發(fā)布時(shí)間：2018-09-08 06:48

【摘要】：目的篩選獲得日本血吸蟲(chóng)(Schistosoma japonicum)核糖體蛋白(SjRibosomal_L18a)編碼基因,預(yù)測(cè)其B細(xì)胞表位�？寺�、表達(dá)重組蛋白SjRibosomal_L18a,并比較分析其與合成的B細(xì)胞表位的潛在診斷價(jià)值。方法利用B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)軟件篩選日本血吸蟲(chóng)蛋白質(zhì)序列,獲取函數(shù)打分值較高且抗原表位片段多的免疫原性蛋白,合成B細(xì)胞表位片段。生物信息學(xué)方法分析免疫原性蛋白基因及其編碼蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量(M r)、等電點(diǎn)、親水性、信號(hào)肽、跨膜區(qū)和功能結(jié)構(gòu)域等理化性質(zhì)。制備日本血吸蟲(chóng)各蟲(chóng)期階段總RNA,逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)擴(kuò)增目的基因,分析各蟲(chóng)期轉(zhuǎn)錄本豐度。將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至原核表達(dá)載體pET-28a中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)菌株,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),組氨酸標(biāo)記親和層析法純化重組蛋白。ELISA法比較分析重組蛋白和合成的B細(xì)胞表位的潛在診斷價(jià)值。結(jié)果預(yù)測(cè)軟件篩選出免疫原性核糖體蛋白SjRibosomal_L18a以及2個(gè)B細(xì)胞表位(P1和P2)。SjRibosomal_L18a基因開(kāi)放閱讀框(ORF)由531個(gè)堿基組成,編碼176個(gè)氨基酸,不含跨膜區(qū)和信號(hào)肽,為M r20 741,等電點(diǎn)為11.12。RT-PCR結(jié)果顯示,各蟲(chóng)期均檢測(cè)到SjRibosomal_L18a的轉(zhuǎn)錄本,且轉(zhuǎn)錄水平均較高。成功構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒SjRibosomal_L18a/pET-28a,誘導(dǎo)表達(dá)獲得包涵體形式的重組蛋白,約為M r26 069。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,重組蛋白、P1和P2檢測(cè)15份慢性血吸蟲(chóng)病患者血清和15份健康人血清的敏感性和特異性分別為53.3%(8/15)和100%(15/15)、60%(9/15)和100%(15/15)、73.3%(11/15)和100%(15/15)。結(jié)論獲得重組蛋白SjRibosomal_L18a及其免疫原性較高的表位片段P1、P2,P1和P2用于血清診斷的敏感性均高于重組蛋白。
[Abstract]:Objective to obtain (Schistosoma japonicum) ribosomal protein (SjRibosomal_L18a) encoding gene from Schistosoma japonicum and predict its B cell epitope. Clone and express recombinant protein SjRibosomal_L18a, and compare its potential diagnostic value with synthetic B cell epitopes. Methods the B cell epitope prediction software was used to screen the protein sequence of Schistosoma japonicum. The immunogenicity proteins with high function score and many antigenic epitope fragments were obtained and the B cell epitope fragments were synthesized. The relative molecular weight (M r), isoelectric point, hydrophilicity, signal peptide, transmembrane region and functional domain of the immunogenicity protein gene and its encoded protein were analyzed by bioinformatics. Total RNA, reverse transcriptional PCR (RT-PCR) amplification of Schistosoma japonicum at different stages was prepared and the abundance of transcripts was analyzed. The amplified product was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli (E.coli) BL21 (DE3) strain. Isopropyl- 尾 -Dthiogalactoside (IPTG) was induced expression. The potential diagnostic value of recombinant protein and synthesized B cell epitopes was compared and analyzed by histidine labeling affinity chromatography and Elisa. Results the immunogenicity ribosomal protein SjRibosomal_L18a and two B cell epitopes (P1 and P2) were screened by software. The open reading frame (ORF) of Sj RibosomalL18a gene was composed of 531 bases, encoding 176 amino acids, without transmembrane region and signal peptide. The results of isoelectric point (11.12.RT-PCR) showed that the transcripts of SjRibosomal_L18a were detected in all stages, and the transcription level was higher. The recombinant expression plasmid SjRibosomal_L18a/pET-28a, was successfully constructed to induce the expression of the recombinant protein in the form of inclusion body. The result of 069.ELISA detection showed that the recombinant protein was expressed in the form of inclusion body. The sensitivity and specificity of recombinant protein P1 and P2 were 53.3% (8 / 15) and 100% (15 / 15) 60% (9 / 15) and 100% (15 / 15) in 15 sera of patients with chronic schistosomiasis and 15 cases of healthy persons, respectively, and the sensitivity and specificity were 73.3% (1115 / 15) and 100% (15 / 15), respectively. Conclusion the sensitivity of obtaining recombinant protein SjRibosomal_L18a and its epitope fragments P1, P2, P1 and P2 for serum diagnosis is higher than that of recombinant protein.
【作者單位】： 華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲(chóng)病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲(chóng)病和絲蟲(chóng)病合作中心;
【基金】：國(guó)家傳染病科技重大專項(xiàng)(No.2009ZX1004-302) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(No.2007AA02Z153)~~
【分類號(hào)】：R392.1

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2 通訊員 彭振 記者 程守勤;抑制一種酶的活性可致日本血吸蟲(chóng)死亡[N];健康報(bào);2012年

3 記者　曹玲娟;我科學(xué)家公布日本血吸蟲(chóng)“基因天書(shū)”[N];人民日?qǐng)?bào);2006年

4 記者　 章迪思 實(shí)習(xí)生 周惠婷;血吸蟲(chóng)基因“天書(shū)”全球發(fā)布[N];解放日?qǐng)?bào);2006年

5 岳陽(yáng);國(guó)內(nèi)生物信息平臺(tái)首發(fā)大規(guī)�；蚪M數(shù)據(jù)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

6 記者　謝軍;我國(guó)首次向全球公布日本血吸蟲(chóng)基因組工作框架圖序列數(shù)據(jù)[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

7 胡德榮;血吸蟲(chóng)病研究成果全球共享[N];健康報(bào);2006年

8 記者 王慧慧;皖產(chǎn)血吸蟲(chóng)病診斷試劑全國(guó)推廣[N];安徽日?qǐng)?bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 洪煬;日本血吸蟲(chóng)童蟲(chóng)在不同敏感性宿主體內(nèi)差異表達(dá)蛋白的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 劉昒;日本血吸蟲(chóng)骨形成蛋白分子的鑒定和功能研究[D];武漢大學(xué);2013年

3 劉鋒;人CD34+造血干/祖細(xì)胞和日本血吸蟲(chóng)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

4 何原;日本血吸蟲(chóng)酚氧化酶基因結(jié)構(gòu)及其功能的研究[D];武漢大學(xué);2012年

5 徐靜瑋;日本血吸蟲(chóng)抗原誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的分子證據(jù)[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

6 胡雪梅;日本血吸蟲(chóng)（中國(guó)大陸株）線粒體相關(guān)蛋白分子及其抗原表位的克隆和免疫保護(hù)作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2001年

7 朱傳剛;日本血吸蟲(chóng)疫苗的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

8 陳巖勤;白頭翁總皂苷對(duì)日本血吸蟲(chóng)及其宿主的作用和機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

9 唐桂霞;日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)源抗原與抗原遞呈細(xì)胞的相互作用的（體外）實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

10 胡元生;日本血吸蟲(chóng)酪氨酸羥化酶信號(hào)通路的干預(yù)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 刁薇;東方田鼠日本血吸蟲(chóng)天然抗性相關(guān)基因的篩選和驗(yàn)證[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

2 王廷安;日本血吸蟲(chóng)分子生物學(xué)及生物信息學(xué)研究與應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2010年

3 孔娟;日本血吸蟲(chóng)腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶兩種同工酶的相關(guān)研究[D];華東理工大學(xué);2011年

4 葛軍;日本血吸蟲(chóng)尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶及白介素-16的克隆、表達(dá)與初步鑒定[D];南昌大學(xué);2011年

5 王瑋;基于生物信息學(xué)的日本血吸蟲(chóng)糖代謝研究[D];華中師范大學(xué);2007年

6 羅秀菊;日本血吸蟲(chóng)重組亞單位疫苗的研究[D];中南大學(xué);2003年

7 徐叢榮;日本血吸蟲(chóng)組織蛋白酶B基因的克隆、表達(dá)及初步鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

8 張純;日本血吸蟲(chóng)鞘脂激活蛋白樣蛋白的基因克隆、表達(dá)及相關(guān)免疫生物學(xué)特性的研究[D];江蘇省血吸蟲(chóng)病防治研究所;2010年

9 鄧世敏;日本血吸蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)條件的篩選和抗原含量動(dòng)態(tài)變化的研究[D];武漢大學(xué);2005年

10 王衍海;日本血吸蟲(chóng)雌性特異基因及排泄—分泌抗原的篩選[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：2229695