本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + γδT細(xì)胞�。� 參考：《免疫學(xué)雜志》2013年04期

【摘要】：目的以檢測(cè)和計(jì)算結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)蛋白抗原激活人γδT細(xì)胞增殖的活性單位為指標(biāo),比較不同提取分離方法制備的Mtb抗原制劑激活人γδT細(xì)胞的活性效價(jià)。方法培養(yǎng)的Mtb-H37Ra菌株通過(guò)高溫和超聲方法處理,分別獲取Mtb耐熱抗原(Mtb-HAg)和超聲處理抗原(Mtb-SoAg),采用超濾離心管(3 K,10 K,30 K)和快速液相蛋白層析(FPLC)分組和分離,獲取不同相對(duì)分子質(zhì)量組分的抗原。采集健康成年人外周血分離獲取PBMC,加入不同質(zhì)量濃度梯度的Mtb蛋白抗原或其分離組分,并加IL-2培養(yǎng)12 d后熒光抗體染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)和分析擴(kuò)增T細(xì)胞中γδT細(xì)胞的比例,以擴(kuò)增γδT細(xì)胞最高比例的50%(EC50)所對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度計(jì)算為1個(gè)活性單位。結(jié)果用活性單位計(jì)算法分析發(fā)現(xiàn),某批次的Mtb-HAg(591μg/ml)刺激γδT細(xì)胞擴(kuò)增的EC50為1.4μg/ml,計(jì)算其活性單位為0.71 U/μg;某批次低分子Mtb-SoAg(3 K～10 K)(221μg/ml)的EC50為0.8μg/ml,其活性單位為1.25 U/μg。結(jié)論通過(guò)比較Mtb蛋白抗原不同批次及其不同組分在不同質(zhì)量濃度下刺激γδT細(xì)胞擴(kuò)增數(shù)量的活性,可以計(jì)算獲得相應(yīng)的活性單位,為檢測(cè)Mtb蛋白抗原制劑刺激γδT細(xì)胞增殖活性建立了標(biāo)準(zhǔn)化的計(jì)算方法。
[Abstract]:Objective to detect and calculate the active units of Mycobacterium tuberculosism Mtb protein antigen activated proliferation of human 緯 未 T cells, and compare the activity titers of human 緯 未 T cells activated by Mtb antigens prepared by different extraction and isolation methods.Methods the cultured Mtb-H37Ra strains were treated with high temperature and ultrasound respectively. The Mtb heat-resistant antigen (Mtb-HAg) and ultrasonic treated antigen (Mtb-SoAgG) were obtained. The cells were grouped and separated by ultrafiltration centrifuge tube (3K) and rapid liquid phase protein chromatography (FPLC).The antigens of different molecular weight components were obtained.PBMCs were isolated from the peripheral blood of healthy adults. Mtb antigen or its components were added with different concentration gradient. After 12 days of IL-2 culture, fluorescent antibodies were stained. The proportion of 緯 未 T cells in T cells was detected and analyzed by flow cytometry.The mass concentration corresponding to the highest proportion of 緯 未 T cells was calculated as an active unit.Results the EC50 of 緯 未 T cells stimulated by a batch of Mtb-HAg(591 渭 g / ml was 1.4 渭 g / ml, and its active unit was 0.71 U / 渭 g / 渭 g, and the EC50 of a batch of low-molecular-weight Mtb-SoAg(3 10 KG / ml (221 渭 g / ml) was 0.8 渭 g / ml, and its active unit was 1.25 U / 渭 g / 渭 g.Conclusion by comparing the activity of different batches and different components of Mtb protein antigen stimulated 緯 未 T cell proliferation at different concentrations, the corresponding active units can be obtained.In order to detect the proliferative activity of 緯 未 T cells stimulated by Mtb protein antigen preparation, a standardized calculation method was established.
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：衛(wèi)生部重大傳染病專項(xiàng)(2012ZX10003006-004)
【分類號(hào)】：R392.12

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳 勇,胡建國(guó),呂合作,侯彥強(qiáng),張海峰,李柏青,何海輝;可激活人γδT細(xì)胞的結(jié)核桿菌耐熱多肽抗原的初步純化與活性鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2002年03期

2 王兆源,陳松華,劉偉,葛錫銳;免疫磁珠純化γδT淋巴細(xì)胞的方法[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年05期

3 胡愛玲,韓維棟;醫(yī)學(xué)論文中常用量與單位的正確應(yīng)用[J];西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1997年01期

4 江曉豐,張學(xué)光,李新燕,吳士良,朱學(xué)東;HSP70多肽刺激PBMCs體外擴(kuò)增γδT細(xì)胞及其抗腫瘤效應(yīng)的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1997年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 彭美玉;李柏青;;抗結(jié)核桿菌耐熱抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞的建立及其特性的初步鑒定[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年10期

2 王笑虹,王鴻,馮仲珉,況紅星;傷寒桿菌70KD熱休克蛋白的抗腫瘤作用[J];大連大學(xué)學(xué)報(bào);1999年06期

3 韓彩芝,許順江,劉京生,李興琴,魏麗君;腫瘤細(xì)胞HSP-70多肽誘導(dǎo)CTL及其抗瘤作用機(jī)制的研究[J];河北醫(yī)藥;2002年03期

4 劉濤,田聆,魏于全,趙菊梅,梁傳余;熱休克蛋白與腫瘤的研究進(jìn)展[J];華西醫(yī)學(xué);2004年03期

5 陳 勇,胡建國(guó),呂合作,侯彥強(qiáng),張海峰,李柏青,何海輝;可激活人γδT細(xì)胞的結(jié)核桿菌耐熱多肽抗原的初步純化與活性鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2002年03期

6 曾克勤,胡永紅,張明敏,賴先陽(yáng),張瑋琛;流式細(xì)胞儀檢測(cè)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠γδT細(xì)胞胞內(nèi)TNF-α和IL-10的表達(dá)[J];免疫學(xué)雜志;2004年S1期

7 王敏,張林杰,何金生,葛曉松,陳勇,李柏青;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFSE標(biāo)記人T細(xì)胞亞群增殖反應(yīng)[J];免疫學(xué)雜志;2005年05期

8 遲殿元;;淺談在醫(yī)學(xué)論文寫作過(guò)程中的規(guī)范運(yùn)用法定計(jì)量單位[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年12期

9 石虹,劉玉俠,陳軍;國(guó)內(nèi)γδT淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用相關(guān)基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2005年04期

10 陳勇,呂合作,胡建國(guó),候彥強(qiáng),張海峰,李柏青,何海輝;刺激人γδ~+ T細(xì)胞增殖的結(jié)核桿菌多肽抗原的純化與活性鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 程書榜;熱休克蛋白70與胃腸腫瘤相關(guān)性的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2000年

2 劉濤;鼻咽癌中EB病毒潛伏膜蛋白1和熱休克蛋白90β的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

3 孫光;熱休克蛋白—抗原肽復(fù)合物激活的樹突狀細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 陳小蘭;γδT細(xì)胞對(duì)肺巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 沈曉東;熱休克蛋白70聯(lián)合IL-2對(duì)肝癌治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

3 高詩(shī)娟;異種HSP_（70）及異種HSP_（70）-腫瘤抗原復(fù)合物對(duì)γδT細(xì)胞的活化作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2003年

4 何欣;口腔粘膜白斑和鱗癌中HSP60表達(dá)及其意義[D];浙江大學(xué);2005年

5 王敏;活細(xì)胞染料CFSE在人γδT細(xì)胞增殖及分泌細(xì)胞因子研究中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2005年

6 崔崳;含氮二磷酸鹽聯(lián)合IL-2誘導(dǎo)腎癌患者外周血γδT細(xì)胞增殖的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

7 戴瑋;唑來(lái)膦酸刺激人PBMCs體外擴(kuò)增γδT細(xì)胞及其在肝癌非特異性免疫中的作用[D];蘇州大學(xué);2007年

8 張琢;結(jié)核桿菌多肽抗原誘導(dǎo)了Balb/c 3T3成纖維細(xì)胞AQP1的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李柏青,宋秀宇,王安潮,徐鳳珍,劉叢森,徐曉玲,周彩存;不同T細(xì)胞亞群在抗結(jié)核桿菌感染中的作用[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1999年06期

2 閔宏林,宋秀宇,陳勇,李柏青;結(jié)核桿菌抗原活化的γδT細(xì)胞的抗腫瘤活性[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年05期

3 胡建國(guó),侯彥強(qiáng),陳勇,閔宏林,宋秀宇,李柏青;MtbAK細(xì)胞與CD3AK、LAK細(xì)胞體外增殖和殺瘤活性比較[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年05期

4 陳娟,何維,巴德年;人腫瘤浸潤(rùn)γδΤ細(xì)胞的抗腫瘤活性研究[J];免疫學(xué)雜志;2000年03期

5 吳厚生,謝琪,姜小玲,范行義;用~3H-TdR釋放法測(cè)量細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒功能[J];上海免疫學(xué)雜志;1987年04期

6 王兆源,陳松華,劉偉,葛錫銳;免疫磁珠純化γδT淋巴細(xì)胞的方法[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年05期

7 石學(xué)耕,周雋,史桂英,王龍,吳濟(jì)生,徐清,于金榮,陳賽娟,陳竺,茅予;聯(lián)合使用MACS、FACS富集純化造血干/祖細(xì)胞及其亞群[J];中國(guó)癌癥雜志;1997年03期

8 江曉豐,張學(xué)光,李新燕,吳士良,朱學(xué)東;HSP70多肽刺激PBMCs體外擴(kuò)增γδT細(xì)胞及其抗腫瘤效應(yīng)的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1997年05期

9 何維,林穎,李剛,于松濤,張素梅,劉慶豐,杜桂書,李靜;病原體抗原對(duì)γδT細(xì)胞細(xì)胞毒活性及細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1998年04期

10 何維;γδT細(xì)胞的抗原識(shí)別機(jī)制[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1999年10期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 何維,林穎,李剛,于松濤,張素梅,劉慶豐,杜桂書,李靜;病原體抗原對(duì)γδT細(xì)胞細(xì)胞毒活性及細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1998年04期

2 閔宏林,宋秀宇,陳勇,李柏青;結(jié)核桿菌抗原活化的γδT細(xì)胞的抗腫瘤活性[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年05期

3 石宇,何鐘,王東升;γδT細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1998年03期

4 梅傳忠,沈繼龍,陳勇,李柏青;乙醇及二甲基亞砜對(duì)人γδT細(xì)胞和αβT細(xì)胞凋亡與細(xì)胞活性的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年03期

5 陳勇,李柏青;人γδT細(xì)胞TCR分子與結(jié)核桿菌多肽抗原特異性結(jié)合的證據(jù)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年01期

6 馬安倫,葛海良,張冬青,王樹軍,張笑人,張惠珍;γδT細(xì)胞、NK細(xì)胞及LAK的生物學(xué)特性比較[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;1999年03期

7 蔣欣欣,何洪彬,馬馳,張惠媛,何維;γδT細(xì)胞對(duì)EB病毒轉(zhuǎn)化人類B淋巴細(xì)胞的免疫識(shí)別[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年10期

8 侯彥強(qiáng),李柏青,胡建國(guó),陳勇;結(jié)核桿菌抗原特異性激發(fā)人γδT細(xì)胞活化信號(hào)涉及Ras/Erk途徑[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2003年08期

9 李超乾,徐永健,陳仕新,倪望,鐘小寧,楊丹蕾,劉先勝,張珍祥;選擇性擴(kuò)增外周血和支氣管肺泡灌洗液中γδT細(xì)胞的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

10 馬安倫,葛海良,張冬青,王樹軍,周光炎;一種簡(jiǎn)單γδT細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)方法及其抗腫瘤生物學(xué)功能研究[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2000年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周培富;謝建平;;結(jié)核分枝桿菌雙組份調(diào)控系統(tǒng)概況[A];重慶微生物學(xué)會(huì)第九屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2009年

2 趙全菊;謝建平;;結(jié)核分枝桿菌蛋白酶毒力因子的分子遺傳研究[A];遺傳學(xué)與社會(huì)可持續(xù)發(fā)展——2010中國(guó)青年遺傳學(xué)家論壇論文摘要匯編[C];2010年

3 陳曦;張宗德;劉忠泉;賈紅彥;邢愛英;古書香;;結(jié)核分枝桿菌rv3873、rv3879c基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

4 朱明利;;分枝桿菌L型及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

5 馮永紅;楊鑫;丁元生;秦蓮花;楊華;鄭瑞娟;王潔;胡忠義;;結(jié)核分枝桿菌CE抗原復(fù)合物對(duì)人巨噬細(xì)胞TNF-α產(chǎn)生及抗原提呈相關(guān)功能分子表達(dá)的影響[A];全國(guó)復(fù)治肺結(jié)核診斷與治療進(jìn)展研討會(huì)論文匯編[C];2007年

6 張?jiān)滦?辛毅;馬郁芳;;結(jié)核分枝桿菌RmlB的表達(dá)、純化及酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究[A];2008年全國(guó)糖生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2008年

7 劉焰;劉勝武;談蓉;馬立新;劉君炎;;結(jié)核分枝桿菌Ag85B與ESAT-6雙順?lè)醋又亟M腺表達(dá)載體的構(gòu)建[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

8 劉毅;邱云青;田苗;張旭霞;李妍;任衛(wèi)聰;魏榮榮;李傳友;;結(jié)核分枝桿菌持留蛋白的初步應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

9 吳園;胡頻頻;王易偉;李秀全;毛旭虎;鐘敏;;結(jié)核分枝桿菌Rv0341蛋白編碼基因iniB的多態(tài)性分析[A];2010年中國(guó)防癆協(xié)會(huì)臨床/基礎(chǔ)專業(yè)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2010年

10 溫見翔;吳少庭;陳群;秦莉;袁仕善;雷明軍;潘暉榕;林綺萍;張仁利;高世同;黃達(dá)娜;;結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白的表達(dá)與純化[A];全國(guó)新出現(xiàn)傳染病學(xué)術(shù)研討會(huì)資料匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 莊愉;新型抗結(jié)核疫苗的開發(fā)研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

2 記者 陳青;讓結(jié)核菌三天內(nèi)原形畢露[N];文匯報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 董海燕;中國(guó)13省市結(jié)核分枝桿菌基因多態(tài)性分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2011年

2 樂(lè)軍;耐藥結(jié)核分枝桿菌的多維分析[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

3 范雄林;結(jié)核分枝桿菌基因疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)特性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

4 王u&民;1.結(jié)構(gòu)分枝桿菌毒力相關(guān)基因的研究 2.結(jié)構(gòu)分枝桿菌DNA指紋技術(shù)及其應(yīng)用研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2001年

5 薛瑩;結(jié)核分枝桿菌Rpf樣蛋白生物學(xué)及免疫學(xué)活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 張靈霞;卡介苗重組疫苗的構(gòu)建、免疫原性及抗結(jié)核作用的初步研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2005年

7 趙明才;結(jié)核分枝桿菌喹諾酮耐藥基因功能研究[D];四川大學(xué);2005年

8 樊博;結(jié)核分枝桿菌PE、PPE家族部分蛋白多肽免疫原性的初步研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2010年

9 姜曉穎;北京地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因分型及與耐藥性關(guān)系的研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2012年

10 羅濤;結(jié)核分枝桿菌北京家族菌株的起源、進(jìn)化及其與現(xiàn)代人類遷移的聯(lián)系[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王霞芳;IFN-γ增強(qiáng)BALB/c小鼠對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染的抵抗力[D];蘇州大學(xué);2002年

2 王琳;結(jié)核分枝桿菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表達(dá)及其性質(zhì)研究[D];西南大學(xué);2010年

3 佘茜;結(jié)核分枝桿菌PPE68蛋白的表達(dá)及初步應(yīng)用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 薛瑩;結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白Ag85B基因的克隆、表達(dá)、純化及免疫學(xué)特性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 柏銀蘭;結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白MPT64的表達(dá)、純化及免疫學(xué)特性的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

6 王麗梅;分泌表達(dá)結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白的重組BCG的構(gòu)建、表達(dá)及免疫學(xué)特性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 高雪;結(jié)核分枝桿菌FurA的基因表達(dá)及單克隆抗體的制備[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 吳悅涵;結(jié)核分枝桿菌Rv0901基因在恥垢分枝桿菌的克隆表達(dá)及其功能研究[D];四川大學(xué);2004年

9 王曉琳;結(jié)核分枝桿菌PPE家族免疫相關(guān)蛋白PPE68免疫功能的研究[D];四川大學(xué);2005年

10 郝方;結(jié)核分枝桿菌異檸檬酸裂解酶基因的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究[D];寧夏醫(yī)學(xué)院;2005年

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本文編號(hào)：1757717