本文選題：銀杏葉提取物　切入點(diǎn)：帕金森病　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：帕金森病(parkinson’s disease,PD)是一種慢性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,以中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元選擇性丟失為特征,進(jìn)而導(dǎo)致紋狀體DAT水平降低,引發(fā)一系列典型癥狀如震顫、肌肉強(qiáng)直和運(yùn)動障礙等。到目前為止,PD的治療手段還不完善,沒有任何一種治療手段能夠完全治愈PD。中醫(yī)在治療PD上越來越受到重視。研究表明銀杏葉提取物(ginkgo biloba extract,GBE)主要有效成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物,藥理研究表明它具有很好的神經(jīng)保護(hù)作用,在治療PD上可能有著重要的作用。本論文以α-突觸核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)基因A53T突變型轉(zhuǎn)基因PD小鼠以及MPTP制備不同年齡段的PD小鼠為模型,探討α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠PD模型的發(fā)病機(jī)制和MPTP誘導(dǎo)的PD模型發(fā)病機(jī)制;明確GBE對MPTP誘導(dǎo)不同年齡段的PD小鼠以及α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠的防治作用,為開發(fā)具有抗PD作用的天然藥物提供科學(xué)依據(jù)。1.α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠的繁育及基因鑒定、生理特性。購入a-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠12只,其中9只雌鼠,3只雄鼠,經(jīng)檢疫合格后,飼養(yǎng)小鼠待其達(dá)到10周齡左右合籠交配。繁殖飼養(yǎng)約四個(gè)月,預(yù)計(jì)繁殖出2代。抽提子代小鼠鼠尾的DNA,PCR檢測α-syn A53T基因,電泳后觀察結(jié)果。采血檢測血常規(guī);處死小鼠,稱體重以及各器官的重量,計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果表明:經(jīng)過α-syn A53T基因鑒定,共繁育野生型小鼠總數(shù)為69只,PD基因陽性小鼠為79只;α-syn A53T PD模型對動物的血常規(guī)參數(shù)幾乎沒有影響;脾臟系數(shù)和腎臟系數(shù)差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;其他系數(shù)差異不顯著沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠模型不同月齡的發(fā)病機(jī)制。飼養(yǎng)α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠,分析不同月齡(4月齡、6月齡、8月齡)對α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠在運(yùn)動能力、腦組織內(nèi)SOD、GSH-PX活性及MDA含量以及黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元和紋狀體DAT陽性神經(jīng)纖維表達(dá)的變化。結(jié)果表明:和野生型小鼠相比,4月齡、6月齡和8月齡的α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因PD模型小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力顯著降低;SOD、GSH-PX活性顯著下降,MDA表達(dá)水平顯著上升,黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。隨著月齡的增加,突變型轉(zhuǎn)基因小鼠的運(yùn)動能力顯著降低;抗氧化能力下降,黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。3.MPTP化學(xué)誘導(dǎo)的PD模型發(fā)病機(jī)制。飼養(yǎng)2月齡、8月齡的C57BL/6雄性小鼠,模型組給予MPTP(30mg/kg)腹腔注射造模,分析不同月齡(2月齡、8月齡)對MPTP誘導(dǎo)的PD模型運(yùn)動能力、腦組織內(nèi)SOD、GSH-PX活性及MDA水平以及黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元和紋狀體DAT陽性神經(jīng)纖維表達(dá)的變化。結(jié)果表明:小鼠注射MPTP后立刻出現(xiàn)全身震顫、豎毛、尾僵直、步態(tài)不穩(wěn)、活動能力減弱等癥狀。2月齡和8月齡的陰性對照組小鼠和MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠相比,小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力顯著降低;SOD、GSH-PX活性顯著下降,MDA表達(dá)水平顯著上升,黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。2月齡的MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠和8月齡的MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠相比,小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力、SOD、GSH-PX活性、MDA表達(dá)、黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)均沒有顯著變化。4.觀察銀杏葉提取物(GBE)對PD小鼠的治療效果。MPTP誘導(dǎo)的2月齡和8月齡年齡段的帕金森小鼠以及α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因4月齡小鼠各隨機(jī)分為模型組,GBE給藥高、中、低劑量組及陽性組,采用銀杏葉提取物進(jìn)行灌胃治療。運(yùn)用爬桿、懸掛和游泳實(shí)驗(yàn)檢測小鼠運(yùn)動功能,采用ELISA法測定小鼠腦組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量,采用免疫組化法觀察小鼠大腦TH及DAT陽性細(xì)胞數(shù)目的變化。結(jié)果表明:與模型組比較,銀杏葉提取物給藥組2月齡和8月齡MPTP誘導(dǎo)PD小鼠運(yùn)動功能得分、SOD與GSH-Px活性、黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞平均光密度值均顯著提高,MDA含量顯著下降,2月齡和8月齡之間比較所有參數(shù)沒有顯著變化。與模型組比較,銀杏葉提取物給藥組4月齡α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠運(yùn)動功能得分、SOD活性、黑質(zhì)TH及紋狀體DAT陽性細(xì)胞平均光密度值均顯著提高,腦組織MDA含量顯著下降。本研究通過建立α-syn A53T轉(zhuǎn)基因小鼠PD模型和MPTP化學(xué)誘導(dǎo)PD模型并對兩種模型的發(fā)病特征分析,表明α-syn A53T轉(zhuǎn)基因小鼠PD模型前者能夠很好的模擬PD的發(fā)病過程,但是時(shí)間較長,MPTP化學(xué)誘導(dǎo)PD模型能夠立即產(chǎn)生PD癥狀,但是無法模擬PD的發(fā)病過程。銀杏葉提取物(GBE)對MPTP誘導(dǎo)的不同年齡段PD小鼠及α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因PD小鼠均有一定的防治作用,為PD患者的治療提供了新的思路和方法。
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【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1666780