本文選題：H6N1 + 感染��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的:近二十年來,高致病禽流感病毒H5N1、H7N9等頻繁從禽類跨物種間屏障直接感染人,對人類健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成巨大威脅。令人擔(dān)憂的是,2013年5月,我國臺灣出現(xiàn)全球首例人類感染H6N1亞型流感病毒。雖然H6N1亞型屬低致病性病毒,但在禽類普遍存在,有演變成新型流感病毒的風(fēng)險,也可能成為引發(fā)新一輪全球流感的元兇,科研工作者除了提防高致病禽流感病毒H5N1、H7N9,也不能忽視低致病禽流感病毒H6N1的潛在威脅。本文在前期研究基礎(chǔ)上,探索水禽源性鴨H6N1亞型禽流感病毒是否具有感染哺乳動物及人類的潛能,進一步篩選優(yōu)勢病毒株,為后期研究其在跨種屬傳播過程中基因特征提供實驗基礎(chǔ)。實驗方法:1.禽流感病毒的擴增及EID5o實驗檢測對于前期從市場中分離得到的鴨H6N1亞型及已篩選得到的H9N2亞型共5株禽流感病毒進行雞胚接種法擴增,擴增后的雞胚尿囊液離心濃縮成病毒液-80℃低溫保存待用。將病毒液梯度稀釋做EID50(雞胚半數(shù)感染劑量)實驗檢測,在動物感染實驗前確定病毒接種稀釋倍數(shù)。2.禽流感病毒感染BABL/c小鼠實驗用凍存已確定稀釋倍數(shù)的5株禽流感病毒模擬病毒傳播途徑,采用滴鼻、滴眼、滴咽途徑接種感染6-8周齡的雌性BABL/c小鼠,定期監(jiān)測其攻毒后一周內(nèi)體重變化及排毒情況,并剖殺游離脾臟、肺臟、腎臟、腦、鼻甲等組織,每種組織標(biāo)本分2份,一份研磨取上清液擴增、HA檢測,另一份組織固定,HE染色觀察組織病理學(xué)變化,免疫組化方法定位檢測病毒NP蛋白抗原。3.禽流感病毒體外感染豬肺組織實驗快速游離豬肺組織,無菌裁剪為小組織塊于6孔培養(yǎng)板中,用梯度稀釋的病毒液體外感染豬肺組織,定期采樣監(jiān)測培養(yǎng)上清液及組織研磨液中禽流感病毒HA效價,HE染色觀察組織病理學(xué)變化,免疫組化方法定位檢測病毒NP蛋白抗原。4.禽流感病毒體外感染人肺組織實驗收集臨床手術(shù)中獲取的新鮮游離人肺組織,用稀釋后的禽流感病毒液進行體外感染,定期采樣監(jiān)測培養(yǎng)上清液及組織研磨液中禽流感病毒HA效價,HE染色觀察組織病理學(xué)變化,免疫組化方法定位檢測病毒NP蛋白抗原。實驗結(jié)果:1.鴨H6N1亞型禽流感病毒感染小鼠情況:攻毒后小鼠活動度差、進食減少、1.周內(nèi)體重減輕,組織研磨上清液擴增、HA檢測陽性,禽流感病毒抗體陽性,HE染色顯示攻毒后小鼠肺組織充血、細(xì)胞壞死及炎癥反應(yīng),免疫組化檢測細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性。2.鴨H6N1亞型禽流感病毒體外感染豬肺組織情況:組織研磨上清液擴增、HA檢測陽性,HE染色顯示病毒感染后肺組織出現(xiàn)局部細(xì)胞壞死,免疫組化檢測細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性。3.鴨H6N1亞型禽流感病毒體外感染人肺組織情況:組織研磨上清液擴增、HA檢測陽性,HE染色顯示病毒感染后肺組織出現(xiàn)局部細(xì)胞壞死,免疫組化檢測細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性。研究結(jié)論:1.鴨H6N1亞型禽流感病毒具有跨種屬間屏障從水禽直接感染哺乳動物BABL/c小鼠、豬及人肺組織的能力,豐富了流感病毒進化演變及跨種屬傳播的理論。2.DK/GX/767/2010(H6N1)禽流感病毒株較其他4株禽流感病毒感染致病能力較強,可作為研究鴨H6N1亞型禽流感病毒跨種屬傳播到人的優(yōu)勢病毒株。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : In the past 20 years , highly pathogenic avian influenza virus ( H5N1 ) has been infected with avian influenza virus ( H6N1 ) . Avian influenza virus ( H6N1 ) subtype avian influenza virus ( H6N1 ) was detected by immunohistochemical method .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R373

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本文編號：1829393