本文選題：傷寒沙門菌　切入點：逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴增　出處：《中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報》2013年07期

【摘要】：分子生物學(xué)診斷技術(shù)是用于檢測傷寒沙門菌的重要輔助手段,但由于需要較好的實驗設(shè)備和條件使其應(yīng)用與發(fā)展受到限制,所以建立簡捷的檢測平臺顯得尤為重要.逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法目前用于病原微生物的檢測發(fā)展迅速,此方法相對簡單、快速.本研究針對傷寒沙門菌STY3671基因設(shè)計6條特異性引物,通過優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了檢測該靶基因的RT-LAMP方法.利用傷寒標準菌株CT-18及其血模擬標本,研究了該方法的特異性及靈敏性,并與rRT-PCR(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)方法的敏感性進行比較.結(jié)果顯示:等溫65℃條件下,30～60 min內(nèi)可完成RT-LAMP檢測反應(yīng),利用該方法檢測134株傷寒沙門菌均為陽性,其余47種檢測菌株均擴增陰性.在以全血模擬樣品提取核酸為模板的檢測中,敏感性達7 cfu/mL,比rRT-PCR檢測低限高10倍.本研究結(jié)果表明:我們建立的敏感性高、特異性好的RT-LAMP檢測血液中傷寒沙門菌的方法,為傷寒沙門菌感染的快速診斷提供了簡便的手段,可用于對傷寒的早期診斷、預(yù)防控制及臨床治療.
[Abstract]:Molecular biological diagnostic technique is an important auxiliary method for detection of Salmonella typhimurium, but its application and development are limited by the need of better experimental equipment and conditions. Therefore, it is very important to establish a simple detection platform. Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification reverse transcription loop-mediated isothermal amplification RT-LAMPP has been developed rapidly in the detection of pathogenic microorganisms, and this method is relatively simple. In this study, six specific primers were designed for the STY3671 gene of Salmonella typhimurium. By optimizing the reaction conditions, a RT-LAMP method for detecting the target gene was established. The standard typhoid strain CT-18 and its blood mimic samples were used to detect the target gene of Salmonella typhimurium. The specificity and sensitivity of this method were studied and compared with that of rRT-PCR(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. 134 strains of Salmonella typhimurium were positive by this method, and all the other 47 strains were amplified negative. The sensitivity was 7 cfur / mL, 10 times higher than the lower limit of rRT-PCR. The results showed that the high sensitivity and high specificity RT-LAMP method for detection of Salmonella typhimurium in blood provided a simple and convenient method for the rapid diagnosis of Salmonella typhimurium infection. It can be used for early diagnosis, prevention, control and clinical treatment of typhoid fever.
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室;
【基金】：國家十二五重大專項-重大傳染病應(yīng)急處置檢測技術(shù)平臺(No.2011ZX10004-001) 國家十一五重大專項——病原體網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測技術(shù)研究(No.2008ZX10004-008)~~
【分類號】：R378

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1666540