本文選題：HCV　切入點(diǎn)：包膜糖蛋白E　出處：《中國輸血雜志》2013年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的獲得在果蠅S2(S2)細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2)。方法 PCR擴(kuò)增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T載體,將測(cè)序正確的基因亞克隆至表達(dá)載體pMT/Bip/V5-HisC,構(gòu)建重組表達(dá)載體pMT-E2。用FuGENE HD轉(zhuǎn)染試劑將pMT-E2轉(zhuǎn)染至S2細(xì)胞,并篩選抗性細(xì)胞,然后誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá);以Western-blotting法鑒定表達(dá)產(chǎn)物與HCV感染者血清反應(yīng)性。結(jié)果成功構(gòu)建截短型HCV E2表達(dá)載體pMT-E2,并獲得到穩(wěn)定表達(dá)rE2蛋白的S2細(xì)胞株,Western-blotting法證明rE2具有良好的免疫學(xué)活性。結(jié)論在S2細(xì)胞成功表達(dá)的HCV rE2蛋白可用于HCV感染者血清的鑒定,為HCV診斷性抗原的優(yōu)化和重組疫苗的研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)材料。
[Abstract]:Objective to obtain recombinant hepatitis C virus (HCV) envelope glycoprotein 2rE2, which is stably expressed in Drosophila S2nS2.Methods truncated E2 gene was amplified by PCR and cloned into pCR2.1-T vector. The recombinant expression vector pMT-E2was constructed by subcloning the correct gene into the expression vector pMT-Bip-V5-HisC. the pMT-E2 was transfected into S2 cells with FuGENE HD transfection reagent, and the resistant cells were screened, then the target protein expression was induced. Results the truncated HCV E2 expression vector pMT-E2 was successfully constructed, and the S2 cell line expressing rE2 protein stably was obtained by Western-blotting. Conclusion rE2 has good immunological activity. The HCV rE2 protein successfully expressed in S2 cells can be used to identify the serum of HCV infected patients. It provides experimental materials for the optimization of HCV diagnostic antigen and the development of recombinant vaccine.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)系;
【基金】：大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201212121060、201212121061) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010B031000024、2012A080203003)
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1597048