【摘要】：目的:建立觀察直接接觸共培養(yǎng)體系中單一種類細(xì)胞生長變化的研究方法,探索直接接觸共培養(yǎng)技術(shù)在體外細(xì)胞之間相互作用研究中的應(yīng)用。方法:大鼠軟骨細(xì)胞與熒光標(biāo)記的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以1∶2的比例平面共培養(yǎng)7天。共培養(yǎng)2天時,應(yīng)用共聚焦顯微鏡觀測共培養(yǎng)體系中兩種細(xì)胞的增殖情況;共培養(yǎng)7天時,應(yīng)用流式分選技術(shù)分選出單一種類細(xì)胞,然后分析其成軟骨分化特異性基因的表達(dá)。結(jié)果:經(jīng)過共培養(yǎng)后,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞比例減少;共培養(yǎng)組中軟骨細(xì)胞增殖率高于單獨(dú)培養(yǎng)組;在共培養(yǎng)體系中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化趨勢明顯,但軟骨細(xì)胞成軟骨分化特異性基因表達(dá)下降。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)以及共聚焦顯微鏡技術(shù)成功檢測了直接接觸共培養(yǎng)體系中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和軟骨細(xì)胞各自的細(xì)胞增殖與成軟骨分化特異性基因的表達(dá),明確了直接接觸共培養(yǎng)技術(shù)可以有效地應(yīng)用于體外細(xì)胞間相互作用的研究。
[Abstract]:Aim: to establish a method to observe the growth and change of single cell in direct contact co-culture system, and to explore the application of direct contact co-culture in the study of cell interaction in vitro. Methods: rat chondrocytes and fluorescent labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells were co-cultured at 1:2 level for 7 days. The proliferation of two kinds of cells in co-culture system was observed by confocal microscope for 2 days, and the expression of specific genes for chondrogenic differentiation was analyzed by flow sorting technique after 7 days of co-culture. Results: after co-culture, the proportion of bone marrow mesenchymal stem cells decreased, the proliferation rate of chondrocytes in co-culture group was higher than that in single culture group, and the trend of chondrogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in co-culture system was obvious. However, the specific gene expression of chondroblast differentiation was decreased. Conclusion: flow cytometry and confocal microscopy were used to detect the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells and chondrocytes respectively and the expression of specific genes for chondrogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells and chondrocytes. It is clear that direct contact co-culture can be used effectively in the study of inter-cell interaction in vitro.
【作者單位】： 北京大學(xué)第三醫(yī)院運(yùn)動醫(yī)學(xué)研究所;北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81171726)
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2231800