【摘要】：目的:比較臍血與成人外周血粒細胞Toll樣受體(TLRs)的表達情況,為新生兒相關(guān)疾病的臨床治療積累實驗資料。方法:取臍血和成人外周血,用密度梯度離心結(jié)合紅細胞裂解法分離、收集粒細胞,流式細胞術(shù)鑒定粒細胞純度,RT-qPCR檢測TLRs 10個成員的mRNA表達水平,流式細胞術(shù)測定部分TLRs的蛋白熒光強度。結(jié)果:(1)流式細胞術(shù)檢測結(jié)果:采用密度梯度離心結(jié)合紅細胞裂解法分離收集的臍血粒細胞CD19-CD24+為(95.66±1.73)%,CD3+為(4.27±1.22)%,成人外周血粒細胞CD19-CD24+為(95.48±2.13)%,CD3+為(4.82±1.07)%。(2)RT-qPCR結(jié)果顯示:臍血粒細胞和成人外周血粒細胞TLR1(0.141±0.091 vs 0.691±0.447)、TLR2(0.388±0.337 vs 0.901±0.508)、TLR4(0.093±0.071 vs 0.254±0.147)、TLR6(0.056±0.045 vs 0.202±0.034)、TLR7(0.001±0.001 vs 0.004±0.003)和TLR8(0.046±0.040 vs 0.211±0.146)的表達差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),TLR3、TLR5、TLR9和TLR10的表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);其中TLR3、TLR7和TLR9在臍血和成人外周血粒細胞的相對表達水平均較低。(3)流式分析顯示臍血與成人外周血粒細胞TLR2平均蛋白熒光強度(21.40±3.09 vs 30.50±5.69)差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而TLR4平均蛋白熒光強度差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:臍血粒細胞TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA及TLR2蛋白表達低于成人外周血粒細胞,提示新生兒粒細胞識別細菌性病原微生物感染的能力可能存在缺陷或尚未完全成熟。這是否與新生兒急性細菌性毒血癥發(fā)病及病死率較高有直接聯(lián)系,有待進一步研究。
[Abstract]:Objective: to compare the expression of Toll like receptor (TLRs) in umbilical cord blood and adult peripheral blood in order to accumulate experimental data for clinical treatment of neonatal diseases. Methods: umbilical cord blood and adult peripheral blood were isolated by density gradient centrifugation and erythrocyte lysis. Granulocytes were collected, granulocyte purity was identified by flow cytometry, and mRNA expression of 10 members of TLRs was detected by RT-qPCR. The fluorescence intensity of some TLRs proteins was measured by flow cytometry. Results: (1) flow cytometry: the CD19-CD24 and CD3 of cord blood granulocytes collected by density gradient centrifugation and erythrocyte lysis were (95.66 鹵1.73)% and (4.27 鹵1.22)%, respectively. The CD19-CD24 of adult peripheral blood granulocytes was (95.48 鹵2.13)%, and that of CD3 was (4.82 鹵1.07)%. (2) the results of RT-qPCR showed that the TLR1 of cord blood granulocytes and adult peripheral blood granulocytes was (0.141 鹵0.091 vs) 0.691 鹵0.447. TLR2 (0.388 鹵0.337 vs 0.901 鹵0.508), TLR4 (0.093 鹵0.071 vs 0.254 鹵0.147), TLR6 (0.056 鹵0.045 vs 0.202 鹵0.034); The expression of TLR7 (0.001 鹵0.001 vs 0.004 鹵0.003) and TLR8 (0.046 鹵0.040 vs 0.211 鹵0.146) was significantly different (P0.01), but the expression of TLR3,TLR5,TLR9 and TLR10 had no significant difference (P0.05). In which TLR3, The relative expression level of TLR7 and TLR9 in umbilical cord blood and adult peripheral blood granulocyte was lower. (3) flow cytometry showed that the average fluorescence intensity of TLR2 protein in umbilical cord blood and adult peripheral blood granulocyte was (21.40 鹵3.09 vs 30.50 鹵5.69). There was statistical significance (P0.05); But TLR4 average protein fluorescence intensity difference has no statistical significance (P0.05). Conclusion: the expression of TLR1,TLR2,TLR4, TLR6 mRNA and TLR2 protein in umbilical cord blood granulocyte is lower than that in adult peripheral blood granulocyte, suggesting that the ability of neonate granulocyte to recognize bacterial pathogenic microorganism infection may be deficient or immature. Whether this is directly related to the incidence and mortality of neonatal acute bacterial toxemia needs further study.
【作者單位】： 暨南大學醫(yī)學院田家炳醫(yī)學實驗中心 暨南大學第一臨床醫(yī)院 暨南大學醫(yī)學院血液病研究所
【基金】：廣東省產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究與開發(fā)資金計劃項目(No.2010B031600107) 廣東省自然科學基金資助項目(No.07005966)
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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