【摘要】：癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見慢性疾病之一,有20%~30%為難治性癲癇,目前抗癲癇藥物對此很難完全控制。因此,對于癲癇治療新方法的研發(fā)迫在眉睫。近年研究認(rèn)為,除傳統(tǒng)的化學(xué)性突觸外,“非突觸”機(jī)制在神經(jīng)元的同步化和癲癇的發(fā)病機(jī)制中具有重要地位。連接神經(jīng)元之間通訊的縫隙連接(Gap Junction,GJ)可能是產(chǎn)生驚厥的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Cx36是GJ家族中的一員,它可能影響癇性發(fā)作的發(fā)生、維持及傳播,阻斷Cx36通訊可為新型抗癲癇藥的研發(fā)提供新思路。目的:觀察Cx36在海人酸(Kainic Acid,KA)點(diǎn)燃癲癇大鼠模型中的作用及相關(guān)機(jī)制,阻斷Cx36是否有抑制癇性放電的作用,以及探討Cx36通過改變細(xì)胞骨架穩(wěn)定性而影響癲癇過程的機(jī)制。方法:健康、成年、雄性Wistar大鼠228只,采用海人酸杏仁核點(diǎn)燃大鼠癲癇模型,隨機(jī)分為正常對照(CONT)組、假手術(shù)(SHAM)組、KA致癇(KA)組,及不同Cx36阻斷劑-甘珀酸(carbenoxolone,CBX)組、奎寧(quinine,QN)組、奎尼丁(quinidine,QND)組。通過皮層腦電活動(dòng)監(jiān)測、Western Blot、免疫組化、激光共聚焦及HE染色方法,觀察造模后不同時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、3d、7d)癲癇大鼠皮層腦電活動(dòng)的變化、Cx36表達(dá)變化及病理改變;使用特異性及非特異性Cx36阻斷劑(CBX、QN、QND)預(yù)處理癲癇大鼠模型,評價(jià)Cx36阻斷劑是否有抑制癇性放電、減少癲癇發(fā)作的作用,觀察Cx36阻斷劑對Cx36表達(dá)水平變化的影響,以及細(xì)胞骨架的重要組成部分-微管相關(guān)蛋白Ⅱ(microtubule associated protein-2,MAP-2)及突觸前囊泡膜的分子標(biāo)記-突觸素(synaptophysin,SYP)的變化,進(jìn)一步探討縫隙連接干預(yù)癲癇過程的機(jī)制。結(jié)果:(1)KA注射后大鼠腦電均出現(xiàn)多種形式的癇性放電。典型波形有尖波、棘波、尖慢波、棘慢波等。以3h點(diǎn)為最多,24h點(diǎn)仍可記錄到少量癇性波。Western blot法及激光共聚焦法檢測KA致癇后大鼠的海馬Cx36表達(dá)在3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、3天及7天時(shí)間點(diǎn)的變化特征為先增高后逐漸降低的走勢。KA致癇后3小時(shí)大鼠的海馬Cx36的表達(dá)量迅速增多,第6小時(shí)達(dá)高峰,24小時(shí)開始逐漸下降,第3天、第7天低于正常水平。KA致癇后6小時(shí)、3天、7天組Cx36表達(dá)量與SHAM組相比有顯著性差異(p0.05)。3h組海馬CA3區(qū)以神經(jīng)元變性為主,6h組主要病理學(xué)改變是神經(jīng)元丟失或死亡。24h、3d、7d組可見神經(jīng)元脫失及不同程度的膠質(zhì)細(xì)胞增生。(2)大鼠腹腔注射CBX、QN、QND后對基礎(chǔ)腦電活動(dòng)沒有明顯改變。于KA致癇后30分鐘觀察腦電活動(dòng),可見癇性放電的頻率和幅度顯著減少(p0.05)。90分鐘時(shí)間點(diǎn)差異不明顯。Western blot法及激光共聚焦法檢測CBX、QN、QND組Cx36蛋白的表達(dá)量顯著降低(p0.05)。(3)采用免疫組化、激光共聚焦法檢測,在CBX、QN、QND組中,SYP表達(dá)與SHAM組相比顯著下降(p0.05),MAP-2表達(dá)與SHAM組相比亦顯著下降(p0.05)。結(jié)論:(1)海人酸點(diǎn)燃癲癇大鼠模型是研究癲癇發(fā)病機(jī)理較理想的動(dòng)物模型�？p隙連接Cx36作為電突觸可能在癲癇的形成和發(fā)展過程中起到促進(jìn)的作用。(2)Cx36阻斷劑可能減輕癲癇過程中的癇性放電及癲癇發(fā)作。(3)Cx36阻斷劑可能通過減少縫隙連接通道的開放影響細(xì)胞骨架微管裝配和神經(jīng)元細(xì)胞間信號傳導(dǎo),抑制興奮性網(wǎng)絡(luò)的形成而減輕癇性放電及癲癇發(fā)作。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱文增;倪金霞;唐強(qiáng);東貴榮;李紅穎;;“頭穴叢刺法”對局灶性腦梗死大鼠可塑性蛋白MAP-2的影響[J];中國針灸;2010年01期

，

本文編號：2473160