本文選題：微小RNA-　切入點：鈣結(jié)合蛋白　出處：《中國修復(fù)重建外科雜志》2013年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討微小RNA-451(micro RNA-451,miRNA-451)靶向調(diào)節(jié)鈣結(jié)合蛋白39(calcium binding protein 39,CAB39)表達,促進MSCs向成骨細胞分化的效應(yīng)。方法選擇pMIR-report質(zhì)粒及pRL-TK質(zhì)粒,通過雙熒光素酶基因報告系統(tǒng),鑒定CAB39是否為miRNA-451的靶基因。將pre-miRNA-451(A組)及anti-miRNA-451(C組)分別轉(zhuǎn)染到C3H10T1/2細胞中,同時設(shè)置相應(yīng)的pre-miRNA陰性對照組(B組)和anti-miRNA陰性對照組(D組);成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7、14 d,采用實時熒光定量PCR檢測成骨標(biāo)志物Runx2、ALP mRNA相對表達量;誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d,采用Western blot檢測細胞中CAB39蛋白表達,茜素紅染色觀察細胞外鈣基質(zhì)沉積情況。結(jié)果經(jīng)鑒定,CAB39是miRNA-451的靶基因。實時熒光定量PCR檢測示,成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7、14 d,A組Runx2、ALP mRNA相對表達量顯著高于B組,C組顯著低于D組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d,Western blot檢測示A組CAB39蛋白表達量為0.55±0.05,較B組1.00±0.07明顯降低;而C組為1.21±0.05,較D組1.00±0.04明顯增高;差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。茜素紅染色示A組細胞外鈣基質(zhì)沉積較B組明顯增多,而C組細胞外鈣基質(zhì)沉積較D組明顯減少。結(jié)論 miRNA-451可通過抑制CAB39表達,促進MSCs成骨分化。
[Abstract]:Objective to study the effect of RNA-451 (micro RNA-451 miRNA-451) targeting the regulation of calcium binding protein 39 (calcium binding 39 protein, CAB39) expression, MSCs effect to promote osteoblast differentiation. Methods pMIR-report plasmid and pRL-TK plasmid by dual luciferase reporter gene system, determine whether CAB39 is the target gene of miRNA-451. (pre-miRNA-451 A) and anti-miRNA-451 group (group C) were transfected into C3H10T1/2 cells, and set the corresponding pre-miRNA negative control group (B group) and anti-miRNA control group (group D); osteoblast induced 7,14 d by real-time fluorescence quantitative PCR detection of osteogenic markers Runx2, relative expression of ALP induced by mRNA; cultured for 14 d, the expression of CAB39 Western blot were detected by alizarin red staining, extracellular matrix deposition of calcium. The results identified, CAB39 is the target gene of miRNA-451. Real time fluorescent quantitative PCR detection In osteogenic medium 7,14 D, A Runx2 group, ALP mRNA expression was significantly higher than that of B group, C group was significantly lower than that of D group, the differences were statistically significant (P0.05). Osteoblasts cultured for 14 d, Western blot showed the expression of CAB39 protein in A group was 0.55 + 0.05, compared with 1 in group B + 0.07 significantly decreased; while the C group is 1.21 + 0.05, 1 + 0.04 than in D group increased significantly; the differences were statistically significant (P0.05). Alizarin red staining showed extracellular matrix deposition of calcium in A group increased significantly than in group B and group C, extracellular matrix deposition of calcium was significantly reduced compared with D group. Conclusion miRNA-451 by inhibiting the expression of CAB39, promote the osteogenic differentiation of MSCs.

【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)解剖學(xué)教研室生物力學(xué)實驗室;解放軍成都軍區(qū)總醫(yī)院骨科;
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973)資助項目(2011CB964701) 國家自然科學(xué)基金資助項目(30872636、81271980)~~
【分類號】：R329

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