【摘要】：目的研究同型半胱氨酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平及其表達(dá)的影響。方法以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,用含有不同濃度同型半胱氨酸的RPMI1640培養(yǎng)液對(duì)其作用48 h,MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖生長(zhǎng)能力并確定實(shí)驗(yàn)藥物濃度;流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡水平;熒光定量PCR測(cè)定Bcl-2 mRNA表達(dá);甲基化特異性PCR聯(lián)合巢式降落式PCR測(cè)定Bcl-2啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平。結(jié)果同型半胱氨酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力有明顯的抑制作用,OD值從0.99±0.05逐漸下降至0.28±0.03(P0.01),呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系;與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率由2.30%±0.60%上升至16.40%±0.73%(P0.01),Bcl-2 mRNA表達(dá)明顯下降(P0.01),Bcl-2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平降低(P0.05)。結(jié)論同型半胱氨酸通過下調(diào)Bcl-2啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平導(dǎo)致其mRNA表達(dá)水平減少,繼而誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,這可能在同型半胱氨酸促動(dòng)脈粥樣硬化過程中起到重要作用。
[Abstract]:Aim to study the effect of homocysteine on methylation level and expression of Bcl-2 gene promoter in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were treated with RPMI1640 medium containing different concentrations of homocysteine for 48 h. Apoptosis level was measured by flow cytometry, Bcl-2 mRNA expression was detected by fluorescence quantitative PCR, methylation level of Bcl-2 promoter was detected by methylation specific PCR combined with nested PCR. Results homocysteine significantly inhibited the proliferation of human umbilical vein endothelial cells, and the OD value decreased from 0.99 鹵0. 05 to 0. 28 鹵0. 03 (P0. 01) in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the apoptotic rate of the experimental group increased from 2.30% 鹵0.60% to 16.40% 鹵0.73% (P0.01), and the expression of Bcl-2 mRNA decreased significantly (P0.01). The methylation level of promoter region of Bcl-2 gene was decreased (P0.05). Conclusion homocysteine may play an important role in promoting atherosclerosis by down-regulating the methylation level of Bcl-2 promoter resulting in the decrease of mRNA expression and then inducing endothelial cell apoptosis.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué);寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬總院心臟中心;
【基金】：寧夏自然科學(xué)基金(NZ11266)資助
【分類號(hào)】：R341

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本文編號(hào)：2423225