發(fā)布時間：2018-04-16 02:24

  本文選題：鴨乙肝病毒 + 核心蛋白��； 參考：《西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2013年06期

【摘要】：目的制備抗鴨乙肝病毒core蛋白的單克隆抗體并進(jìn)行鑒定。方法 PCR擴(kuò)增鴨乙肝病毒(DHBV)core基因片段,構(gòu)建表達(dá)載體pET28a(+)/DHBV core。轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,用Ni 2+親和柱純化目的蛋白。免疫Balb/c小鼠,取脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,ELISA篩選,采用有限稀釋法篩選單克隆雜交瘤細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞克隆。體內(nèi)誘生法大量制備單克隆抗體,進(jìn)行抗體的特異性、效價和亞型的鑒定。結(jié)果成功構(gòu)建表達(dá)載體pET28a(+)/DHBV core,并表達(dá)DHBV core蛋白。獲得2株穩(wěn)定分泌抗DHBV core抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別為2D7和5G10,細(xì)胞培養(yǎng)液抗體效價為1∶400和1∶800。選擇5G10細(xì)胞株制備單克隆抗體,小鼠腹水抗體效價可達(dá)1∶320 000。鴨肝組織免疫組化結(jié)果顯示,DHBV病毒載量1010copies/mg的肝組織中DHBV core蛋白的表達(dá)明顯高于病毒載量105copies/mg的肝組織,而未感染DHBV的鴨肝細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)DHBV core蛋白。亞型鑒定結(jié)果為IgG2aκ鏈。結(jié)論制備并獲得了抗DHBV core蛋白的單克隆抗體,為DHBV core蛋白的功能研究、診斷試劑的研制與抗病毒治療研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare and identify monoclonal antibodies against duck hepatitis B virus (core) protein.Methods DHBV core gene fragment was amplified by PCR and the expression vector pET28a was constructed.The fusion protein was expressed and purified by Ni 2 affinity column.Balb/c mice were immunized. Spleen cells were fused with SP2/0 myeloma cells to be screened by Elisa. Monoclonal hybridoma cells were screened by limited dilution method and cloned.Monoclonal antibodies were prepared in vivo to identify their specificity, titer and subtype.Results the expression vector pET28a was successfully constructed and the DHBV core protein was expressed.Two hybridoma cell lines stably secreting anti- core antibody were obtained, which were 2D7 and 5G10, respectively. The titers of antibody in cell culture medium were 1: 400 and 1: 800, respectively.5G10 cell line was selected to prepare monoclonal antibody. The titer of mouse ascites antibody was 1: 320 000.The results of immunohistochemistry showed that the expression of DHBV core protein was significantly higher in the liver tissue with 1010copies/mg viral load than in the liver tissue with the viral load of 105copies/mg, but the DHBV core protein was not expressed in the duck liver cells without DHBV infection.The subtype was identified as IgG2a 魏 chain.Conclusion Monoclonal antibodies against DHBV core protein were prepared and obtained, which laid a foundation for the study of the function of DHBV core protein, the development of diagnostic reagent and antiviral therapy.
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院傳染科;西安華廣生物工程有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81101260)~~
【分類號】：Q78

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本文編號：1756897