本文選題：miR-223 + 靶基因�。� 參考：《華中科技大學》2015年博士論文

【摘要】：第一部分miR-223調控子宮內膜上皮細胞IGF-1R的表達 目的：構建miR-223過表達慢病毒載體,通過轉染RL95-2上皮細胞系明確miR-223在子宮內膜上皮細胞中的靶基因。 方法：利用TargetScan5.1獲得miR-223的潛在靶基因信息；采用慢病毒轉染體系上調RL95-2上皮細胞系中miR-223的表達,分別用real-time PCR、Western Blot檢測預測靶基因mRNA和蛋白表達水平；構建miR-223的靶標克隆載體,利用雙熒光素酶報告基因載體確定靶基因。 結果：(1)根據(jù)TargetScan5.1預測得到miR-223的潛在靶基因IGF-1R、FOXO1、E2F1、 IKKα;(2)過表達RL95-2上皮細胞中miR-223后IGF-1R、FOXO1、E2F1、IKKα的mRNA表達均無改變,但是IGF-1R的蛋白表達明顯下降；(3)雙熒光素酶報告基因證實miR-223直接調節(jié)IGF-1R的表達。 結論：miR-223作用在IGF-1R的3’UTR調節(jié)子宮內膜上皮細胞IGF-1R的蛋白表達。 第二部分miR-223和IGF-1R在人類子宮內膜的表達規(guī)律 目的：通過檢測月經周期不同時期子宮內膜miR-223和IGF-1R的表達,觀察人類子宮內膜上miR-223和IGF-1R的表達趨勢。 方法：利用Real-time PCR檢測增生中期和分泌中期子宮內膜miR-223和IGF-1R mRNA的表達水平,Western Blot和免疫組化檢測增生中期和分泌中期子宮內膜IGF-1R的蛋白表達水平及細胞定位。 結果：(1)Real-time PCR結果顯示miR-223在分泌中期子宮內膜的表達明顯低于增生中期子宮內膜,而IGF-1R的mRNA在兩組子宮內膜上的表達未見明顯改變；(2)Western Blot結果顯示IGF-1R蛋白在分泌中期子宮內膜上的表達明顯高于增生中期子宮內膜；(3)免疫組化結果顯示IGF-1R主要表達在子宮內膜上皮細胞上,且分泌中期子宮內膜上的表達明顯高于增生中期子宮內膜。 結論：miR-223和IGF-1R在人類子宮內膜上的表達呈現(xiàn)負相關,進一步證實了細胞實驗的結論。 第三部分過表達miR-223抑制胚胎的植入 目的：通過體外滋養(yǎng)細胞球侵入模型和在體胚胎植入模型研究miR-223對胚胎植入的影響。 方法：利用Bewo滋養(yǎng)細胞和RL95-2上皮細胞系構建內膜-滋養(yǎng)細胞球相互作用的體外侵入模型,觀察Bewo細胞球在單層內膜上皮細胞上的侵入情況；建立小鼠妊娠模型,使用miR-223激動劑干預小鼠子宮內膜miR-223的表達,觀察miR-223對胚胎植入的影響。 結果：(1)在Bewo細胞球和RL95-2上皮細胞共培養(yǎng)體系中,過表達miR-223組Bewo細胞球的侵入率明顯低于對照組,添加IGF-1可逆轉miR-223對Bewo細胞球的抑制效果；(2)小鼠宮角注射miR-223激動劑干預后小鼠著床胚胎數(shù)明顯下降。 結論：體內及體外實驗結果均證實了miR-223抑制胚胎著床,且這一抑制效應可能是通過調節(jié)IGF-1R實現(xiàn)的。
[Abstract]:Part one: miR-223 regulates the expression of IGF-1R in endometrial epithelial cells Aim: to construct miR-223 overexpression lentivirus vector and to identify the target gene of miR-223 in endometrial epithelial cells by transfection of RL95-2 epithelial cell line. Methods: the potential target gene information of miR-223 was obtained by TargetScan5.1, the expression of miR-223 in RL95-2 epithelial cell line was up-regulated by lentivirus transfection system, the expression level of mRNA and protein was predicted by real-time PCR Western Blot, and the target clone vector of miR-223 was constructed. The target gene was identified by double luciferase reporter gene vector. Results according to TargetScan5.1 prediction, the miR-223 potential target gene IGF-1RnFOXO1E2F1 (IKK 偽 F2F1) overexpression in RL95-2 epithelial cells showed no change in mRNA expression after miR-223, but the expression of IGF-1R protein decreased significantly (3) the double luciferase reporter gene confirmed that miR-223 directly regulated the expression of IGF-1R. Conclusion the 3'UTR of IGF-1R regulates the expression of IGF-1R protein in endometrial epithelial cells. The second part: the expression of miR-223 and IGF-1R in human endometrium Aim: to observe the expression trend of miR-223 and IGF-1R in human endometrium by detecting the expression of miR-223 and IGF-1R in endometrium at different periods of menstrual cycle. Methods: Real-time PCR was used to detect the expression of miR-223 and IGF-1R mRNA in the endometrium of metaphase hyperplasia and middle secretory period. Western Blot and immunohistochemistry were used to detect the expression and localization of IGF-1R in the middle and middle secretory phase of endometrium. Results the results of Real-time PCR showed that the expression of miR-223 in the middle secretory endometrium was significantly lower than that in the proliferative endometrium. The expression of IGF-1R mRNA in the endometrium of the two groups did not change significantly. The results of Western Blot showed that the expression of IGF-1R protein in the middle secretory endometrium was significantly higher than that in the proliferative endometrium. On the endometrial epithelial cells, And the expression of endometrial secretory medium was significantly higher than that of proliferative endometrium. Conclusion there is a negative correlation between the expression of miR-223 and IGF-1R in human endometrium, which further confirms the conclusion of cell experiment. The third part: overexpression of miR-223 inhibits embryo implantation Aim: to study the effect of miR-223 on embryo implantation by invading trophoblast ball in vitro and in vivo embryo implantation model. Methods: Bewo trophoblastic and RL95-2 epithelial cell lines were used to establish an in vitro invasion model of intima-trophoblastic interaction, to observe the invasion of Bewo cells on monolayer endometrial epithelial cells, and to establish a mouse pregnancy model. MiR-223 agonist was used to interfere the expression of miR-223 in mouse endometrium and to observe the effect of miR-223 on embryo implantation. Results in the co-culture system of Bewo cell ball and RL95-2 epithelial cell, the invasion rate of Bewo cell ball in over-expressed miR-223 group was significantly lower than that in control group. The inhibitory effect of miR-223 on Bewo cells was reversed by adding IGF-1. The number of implanted embryos in mice was significantly decreased after the injection of miR-223 agonist into uterine horn of mice. Conclusion: the results of in vivo and in vitro experiments confirm that miR-223 inhibits embryo implantation, and this inhibitory effect may be achieved by regulating IGF-1R.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R321

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;科學家發(fā)現(xiàn)胚胎著床的機制[J];中華醫(yī)學信息導報;2003年04期

2 ;美研究揭示胚胎著床機理[J];首都醫(yī)藥;2003年04期

3 付永倫;體外受精-胚胎移植時影響胚胎著床的因素[J];生殖與避孕;1997年02期

4 劉菲;淋巴細胞與胚胎著床[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);2004年01期

5 夏敏,楊菁,徐望明;體外受精-胚胎移植與胚胎著床相關性的研究[J];國外醫(yī)學.婦幼保健分冊;2004年03期

6 黃燕明;章漢旺;;絲裂原活化蛋白激酶信號通路與胚胎著床[J];國外醫(yī)學(計劃生育/生殖健康分冊);2006年03期

7 李萍;張延麗;張爍;;體外受精-胚胎移植中胚胎著床的相關性研究[J];中國計劃生育學雜志;2006年08期

8 石文艷;李靜;;胚胎著床及其分子調控研究進展[J];醫(yī)學綜述;2008年22期

9 全松;張力佳;;胚胎著床研究進展[J];中國實用婦科與產科雜志;2014年01期

10 宮婷;孔英;;整合素介導的信號通路在胚胎著床中的作用[J];現(xiàn)代婦產科進展;2014年05期

相關會議論文 前10條

1 胡燕軍;黃荷鳳;;子宮內膜上皮細胞緊密連接在胚胎著床中的作用[A];2009中國杭州生殖健康學術論壇暨浙江省計劃生育學與生殖醫(yī)學分會學術年會論文匯編[C];2009年

2 孫兆貴;王健;李衛(wèi)華;蔣雅紅;石燕;顧正;丁訓誠;;絲氨酸蛋白酶抑制劑在抗胚胎著床和抗腫瘤方面的作用[A];中國藥理學會第七屆全國生殖藥理學術交流會論文摘要匯編[C];2011年

3 韓研;熊承良;;纖溶酶原激活及其抑制系統(tǒng)與胚胎著床[A];湘鄂贛首屆性與生殖健康學術研討會論文匯編[C];2007年

4 劉群;徐鑫鑫;邵小光;;縮宮素受體抑制劑及其在臨床中的應用進展[A];中華醫(yī)學會第十次全國婦產科學術會議婦科內分泌會場（婦科內分泌學組、絕經學組、計劃生育學組）論文匯編[C];2012年

5 譚慧寧;楊增明;;環(huán)氧合酶及前列腺素E合成酶在小鼠著床前胚胎中的表達[A];第九次全國生殖生物學學術研討會論文摘要集[C];2003年

6 陳子江;;ART與胚胎著床失敗[A];第十期“全國女性生殖免疫”學習班暨反復胚胎著床和早期妊娠失敗專題研討會資料匯編[C];2007年

7 陳巍;孔英;方曉倩;王燕;朱正美;燕秋;;著床期胚胎及子宮內膜IGF-Ⅱ的表達及寡糖的調控作用[A];第八屆全國復合糖生物化學與分子生物學學術會議論文摘要論文集[C];2004年

8 黃小瓊;孫俠;鐘志勇;王剛;黃紅坤;陳系古;;戊酸雌二醇對胚胎著床障礙小鼠子宮內膜容受性的調節(jié)作用[A];第九屆中國實驗動物科學年會（2010新疆）論文集[C];2010年

9 張雪瑞;侯瓊;隋琳琳;徐躍飛;任鳳;孔英;;IL-1因子與β1，4-GAT-I在胚胎著床中的作用[A];2008年全國糖生物學學術會議論文摘要[C];2008年

10 楊明;徐躍飛;竺飛鑫;李政科;夏英;謝云鵬;孔英;;骨橋蛋白通過MAPK信號通路上調MMP9表達調控胚胎著床[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學與分子生物學會——2011年學術交流會論文集[C];2011年

相關重要報紙文章 前3條

1 陳漢橋;我國胚胎著床機理研究獲新成果[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 陳漢橋;大連醫(yī)大胚胎著床機理研究獲成果[N];中國醫(yī)藥報;2000年

3 何屹;英為致癌基因胚胎檢測開綠燈[N];科技日報;2004年

相關博士學位論文 前8條

1 李星;EBP50在胚胎著床期小鼠子宮上的表達與調節(jié)[D];武漢大學;2013年

2 黃凱;MicroRNA-223調控胚胎著床的機制研究[D];華中科技大學;2015年

3 何亞萍;免疫抑制因子MNSFβ在胚胎著床與發(fā)育中的作用機制的研究[D];華中科技大學;2012年

4 劉欣梅;人子宮內膜中S100A11調節(jié)胚胎著床的分子機制研究[D];浙江大學;2012年

5 王嬌;胚胎PAPPA，，poFUT1的表達調控與胚胎著床相關性的研究[D];大連醫(yī)科大學;2014年

6 劉帥;sLeX和LeY寡糖抗原表達及其調控與胚胎著床[D];大連醫(yī)科大學;2009年

7 胡燕軍;人子宮內膜上皮細胞緊密連接及其蛋白在胚胎著床中的作用及調節(jié)機制研究[D];浙江大學;2010年

8 田永強;IGF-Ⅱ在胚胎著床中的作用及其信號轉導通路[D];甘肅農業(yè)大學;2002年

相關碩士學位論文 前10條

1 吳麗敏;心理應激對胚胎著床的影響及CD4~+Foxp3~+Treg機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

2 吳蓉花;豬MOF克隆及其敲低對孤雌胚胎著床前發(fā)育的影響[D];安徽農業(yè)大學;2014年

3 張翠珍;Drosha在早孕期小鼠子宮內膜的表達規(guī)律及在胚胎著床過程中的作用[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 侯瓊;β1，4-半乳糖基轉移酶Ⅰ在胚胎著床中的作用及與白血病抑制因子的相互調控[D];大連醫(yī)科大學;2008年

5 劉菲;淋巴細胞對子宮內膜蛻膜化及胚胎著床行為的影響[D];大連醫(yī)科大學;2003年

6 謝云鵬;β1,4半乳糖基轉移酶I與激素、TGF-β1在胚胎著床調控中的作用[D];大連醫(yī)科大學;2012年

7 楊翠華;胚胎著床期細胞因子及細胞凋亡的免疫調控[D];河北農業(yè)大學;2003年

8 朱麗紅;HOXA10與MMP-9在胚胎著床中的相關性及可能的相關信號傳導通路研究[D];復旦大學;2012年

9 陳麗麗;HCG對β1，4-GaITⅠ在調控胚胎著床作用中的影響及調控機制研究[D];大連醫(yī)科大學;2013年

10 姜蕾;關于IVF-ET后早期妊娠出血的相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2009年

本文編號：1982069