本文關(guān)鍵詞： Wnt1 β-catenin TCF4 PPAR-γ CD36 分化 QKI SRA microRNA-29a 脂質(zhì)吞噬　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：論文一：wntl通過促進TCF4和PPAR-γ上調(diào)巨噬細胞清道夫受體CD36的表達研究背景清道夫受體家族B類成員CD36調(diào)控了巨噬細胞對氧化型低密度脂蛋白的吞噬,同時也在巨噬細胞的生理活動中發(fā)揮了重要作用。但是,CD36在巨噬細胞中本地表達的調(diào)控機制還未明了。目的本研究主要探索wntl在巨噬細胞的生理作用,并深入研究了wntl調(diào)控巨噬細胞清道夫受體CD36表達的分子機制以及wntl在單核細胞向巨噬細胞分化過程中的表達機制。方法本研究中,我們探討了由單核細胞加GM-CSF刺激分化而來的巨噬細胞中wntl與CD36之間的聯(lián)系。轉(zhuǎn)染wntl的siRNA或是wntl過表達質(zhì)粒,巨噬細胞中CD36表達分別呈現(xiàn)下調(diào)或上調(diào)。通過使用β-catenin的抑制劑,轉(zhuǎn)染PPAR-γ的siRNA或TCF4的siRNA,我們證實了wntl通過促進PPAR-γ和TCF4上調(diào)CD36表達。免疫共沉淀,染色質(zhì)免疫共沉淀及免疫熒光的方法進一步發(fā)現(xiàn)β-catenin可以和PPAR-γ發(fā)生互作,而PPAR-γ又可以與TCF4在核內(nèi)發(fā)生共定位。同時,轉(zhuǎn)錄因子pax3在單核向巨噬分化過程中調(diào)控wntl表達也通過western blot被證實。結(jié)果我們的研究證實了由單核細胞加GM-CSF刺激分化而來的巨噬細胞中,wnt1通過激活PPAR-γ和TCF4轉(zhuǎn)錄因子促進了CD36的表達。結(jié)論我們的發(fā)現(xiàn)提示了wntl通過激活wnt經(jīng)典通路,在巨噬細胞生理過程中發(fā)揮了重要作用。論文二：MicroRNA-29a通過靶向QKI (quaking)促進了單核細胞向巨噬細胞分化過程中SRA的表達背景在單核細胞向巨噬細胞分化過程中,miR-29a和清道夫受體-SRA上調(diào),而RNA結(jié)合蛋白QKI下調(diào)。由于巨噬細胞表達的SRA受體在動脈粥樣硬化疾病中的重要性加上我們之前的工作已發(fā)現(xiàn)miR-29a可以上調(diào)SRA,探討SRA調(diào)控的內(nèi)在機制顯得尤為重要。已有工作分別聯(lián)系了miR-29a與SRA和QKI同單核-巨噬分化。但三者之間在單核-巨噬分化時是否存在著相互聯(lián)系還未知曉。目的深入研究miR-29a上調(diào)SRA的詳細機制,進一步發(fā)現(xiàn)單核向巨噬分化過程中,miR-29a, SRA和QKI三者之間的內(nèi)在聯(lián)系。方法本研究中,我們首先運用qRT-PCR和western blot的方法驗證了在單核細胞向巨噬細胞分化時miR-29a升高,QKI表達下降。在巨噬細胞中分別轉(zhuǎn)染miR-29a的模擬物和抑制物后檢測了QKI的蛋白表達變化,結(jié)合熒光素酶報告基因技術(shù)驗證了QKI是miR-29a的靶基因。信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)SRAmRNA的3'UTR上存在一個QKI結(jié)合靶位(QRE區(qū))。因此我們深入探討了QKI與SRA的關(guān)系。通過在巨噬細胞中過表達或敲低QKI,我們發(fā)現(xiàn)QKI在轉(zhuǎn)錄水平上抑制了SRA。借助于熒光素酶報告基因技術(shù),我們驗證了QKI可以和SRAmRNA上QRE區(qū)直接結(jié)合。另外,油紅試驗的開展進一步證實QKI可以通過作用于SRA抑制巨噬細胞脂質(zhì)吞噬功能。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)miR-29a通過結(jié)合于QKI的3'UTR抑制了QKI的表達,而QKI通過作用于SRAmRNA的3'UTR上的QRE區(qū)促進了SRAmRNA的降解。結(jié)論miR-29a通過靶向RNA結(jié)合蛋白-QKI對單核細胞向巨噬細胞分化過程中SRA的上調(diào)發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:Paper I:. Wntl upregulated the expression of scavenger receptor CD36 in macrophages by promoting TCF4 and PPAR- 緯 background CD36, a member of the scavenger receptor family B, regulates macrophage response to oxidative low density. The phagocytosis of lipoproteins. It also plays an important role in the physiological activities of macrophages. The mechanism of local expression of CD36 in macrophages is not clear. Objective to explore the physiological role of wntl in macrophages. The molecular mechanism of wntl regulating the expression of scavenger receptor CD36 in macrophages and the mechanism of wntl expression in the process of monocyte differentiation into macrophages were studied. Methods in this study. We investigated the relationship between wntl and CD36 in macrophages stimulated by monocytes and GM-CSF. SiRNA or wntl overexpression plasmids transfected with wntl were investigated. The expression of CD36 in macrophages was down-regulated or up-regulated, and the siRNA of PPAR- 緯 or the siRNA of TCF4 were transfected with 尾 -catenin inhibitor. We confirmed that wntl upregulated CD36 expression and immunoprecipitation by promoting PPAR- 緯 and TCF4. Chromatin immunoprecipitation and immunofluorescence further revealed that 尾 -catenin could interact with PPAR- 緯. PPAR- 緯 can co-locate with TCF4 in nucleus. Transcription factor pax3 regulates the expression of wntl during mononuclear macrophage differentiation through western. Blot was confirmed. As a result, our study confirmed that macrophages derived from monocytes and GM-CSF stimulated differentiation. Wnt1 promotes the expression of CD36 by activating PPAR- 緯 and TCF4 transcription factors. Conclusion our findings suggest that wntl activates the classical wnt pathway. It plays an important role in the physiological process of macrophages. Promote the expression of SRA in the process of monocyte differentiation to macrophage. MiR-29a and scavenger receptor -SRA were up-regulated. The RNA binding protein QKI is down-regulated because of the importance of SRA receptors expressed by macrophages in atherosclerotic diseases and our previous work has shown that miR-29a can up-regulate SRA. It is particularly important to explore the intrinsic mechanism of SRA regulation. Previous work has linked miR-29a with SRA and QKI with monocyte-macrophage differentiation, but whether the three exist in monocyte-macrophage differentiation. Objective to study the detailed mechanism of miR-29a upregulation of SRA. The relationship among miR-29a, SRA and QKI in the process of mononuclear macrophage differentiation was further found. Methods in this study. At first, we used qRT-PCR and western blot methods to verify the increase of miR-29a when monocytes differentiated into macrophages. The expression of QKI was decreased and the expression of QKI protein was detected after transfection of miR-29a mimics and inhibitors in macrophages. Combined with luciferase reporter gene technique, QKI is the target gene of miR-29a. Therefore, we explored the relationship between QKI and SRA by overexpressing or knocking down QKI in macrophages. We found that QKI inhibited SRAs at the transcriptional level. With the help of luciferase reporter gene technology, we confirmed that QKI could bind directly to the QRE region on SRAmRNA. The oil red test further confirmed that QKI could inhibit the lipid phagocytosis of macrophages by acting on SRA. Results We found that miR-29a inhibited QK by binding to QKI 3 UTR. I expression. QKI can promote the degradation of SRAmRNA by acting on the QRE region of SRAmRNA. Conclusion miR-29a can promote the degradation of mononuclear SRAmRNA by targeting RNA binding protein -QKI. The up-regulation of SRA plays an important role in the differentiation of macrophages.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉妮;李建強;楊淑娟;趙卉;;中介素1-53對肺缺血再灌注損傷大鼠肺組織PPAR-γ表達的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2010年04期

2 田奕;陳鋼;徐僥;夏麗娜;;以PPAR-γ為靶點的中醫(yī)藥改善脂肪組織代謝紊亂研究[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2014年05期

3 狄政莉;牛小麟;魏瑾;李永勤;陳改玲;汪南平;;PPAR-γ在自發(fā)性高血壓大鼠血管平滑肌表達的增齡性變化[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

4 劉穎;張唯力;譚丹;;PPAR-γ配體治療慢性非細菌性前列腺炎的實驗研究[J];中國男科學(xué)雜志;2008年05期

5 李曉翠;孫丹莉;張予蜀;張振玉;;非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟PPAR-γ的表達[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2011年14期

6 潘姝;李葉揚;戴麗冰;黃粵;;PPAR-γ在增生性瘢痕成纖維細胞中的表達及意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2009年11期

7 程晨;馮憑;蘇勝偶;;2型糖尿病患者PPAR-γ基因多態(tài)性與脂聯(lián)素和瘦素的相關(guān)性[J];天津醫(yī)藥;2006年12期

8 范建高,丁曉東,王國良,徐正婕,田麗艷,鄭曉英;高脂飲食性非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟PPAR-γ表達增強[J];肝臟;2004年04期

9 朱向東;梅曉云;王燕;曹燕飛;段永強;;痛瀉要方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜PPAR-γ基因和蛋白表達的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年04期

10 韓敏;劉曉城;周文祥;張俊;;PPAR-γ在LDL誘導(dǎo)的大鼠系膜細胞增殖和基質(zhì)硬化中的作用[J];中國微循環(huán);2006年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 戴兵;天俊;孫田美;梅長林;;PPAR-γ激動劑對囊腫襯里上皮細胞的增殖及凋亡的作用研究[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

2 楊輝;李瑜元;聶玉強;杜艷蕾;石勝利;賴曉波;周永健;詹琪;;PPAR-γ與PGC-1α基因多態(tài)性和非酒精性脂肪性肝病的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

3 王良興;楊中衛(wèi);;PPAR-γ在COPD所致肺動脈高壓患者中的表達變化[A];2008年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

4 沈洪;顧培青;劉麗;朱磊;朱萱萱;葉柏;鄭凱;劉亞軍;周曉波;劉云;;清腸化濕方對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸黏膜PPAR-γ蛋白表達的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十一屆全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會暨2009年脾胃病診療新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

5 張麗;陳海平;;PPAR-γ激動劑對腎小球系膜細胞基質(zhì)合成和降解的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

6 陸邦超;鄒大進;;PPAR-γ激動劑對急性壞死性胰腺炎大鼠P38MAPK及其下游炎癥因子表達的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 楊旭紅;劉立英;戴雯;;同型半胱氨酸硫內(nèi)酯致血管內(nèi)皮功能損傷機制與PPAR-γ相關(guān)性探討[A];湖南省首屆生理—藥理科學(xué)青年論壇論文摘要匯編[C];2009年

8 王穎;謝振華;劉紅霞;祖旭宇;于玲玲;蔣宇揚;徐威;;高效、快速的PPAR-γ激動劑篩選模型的建立[A];中國化學(xué)會第26屆學(xué)術(shù)年會化學(xué)生物分會場論文集[C];2008年

9 范偉;劉玉蘭;朱惠玲;侯永清;丁斌鷹;瞿永華;;PPAR-γ激活對脂多糖刺激的斷奶仔豬腸道結(jié)構(gòu)和功能的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 俞建軍;姜應(yīng)傳;徐月敏;陳嶸;谷寶軍;喬勇;金三寶;胡曉雄;;PPAR-γ在PC3細胞中的表達以及替米沙坦對PC3細胞的影響[A];華東六省一市泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨2011年浙江省泌尿外科、男科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 岳建美;丹酚酸B通過PPAR-γ和LXRα途徑促進巨噬細胞ABCA1依賴的膽固醇流出[D];山東大學(xué);2015年

2 王帥;Wntl通過TCF4和PPAR-γ上調(diào)巨噬細胞CD36表達和MicroRNA-29a通過靶向QKI促進巨噬細胞SRA的表達[D];浙江大學(xué);2016年

3 曾誠;二苯乙烯苷對炎癥性腸病的作用:誘導(dǎo)PPAR-γ和抑制NF-κB炎癥通路[D];華中科技大學(xué);2011年

4 易文殊;脂多糖誘導(dǎo)COX-2與PPAR-γ表達對甲狀腺相關(guān)眼病眼眶前脂肪細胞分化的影響[D];中南大學(xué);2010年

5 路耘;PPAR-γ激動劑對TGF-β誘導(dǎo)的肺泡上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

6 曾誠;二苯乙烯苷對炎癥性腸病的作用：誘導(dǎo)PPAR-γ和抑制NF-κB及其炎癥通路[D];華中科技大學(xué);2011年

7 王鵬;PPAR-γ激動劑羅格列酮抗腦膠質(zhì)瘤作用及其分子機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

8 劉來昱;過氧化物酶增殖物激活受體-γ（PPAR-γ）對哮喘氣道上皮細胞TSLP表達的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

9 劉健;北京地區(qū)診斷新發(fā)麻風(fēng)患者流行病學(xué)分析及PPAR-γ和ADRP在麻風(fēng)多菌型患者脂代謝中可能作用的機制的研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2015年

10 張曉燕;PPAR-γ配體匹格列酮對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷保護作用及機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃云曼;蘭茵鳳揚化濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠PPAR-γ、claudin-1及MUC2表達的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張元琛;回藥復(fù)方軟化動脈膠囊對糖尿病動脈粥樣硬化大鼠藥效學(xué)及MMP-9、PPAR-γ基因表達的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 何學(xué)恕;PPAR-γ對大鼠心肌缺血/再灌注惡性心律失常的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

4 姜曉彤;去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠BMSCs Runx2、PPAR-γ基因表達的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

5 徐金影;MiR-27b通過PPAR-γ抑制軟骨細胞肥大化作用的研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 袁寶玉;PPAR-γ激動劑治療實驗性自身免疫性腦脊髓炎的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

7 黃乾雄;槲皮素對肝星狀細胞活化、增殖、凋亡及PPAR-γ表達的影響[D];南華大學(xué);2008年

8 鄭曉新;替米沙坦對晚期糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)的影響及與PPAR-γ的關(guān)系[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 劉玉環(huán);黃葵對腎小球系膜細胞增殖及PPAR-γ基因表達的影響[D];吉林大學(xué);2007年

10 徐靜;肝臟X受體-α與PPAR-γ在急性肺損傷大鼠的協(xié)同抗炎作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

，

本文編號：1486879