本文關鍵詞： 重組人酸性成纖維細胞生長因子 重組人表皮細胞生長因子 重組牛堿性成纖維細胞生長因子 創(chuàng)面愈合 瘢痕　出處：《重慶醫(yī)科大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:觀察重組人酸性成纖維細胞生長因子(rhaFGF)聯(lián)合重組人表皮細胞生長因子(rhEGF)對創(chuàng)面愈合的影響并探討其可能的機理。 方法:①造模及分組:建立新西蘭大耳白兔兔耳全層皮膚缺損模型,先后進行濃度梯度實驗和聯(lián)合用藥實驗。在濃度梯度實驗中,建立兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,隨機分為A組(rhaFGF 60U/cm~2)、B組(rhaFGF 90U/cm~2)、C組(rhEGF 20U/cm~2)、D組(rhEGF 40U/cm~2)和E組(等量生理鹽水)共5組。根據濃度梯度實驗結果設定聯(lián)合用藥實驗試劑的濃度。聯(lián)合用藥實驗建立模型同前,隨機分為F組(rhaFGF 60U/cm~2+rhEGF 20U/cm~2)、G組(rhaFGF 60U/cm~2)、H組(hbFGF 60U/cm~2)和I組(等量生理鹽水)共4組。②實驗方法:造模后即開始用藥,每隔兩日按不同分組將試劑外用于創(chuàng)面。③實驗評估:采用透明膜描記法記錄造模后第3、7、10、14d創(chuàng)面愈合面積,計算出創(chuàng)面愈合率,記錄創(chuàng)面愈合時間。分別比較A、B、E組,C、D、E組的創(chuàng)面愈合率和愈合時間。聯(lián)合用藥實驗,在第3、7、14d取創(chuàng)面組織,分別用HE染色、免疫組織化學檢測血管內皮生長因子(VEGF)和基質金屬蛋白酶-1(MMP-1),逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測VEGF mRNA的表達變化規(guī)律,觀察不同時相點創(chuàng)面愈合情況。 結果:①創(chuàng)面愈合時間。A組創(chuàng)面平均愈合時間為(13.57±0.40)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。C組創(chuàng)面平均愈合時間為(14.01±0.25)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。聯(lián)合用藥實驗中,F組創(chuàng)面平均愈合時間為(13.33±0.12)d,與I組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各個時相點,其創(chuàng)面愈合率與I組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H組創(chuàng)面成纖維細胞(FB)、毛細血管生成較G、I組豐富。第14d,F組創(chuàng)面基本愈合,FB、毛細血管較其他對照組少;H組尚未完全愈合,其創(chuàng)面中FB增殖活躍,毛細血管數較多;G組組織學情況介于F、H組之間;各用藥組的愈合情況優(yōu)于I組。③MMP-1免疫組織化學。在造模后的第3d,各組已開始表達MMP-1,但無明顯差異(P0.05)。第7d,各組MMP-1含量均達峰值。與I組相比較,F組差異顯著具有統(tǒng)計學意義(P0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。第14d,各組MMP-1量下降,F、G組顯著少于I組且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在各組之中,H組表達最多,但與I組相比不具統(tǒng)計學意義(P0.05)。④VEGF免疫組織化學。造模后第3d,各組VEGF蛋白表達未見明顯差別(P0.05)。第7d,各組VEGF表達達高峰,與I組相比較,F組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。第14d,各組VEGF下降。F組顯著少于I組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。G組少于I組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),H組表達在各組中最多但與I組相比差異無統(tǒng)計學意義。④VEGF mRNA RT-PCR結果。第3d,各組mRNA表達未見明顯差異;第7d時,F、G組與I組比較差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01),H組差異具有統(tǒng)計學意義顯著(P0.05);第14d,各組表達均有下降,但F、G組與I組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),H組表達在各組中最多但與I組相比差異無統(tǒng)計學意義。 結論:①F組對兔耳創(chuàng)面愈合有促進作用,可促進創(chuàng)面肉芽組織生長、毛細血管形成與再上皮化形成。②其促進創(chuàng)面愈合機制可能是在早期通過上調VEGF mRNA的表達、增加創(chuàng)面中VEGF和MMP-1量。在晚期,下調VEGF mRNA的表達、降低創(chuàng)面中VEGF和MMP-1的含量,可能是其減少瘢痕形成的機制。③聯(lián)合應用細胞因子(rhaFGF+rhEGF)優(yōu)于單獨用藥。
[Abstract]:Objective: To observe the effect of recombinant human acidic fibroblast growth factor (rhaFGF) combined with recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) on wound healing and to explore its possible mechanism.
Methods: Modeling and grouping: the establishment of New Zealand white rabbits rabbit full-thickness skin defect model, has carried out the concentration gradient test and combination experiment. In the experiment the concentration gradient in a rabbit ear model of full thickness skin defect were randomly divided into A group (rhaFGF 60U/cm~2), B group (rhaFGF 90U/cm~2). Group C (rhEGF 20U/cm~2), D group (rhEGF 40U/cm~2) and E group (normal saline) were divided into 5 groups according to the experimental results. The concentration gradient set combination experiment of reagent concentration. The combination model with experiment, were randomly divided into group F (rhaFGF 60U /cm~2+rhEGF 20U/cm~2), G group (rhaFGF 60U/cm~2). Group H (hbFGF 60U/cm~2) and I group (saline) group. A total of 4 experimental methods: model after the start of treatment, every two days by different groups of reagents for wounds. Results: the transparent membrane plethysmography recorded 3,7,10,14d after wound healing area, Calculate the wound healing rate, wound healing time was recorded. Compared to A, B, C, D, E group, E group wound healing rate and healing time. The combination experiment, take the wound tissue in 3,7,14d, respectively by HE staining, immunohistochemical detection of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metal protease -1 (MMP-1), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) detection of mRNA VEGF expression changes, observed at different time points of wound healing.
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本文編號：1529621