本文關(guān)鍵詞： Wnt1 β-catenin TCF4 PPAR-γ CD36 分化 QKI SRA microRNA-29a 脂質(zhì)吞噬　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：論文一：wntl通過(guò)促進(jìn)TCF4和PPAR-γ上調(diào)巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36的表達(dá)研究背景清道夫受體家族B類(lèi)成員CD36調(diào)控了巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白的吞噬,同時(shí)也在巨噬細(xì)胞的生理活動(dòng)中發(fā)揮了重要作用。但是,CD36在巨噬細(xì)胞中本地表達(dá)的調(diào)控機(jī)制還未明了。目的本研究主要探索wntl在巨噬細(xì)胞的生理作用,并深入研究了wntl調(diào)控巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36表達(dá)的分子機(jī)制以及wntl在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)機(jī)制。方法本研究中,我們探討了由單核細(xì)胞加GM-CSF刺激分化而來(lái)的巨噬細(xì)胞中wntl與CD36之間的聯(lián)系。轉(zhuǎn)染wntl的siRNA或是wntl過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,巨噬細(xì)胞中CD36表達(dá)分別呈現(xiàn)下調(diào)或上調(diào)。通過(guò)使用β-catenin的抑制劑,轉(zhuǎn)染PPAR-γ的siRNA或TCF4的siRNA,我們證實(shí)了wntl通過(guò)促進(jìn)PPAR-γ和TCF4上調(diào)CD36表達(dá)。免疫共沉淀,染色質(zhì)免疫共沉淀及免疫熒光的方法進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)β-catenin可以和PPAR-γ發(fā)生互作,而PPAR-γ又可以與TCF4在核內(nèi)發(fā)生共定位。同時(shí),轉(zhuǎn)錄因子pax3在單核向巨噬分化過(guò)程中調(diào)控wntl表達(dá)也通過(guò)western blot被證實(shí)。結(jié)果我們的研究證實(shí)了由單核細(xì)胞加GM-CSF刺激分化而來(lái)的巨噬細(xì)胞中,wnt1通過(guò)激活PPAR-γ和TCF4轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)了CD36的表達(dá)。結(jié)論我們的發(fā)現(xiàn)提示了wntl通過(guò)激活wnt經(jīng)典通路,在巨噬細(xì)胞生理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。論文二：MicroRNA-29a通過(guò)靶向QKI (quaking)促進(jìn)了單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過(guò)程中SRA的表達(dá)背景在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過(guò)程中,miR-29a和清道夫受體-SRA上調(diào),而RNA結(jié)合蛋白QKI下調(diào)。由于巨噬細(xì)胞表達(dá)的SRA受體在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中的重要性加上我們之前的工作已發(fā)現(xiàn)miR-29a可以上調(diào)SRA,探討SRA調(diào)控的內(nèi)在機(jī)制顯得尤為重要。已有工作分別聯(lián)系了miR-29a與SRA和QKI同單核-巨噬分化。但三者之間在單核-巨噬分化時(shí)是否存在著相互聯(lián)系還未知曉。目的深入研究miR-29a上調(diào)SRA的詳細(xì)機(jī)制,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)單核向巨噬分化過(guò)程中,miR-29a, SRA和QKI三者之間的內(nèi)在聯(lián)系。方法本研究中,我們首先運(yùn)用qRT-PCR和western blot的方法驗(yàn)證了在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化時(shí)miR-29a升高,QKI表達(dá)下降。在巨噬細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染miR-29a的模擬物和抑制物后檢測(cè)了QKI的蛋白表達(dá)變化,結(jié)合熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證了QKI是miR-29a的靶基因。信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)SRAmRNA的3'UTR上存在一個(gè)QKI結(jié)合靶位(QRE區(qū))。因此我們深入探討了QKI與SRA的關(guān)系。通過(guò)在巨噬細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或敲低QKI,我們發(fā)現(xiàn)QKI在轉(zhuǎn)錄水平上抑制了SRA。借助于熒光素酶報(bào)告基因技術(shù),我們驗(yàn)證了QKI可以和SRAmRNA上QRE區(qū)直接結(jié)合。另外,油紅試驗(yàn)的開(kāi)展進(jìn)一步證實(shí)QKI可以通過(guò)作用于SRA抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)吞噬功能。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)miR-29a通過(guò)結(jié)合于QKI的3'UTR抑制了QKI的表達(dá),而QKI通過(guò)作用于SRAmRNA的3'UTR上的QRE區(qū)促進(jìn)了SRAmRNA的降解。結(jié)論miR-29a通過(guò)靶向RNA結(jié)合蛋白-QKI對(duì)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過(guò)程中SRA的上調(diào)發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:Paper I:. Wntl upregulated the expression of scavenger receptor CD36 in macrophages by promoting TCF4 and PPAR- 緯 background CD36, a member of the scavenger receptor family B, regulates macrophage response to oxidative low density. The phagocytosis of lipoproteins. It also plays an important role in the physiological activities of macrophages. The mechanism of local expression of CD36 in macrophages is not clear. Objective to explore the physiological role of wntl in macrophages. The molecular mechanism of wntl regulating the expression of scavenger receptor CD36 in macrophages and the mechanism of wntl expression in the process of monocyte differentiation into macrophages were studied. Methods in this study. We investigated the relationship between wntl and CD36 in macrophages stimulated by monocytes and GM-CSF. SiRNA or wntl overexpression plasmids transfected with wntl were investigated. The expression of CD36 in macrophages was down-regulated or up-regulated, and the siRNA of PPAR- 緯 or the siRNA of TCF4 were transfected with 尾 -catenin inhibitor. We confirmed that wntl upregulated CD36 expression and immunoprecipitation by promoting PPAR- 緯 and TCF4. Chromatin immunoprecipitation and immunofluorescence further revealed that 尾 -catenin could interact with PPAR- 緯. PPAR- 緯 can co-locate with TCF4 in nucleus. Transcription factor pax3 regulates the expression of wntl during mononuclear macrophage differentiation through western. Blot was confirmed. As a result, our study confirmed that macrophages derived from monocytes and GM-CSF stimulated differentiation. Wnt1 promotes the expression of CD36 by activating PPAR- 緯 and TCF4 transcription factors. Conclusion our findings suggest that wntl activates the classical wnt pathway. It plays an important role in the physiological process of macrophages. Promote the expression of SRA in the process of monocyte differentiation to macrophage. MiR-29a and scavenger receptor -SRA were up-regulated. The RNA binding protein QKI is down-regulated because of the importance of SRA receptors expressed by macrophages in atherosclerotic diseases and our previous work has shown that miR-29a can up-regulate SRA. It is particularly important to explore the intrinsic mechanism of SRA regulation. Previous work has linked miR-29a with SRA and QKI with monocyte-macrophage differentiation, but whether the three exist in monocyte-macrophage differentiation. Objective to study the detailed mechanism of miR-29a upregulation of SRA. The relationship among miR-29a, SRA and QKI in the process of mononuclear macrophage differentiation was further found. Methods in this study. At first, we used qRT-PCR and western blot methods to verify the increase of miR-29a when monocytes differentiated into macrophages. The expression of QKI was decreased and the expression of QKI protein was detected after transfection of miR-29a mimics and inhibitors in macrophages. Combined with luciferase reporter gene technique, QKI is the target gene of miR-29a. Therefore, we explored the relationship between QKI and SRA by overexpressing or knocking down QKI in macrophages. We found that QKI inhibited SRAs at the transcriptional level. With the help of luciferase reporter gene technology, we confirmed that QKI could bind directly to the QRE region on SRAmRNA. The oil red test further confirmed that QKI could inhibit the lipid phagocytosis of macrophages by acting on SRA. Results We found that miR-29a inhibited QK by binding to QKI 3 UTR. I expression. QKI can promote the degradation of SRAmRNA by acting on the QRE region of SRAmRNA. Conclusion miR-29a can promote the degradation of mononuclear SRAmRNA by targeting RNA binding protein -QKI. The up-regulation of SRA plays an important role in the differentiation of macrophages.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1486879