本文選題：上皮性卵巢癌　切入點：卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：卵巢癌是死亡率最高的婦科惡性腫瘤。其中,又以上皮性卵巢癌為常見。卵巢癌的難治性主要有兩方面,早期不容易發(fā)現(xiàn)和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。大多數(shù)卵巢癌病人在診斷時常伴有轉(zhuǎn)移。與原發(fā)灶相比,轉(zhuǎn)移灶中的腫瘤細(xì)胞大多對常規(guī)治療手段并不敏感,容易引起卵巢癌進(jìn)一步發(fā)展。因此較好的控制轉(zhuǎn)移病灶的癌細(xì)胞防止復(fù)發(fā)和進(jìn)一步轉(zhuǎn)移,我們才有可能改變當(dāng)前卵巢癌治療效果差的局面。目的：建立一個理想的卵巢癌生長和轉(zhuǎn)移小鼠模型,基本重現(xiàn)卵巢原位腫瘤形成及腹腔和其他遠(yuǎn)隔器官轉(zhuǎn)移的整個經(jīng)過：利用該模型篩選得到具有穩(wěn)定遺傳性的高轉(zhuǎn)移潛能亞細(xì)胞株,最終通過芯片分析,獲取卵巢癌器官特異性轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,為臨床治療轉(zhuǎn)移提供參考依據(jù)。方法：利用慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)兩種報告基因的卵巢癌細(xì)胞系SKOV3-Luciferase/RFP;經(jīng)過流式分選篩選純化腫瘤細(xì)胞：利用活體成像系統(tǒng)跟蹤觀察小鼠體內(nèi)腫瘤生長轉(zhuǎn)移情況；利用基因芯片檢測不同轉(zhuǎn)移特性亞細(xì)胞株基因表達(dá)情況,篩選出差異基因；實時定量PCR, western blot和免疫組化驗證差異基因表達(dá)。結(jié)果：通過小鼠卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型可以很好地觀察腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)從卵巢原位擴(kuò)散到其他部位的整個過程：利用原位-轉(zhuǎn)移模型經(jīng)過三次篩選,成功獲得分別具有腹腔和肺部高轉(zhuǎn)移能力的S系和L系細(xì)胞株；經(jīng)動物實驗驗證S系和L系細(xì)胞展現(xiàn)出不同程度的轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)以及轉(zhuǎn)移部位選擇性；基因芯片檢測結(jié)果顯示S系細(xì)胞表達(dá)升高的基因在L系細(xì)胞中表達(dá)水平一般,功能主要包括調(diào)控細(xì)胞增殖,遷移,血管生成和脂肪代謝等；L系細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平升高的基因功能主要集中于維持干細(xì)胞特性和調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫等方面。結(jié)論：構(gòu)建的卵巢癌原位-轉(zhuǎn)移模型有較好的穩(wěn)定性和可靠性；不同的選擇性轉(zhuǎn)移能力是因為亞細(xì)胞株攜帶有不同的轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,這些基因可以幫助腫瘤細(xì)胞適應(yīng)不同的組織微環(huán)境。靶向這些轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的治療,有可能通過抑制轉(zhuǎn)移發(fā)生和清除已經(jīng)轉(zhuǎn)移的卵巢癌細(xì)胞幫助提高治療效果,改善病人預(yù)后。
[Abstract]:Background: ovarian cancer is the highest mortality gynecologic malignant tumor. Among them, epithelial ovarian cancer is also common. There are two main aspects of ovarian cancer's refractory. Most ovarian cancer patients are often diagnosed with metastasis. Compared with the primary tumor, most of the tumor cells in the metastatic tumor are not sensitive to conventional treatment. It is easy to cause further development of ovarian cancer. Therefore, cancer cells that have better control of metastatic lesions prevent recurrence and further metastasis. It's possible to change the current poor treatment of ovarian cancer. Objective: to establish an ideal model of ovarian cancer growth and metastasis in mice. The whole process of ovarian in situ tumor formation and metastasis of abdominal cavity and other distant organs was basically reappeared. A stable and hereditary subcell line with high metastatic potential was obtained by using this model, and finally microarray analysis was used. To obtain genes associated with organ specific metastasis of ovarian cancer, Methods: using lentivirus transfection to construct ovarian cancer cell line SKOV3-Luciferase / RFP which stably expressed two kinds of reporter genes. Tumor growth and metastasis in mice were observed. The gene expression of subcell lines with different transfer characteristics was detected by gene microarray, and the differentially expressed genes were screened out. Real-time quantitative PCR, western blot and immunohistochemistry were used to verify the differential gene expression. Results: the in situ metastasis model of mouse ovarian cancer could be used to observe the whole process of tumor cells spreading from ovary in situ to other parts in mice. Process: three times screening using in situ transfer model, The S and L cell lines with high metastatic ability in abdominal cavity and lung were successfully obtained, and the enhancement of metastasis ability and the selectivity of metastasis site were demonstrated by animal experiments. The results of gene microarray analysis showed that the expression level of the genes with high expression in S cell line was normal in L cell line, and its function mainly included regulating cell proliferation and migration. The gene functions of increased expression level in L cell lines such as angiogenesis and fat metabolism were mainly focused on maintaining stem cell characteristics and regulating cellular immunity. Conclusion: the constructed ovarian cancer in situ metastasis model has good stability and reliability. The different ability of selective transfer is due to the fact that subcell lines carry different genes associated with metastasis, which can help tumor cells adapt to different tissue microenvironments and target the treatment of these metastasis-associated genes. It is possible to improve the therapeutic effect and prognosis by inhibiting metastasis and removing metastatic ovarian cancer cells.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31;R-332

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本文編號：1576430