明,沙利度胺的免疫抑制作用較弱,對急性排斥反應(yīng)效果較差。第三部分:沙利度胺對大鼠腎移植慢性排斥反應(yīng)的作用及其免疫調(diào)節(jié)機制的初步研究目的:觀察沙利度胺對大鼠腎移植模型慢性排斥反應(yīng)的作用,并明確其確切的機制。方法:建立Fischer到Lewis大鼠腎移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作為對照。將受體大鼠分為同系移植組(Isograft,Iso)、異系移植組(Allograft,Allo)和沙利度胺組(Thalidomide,Tha)。術(shù)后8周取血液測定受者血清中肌酐,IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的濃度;流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中T細(xì)胞亞群分布。取移植腎行病理檢查;免疫熒光、蛋白印跡實驗檢測各組腎組織中轉(zhuǎn)換生長因子β1(TGF-βl)、平滑肌肌動蛋白α(α-SMA)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達。結(jié)果:腎移植后8周,移植腎出現(xiàn)不同程度的單個核細(xì)胞浸潤、腎小球硬化、腎小管萎縮、間質(zhì)纖維化和小動脈內(nèi)膜厚等病理學(xué)改變。Tha組大鼠移植腎的病理改變明顯輕于Allo組。Tha組大鼠血肌酐水平及血清中炎性細(xì)胞因子的濃度顯著低于Allo組,Tha組外周血中CD4+CD25+、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞比例顯著升高、CD4+Th17+T細(xì)胞比例顯著降低,TGF-β1,α-SMA和VEGF蛋白的表達顯著降低。結(jié)論:沙利度胺可以顯著減輕慢性排斥反應(yīng),其機制可能為沙利度胺減少炎癥因子的分泌,改變T細(xì)胞亞群的分布,并降低相關(guān)致纖維化蛋白表達有關(guān)。第四部分:沙利度胺對異體反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的調(diào)控作用目的:觀察沙利度胺在體外對體反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的影響,闡明其對反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)控作用。方法:建立Fischer-Lewis單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(Mixed lymphocyte culture MLC)體系,分為對照組(Control,Con)及沙利度胺組(Thalidomide,Tha),流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞亞群分布情況及凋亡率,ELISA法測定培養(yǎng)液中IL-2,IL-6,IL-17和TNF-α的濃度。結(jié)果:Tha組中Th17細(xì)胞比例顯著低于同時間點的對照組,Treg細(xì)胞比例均顯著高于同時間點的Con組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05):Tha組培養(yǎng)液中IL-2濃度顯著高于同時間點的Con組(P0.05);Tha組中T細(xì)胞凋亡率顯著高于同時間點的Con組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而IL-6,IL-17和TNF-α濃度顯著低于同時間點的Con組(P0.05)。結(jié)論:沙利度胺在體外可以促進異體反應(yīng)性T細(xì)胞中Treg細(xì)胞增殖,抑制Th17細(xì)胞增殖,改變T細(xì)胞亞群分布,增加異體反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡,降低炎癥因子IL-6,IL-17和TNF-α的濃度。
【圖文】：

Ｃｏｎｔｒｏｌ：對照組；Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ：沙利度胺組。逡逑圖２各組混合淋巴培養(yǎng)體系中ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ細(xì)胞亞群分布逡逑６ｈ邐１２ｈ邐２４ｈ逡逑１０＜邋ｊｅＵ邐Ｖｉ２＜％邋，0邐４２？＊邐１0４＇邋？ｍ邐？ｓｉ％逡逑ｉ邋ｉｊ邐ｒ、邐ｉ，，0３］逡逑ｇ邋Ｉ邋ｉ0３ｊ邐１邐，0２；邐Ｉ逡逑０１邋，１邋．．邐ｉ邋，，，S茫邋邋澹懾澹攏澹咤危義稀�。＿卜逦７邋冲？逦：．？；皱沉x希

本文編號：2594108