【摘要】：目的研究卡潑肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)編碼的復(fù)制轉(zhuǎn)錄激活因子(replication and transcription activator,RTA)調(diào)控宿主細(xì)胞Bcl-2表達(dá)的分子機(jī)制及其生物學(xué)意義。方法用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白質(zhì)印跡(western blotting)技術(shù)檢測(cè)RTA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、TPA誘導(dǎo)的KSHV陽(yáng)性細(xì)胞Bcl-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平;采用熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測(cè)RTA對(duì)Bcl-2基因啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)。構(gòu)建RNA干擾慢病毒載體,篩選穩(wěn)定感染的BC3細(xì)胞,TPA誘導(dǎo)48 h后,分別用PCR、PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)病毒子DNA和細(xì)胞凋亡率。結(jié)果 RTA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、TPA誘導(dǎo)的KSHV陽(yáng)性細(xì)胞Bcl-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著增高。RTA反式激活Bcl-2基因啟動(dòng)子,這種激活作用具有劑量依賴(lài)性。用RNA干擾技術(shù)抑制Bcl-2基因后,TPA誘導(dǎo)的KSHV陽(yáng)性細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞相比凋亡率增加,病毒子產(chǎn)生減少。結(jié)論KSHV RTA能夠調(diào)控內(nèi)源性細(xì)胞凋亡信號(hào)通路,延緩溶解性感染宿主細(xì)胞的凋亡,并促進(jìn)病毒子產(chǎn)生。
[Abstract]:Objective to investigate the molecular mechanism and biological significance of kapperosarcoma virus (kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)-encoded replication-activator (replication and transcription activator,RTA (replication and transcription activator,RTA) in regulating the expression of Bcl-2 in host cells. Methods Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot (western blotting) were used to detect the expression of Bcl-2 mRNA and protein in RTA transfected cells and KSHV positive cells induced by TPA. Luciferase reporter gene technique was used to detect the regulation of RTA on the activity of Bcl-2 gene promoter. RNA interference lentivirus vector was constructed to screen stable infected BC3 cells. After 48 h of TPA induction, the viral DNA and apoptosis rate were detected by PCR,PI staining flow cytometry. Results the expression of Bcl-2 mRNA and protein in KSHV positive cells induced by TPA was significantly increased in RTA transfected cells. RTA transactivated Bcl-2 gene promoter in a dose-dependent manner. After Bcl-2 gene was inhibited by RNA interference, the apoptosis rate of KSHV positive cells induced by TPA was higher than that of control cells, and the production of virus was decreased. Conclusion KSHV RTA can regulate endogenous apoptosis signaling pathway, delay apoptosis of host cells and promote viral production.
【作者單位】： 三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室;美國(guó)賓夕法尼亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;
【基金】：National Cancer Institute 5R01CA091792-08,5R01CA108461-05,1R01CA137894-01 and 1R01CA138434-01A209 National Institute of Allergy and Infectious Diseases 5R01AI067037-04 National Institute of Dental and Craniofacial Research 5R01DE017338-03(to ESR)
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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