本文選題：誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞　切入點(diǎn)：胰島素分泌細(xì)胞　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2013年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的觀測(cè)胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子胰腺十二指腸同源框蛋白1(PDX-1)、神經(jīng)分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纖維肉瘤癌基因同系物A(MafA)對(duì)小鼠誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用。方法篩選鑒定小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEFs)重編程的iPS細(xì)胞。以重組腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP聯(lián)合感染小鼠iPS細(xì)胞,體外培養(yǎng)后以RT-PCR檢測(cè)胰島B細(xì)胞功能基因表達(dá);免疫熒光檢測(cè)胰島素蛋白表達(dá)及定位;ELISA檢測(cè)不同糖濃度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰島素的分泌量。結(jié)果起源于MEFs的iPS細(xì)胞能形成邊緣光整的致密克隆,表達(dá)干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在體內(nèi)外分化為三胚層組織,顯示MEFs被成功地重編程為iPS細(xì)胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS細(xì)胞能分化為胰島類B細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果顯示其胰島B細(xì)胞功能基因的表達(dá)與小鼠胰島B細(xì)胞株MIN6相似。免疫熒光檢測(cè)可見(jiàn)胰島類B細(xì)胞內(nèi)有胰島素表達(dá)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示胰島類B細(xì)胞對(duì)不同濃度葡萄糖有較好的反應(yīng)性。結(jié)論胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能協(xié)同作用,使小鼠iPS細(xì)胞分化為具有顯著胰島素合成和分泌能力的胰島素分泌細(xì)胞。
[Abstract]:Objective to observe the effects of pancreatic duodenal homeobox protein 1 (PDX-1), neurodifferentiation factor 1 neuroD1 (NDF 1) and oncogene congener Agna MafA (a gene congener of fibrosarcoma tendonitis) on the differentiation of mouse multipotent stem cell (IPS cells) into insulin. Methods the recombinant adenovirus Ad-mPDX-1-IRES-GFP-Ad-mNeuroD1-IRES-GFP-Ad-mMafA-IRES-GFP was used to co-infect mouse iPS cells. After culture in vitro, the functional gene expression of islet B cells was detected by RT-PCR. The expression of insulin protein was detected by immunofluorescence and the secretion of insulin was detected by Elisa under different glucose concentrations. The results showed that iPS cells derived from MEFs could form compact clones with edge light. The dry gene Nanogan Rex-1 + SSEA-1 is expressed and can differentiate into tridermal tissue in vivo and in vitro. The results showed that MEFs was successfully reprogrammed as iPS cell. Ad-mNeuroD-IRES-GFP Ad-mMafA-IRES-GFP infected mouse iPS cells could differentiate into islet B cells. RT-PCR results showed that the expression of islet B cell functional genes was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. Immunofluorescence assay showed that the expression of islet B cell functional gene was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. The results of insulin expression and Elisa showed that islet B cells were more responsive to glucose at different concentrations. Conclusion PDX-1 neuroD1 and MafA can play a synergistic role in the expression of insulin in pancreatic islet B cells. Mouse iPS cells were differentiated into insulin secretory cells with significant insulin synthesis and secretion ability.
【作者單位】： 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院普通外科;南通大學(xué)附屬醫(yī)院普通外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81101615,81070656) 中國(guó)博士后基金(2012M521107) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK2010276)~~
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：1609370