本文關(guān)鍵詞： 腸道病毒 VP 抗血清 抗體效價　出處：《免疫學(xué)雜志》2013年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的克隆并表達重組腸道病毒71(EV71)VP1基因,進行抗血清的制備并檢測抗血清效價。方法利用原核表達系統(tǒng)將PCR獲得的VP1片段構(gòu)建成原核表達載體pET32a(+)-VP1,誘導(dǎo)其表達VP1融合蛋白并利用包涵體純化方法進行重組蛋白的純化,將純化的重組蛋白免疫新西蘭兔制備VP1抗血清,ELISA檢測抗體效價。同時構(gòu)建真核表達載體,利用其在真核細胞中的瞬時表達檢測抗血清的特異性。結(jié)果通過克隆獲得VP1原核表達載體,IPTG誘導(dǎo)VP1蛋白表達并純化,SDS-PAGE結(jié)果顯示重組蛋白表達且純化濃度較高,將重組蛋白乳化后免疫新西蘭兔3次,取血檢測抗血清的效價,ELISA結(jié)果顯示抗體效價為1∶64 000,利用所構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1(+)-VP1表達VP1對抗血清進行檢測,Western blot結(jié)果表明抗血清可較好的與VP1特異性結(jié)合。結(jié)論制備具有免疫原性的VP1蛋白及其效價較高的抗血清,為進一步研究抗EV71診斷方法、血清學(xué)診斷試劑盒及抗病毒疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone and express the recombinant enterovirus EV71 VP1 gene. Methods the prokaryotic expression vector pET32a (pET-VP1) was constructed from the VP1 fragment obtained from PCR by using prokaryotic expression system. The recombinant protein was induced to express VP1 fusion protein and purified by inclusion body method. The purified recombinant protein was immunized with New Zealand rabbit to prepare VP1 antiserum. At the same time, the eukaryotic expression vector was constructed, and the specificity of antiserum was detected by transient expression in eukaryotic cells. Results the prokaryotic expression vector of VP1 was obtained by cloning. IPTG induced the expression of VP1 protein and purified SDS-PAGE results showed that the recombinant protein was expressed in high concentration. The recombinant protein was emulsified and immunized with New Zealand rabbits for 3 times. The titer of antiserum was detected by Elisa. The titer of antibody was 1: 64 000. Using the constructed eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (VP1) to express VP1 antiserum for detection. The results of Western blot showed that the antiserum could bind to VP1 specifically. Conclusion the immunogenicity of VP1 protein and the antiserum with high titer were prepared. It lays a foundation for the further study of anti-EV71 diagnostic method, serological diagnostic kit and anti-virus vaccine.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心;濟南軍區(qū)軍犬訓(xùn)練大隊;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31272586) 國家轉(zhuǎn)基因重大專項(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004) 山東省青年自然科學(xué)基金項目(ZR2010ZR029) 山東省自然科學(xué)基金(ZR2010CM012) 濟南市高校院所主創(chuàng)新計劃(201004027)
【分類號】：R373
【正文快照】： 腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是導(dǎo)致手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)以及心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜炎等多種并發(fā)癥的主要病原體之一,多發(fā)于5歲以下兒童,以1～3歲最為常見[1]。EV71屬于小RNA病毒科腸道病毒屬,病毒顆粒為二十面立體對稱的球型結(jié)構(gòu),直徑為2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 霍康;謝鵬;徐鳴明;張曉東;展群嶺;楊德雨;胡永波;;博爾納病毒核蛋白的原核表達、純化及鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2009年04期

2 李曉楠;趙忠鵬;段躍強;趙曉燕;王希良;李培鋒;;EV71型vP1蛋白表達、純化及免疫原性的初步評價[J];免疫學(xué)雜志;2010年03期

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 王宇;田志革;歐陽鳳菊;郭巍;相文華;王世澤;曲娟娟;;馬乙型腦炎病毒E蛋白的原核表達及間接ELISA的初步應(yīng)用[J];免疫學(xué)雜志;2010年07期

2 楊學(xué)習(xí);謝美娟;李欣;李粉霞;徐偉文;李明;;人酪氨酸激酶6原核表達載體的構(gòu)建、表達、純化與鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2011年02期

3 劉鑫;段長松;李仲;王校偉;趙忠鵬;王希良;;五株EV71病毒毒力、免疫原性與基因組比較分析[J];免疫學(xué)雜志;2011年06期

4 蔡陽;任真;何學(xué)軍;吳華;喬紅群;;纖維蛋白黏合劑免疫原性的研究[J];免疫學(xué)雜志;2011年09期

5 徐曉艷;金戈;張亮;李文娟;鄧婧;馬麗華;黃榮忠;房亮;謝鵬;;抗博爾納病病毒核蛋白單克隆抗體的制備和鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2012年03期

6 姚相杰;何雅青;蔡春林;楊洪;冼慧霞;張海龍;羅敏;張仁利;;腸道病毒71型真核雙基因表達載體的構(gòu)建[J];檢驗醫(yī)學(xué)與臨床;2012年23期

7 徐婧雯;李鴻鈞;謝天宏;張光明;尹娜;孫茂盛;;腸道病毒71型類病毒顆粒在昆蟲細胞Sf9中的表達[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年05期

8 徐曉艷;金戈;張亮;馬麗華;李文娟;鄧婧;黃榮忠;房亮;謝鵬;;抗博爾納病病毒核蛋白多克隆抗體的制備和鑒定[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年03期

9 王錦;許國章;;人腸道病毒71型疫苗研究進展[J];浙江預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 徐娟;腸道病毒EV71 VP1基因的優(yōu)化和免疫原性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 徐婧雯;腸道病毒71型類病毒顆粒在昆蟲細胞Sf9中的表達[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 羅永彬;腸道病毒71型的分離檢測及滅活疫苗免疫原性研究[D];昆明理工大學(xué);2012年

3 徐曉艷;博爾納病病毒核蛋白多克隆抗體和單克隆抗體的制備與鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 吳海波;郭潮潭;;手足口病疫苗研究進展[J];中國兒童保健雜志;2009年01期

2 田代印;符州;王曉芳;王莉佳;;Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)表達鼠IL-4受體拮抗體蛋白的研究[J];免疫學(xué)雜志;2008年01期

3 王雅靜;肖紅;王冰姝;陳惠珍;鐘昱文;柯昌文;張里君;;手足口病腸道病毒核酸檢測方法的比較研究[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2009年02期

4 李雙杰;;腸道病毒71型感染性疾病[J];實用兒科臨床雜志;2008年22期

5 馬秀麗;宋敏訓(xùn);于可響;廖明;辛朝安;;鴨病毒性肝炎病毒VP1基因表達及其抗體檢測ELISA方法的建立[J];微生物學(xué)報;2008年08期

6 王振海;謝鵬;楊平;孔繁元;;病毒性腦炎患者血液和腦脊液博爾納病病毒p24的檢測[J];中華神經(jīng)科雜志;2006年02期

7 徐平,謝鵬,鄒德智;博爾納病病毒與慢性格林-巴利綜合征[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年06期

8 徐平,謝鵬,鄒德智,左聯(lián);中國精神病人外周血博爾納病病毒P24基因片段檢測[J];中國人獸共患病雜志;2004年06期

9 羅剛;蔣李懿;陳謙明;;手足口病的流行病學(xué)及診治[J];中國實用口腔科雜志;2008年08期

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 薛楊;安德榮;全鑫;李明福;;南芥菜花葉病毒外殼蛋白的克隆表達及抗血清的制備[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2006年06期

2 王鳴剛;趙宏;劉左軍;吳亦亮;陳亮;;AtPCS1基因的原核表達及多抗血清的制備[J];蘭州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年02期

3 岑建萍;程浩;曾鳳英;鄭磊;盧忠明;;淋球菌外膜Porin Ⅰ蛋白多價抗血清的制備及其臨床應(yīng)用初探[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2007年09期

4 鞠傳靜;宋成偉;萬家余;姜久菊;;小鼠載脂蛋白A-Ⅰ的原核表達及抗血清的制備[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年05期

5 曹玉紅;張光運;張國成;;人β防御素4在大腸桿菌中的融合表達及其多克隆抗體的制備和鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2008年02期

6 王振東;王清和;;棗瘋病類菌原體抗血清的制備及其應(yīng)用的初步研究[J];微生物學(xué)雜志;1988年04期

7 張俊杰,吳元明,劉慧萍,紀宗玲,陳南春,陳蘇民;兔抗人ERA抗血清的制備[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2001年01期

8 譚復(fù)善;李文超;崔雷;劉丹;秦紅剛;孟慶文;;雞Mx基因的表達及其抗血清的制備[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2009年05期

9 成大榮,孫懷昌,徐建生,高崧;大腸埃希氏菌F18菌毛結(jié)構(gòu)蛋白與黏附特性的關(guān)系[J];中國獸醫(yī)科技;2005年09期

10 李凡;胡東維;陳鋒;崔曉峰;;小麥TaMlo基因的原核表達、抗體制備及細胞化學(xué)分析(簡報)[J];分子細胞生物學(xué)報;2005年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 魏群;賈振宇;陳萍;王林波;曹江;;eIF3g GST融合蛋白的表達與兔抗血清的制備[A];浙江省免疫學(xué)會第六次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

2 王永久;由振東;崔瑞耀;路長林;何成;;大鼠腦中催產(chǎn)素受體cDNA的克隆和在大腸桿菌與CHO細胞內(nèi)的表達[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（下）[C];2003年

3 馬春全;黃興國;鄧小雄;顧萬軍;;鴨卵黃IgG的純化及兔抗鴨IgG血清的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分第12次暨中國動物病理生理學(xué)專業(yè)委員會第11次學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2003年

4 徐國良;張卓輝;張增珠;張啟云;;雙黃連注射劑過敏癥動物模型的實驗研究[A];第九屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會大會報告及論文集[C];2007年

5 范泉水;余方芳;鄭穎;;用生物信息學(xué)方法和多抗原表位DNA免疫方法設(shè)計制造生物毒素抗血清[A];第八屆中國生物毒素學(xué)術(shù)研討會論文摘要[C];2007年

6 趙丹慧;張艷;李成文;;人甲狀旁腺激素基因表達產(chǎn)物及合成肽抗體的制備[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

7 尹榮蘭;王浩然;金寧一;金擴世;夏志平;沈國順;徐敬龍;賈雷立;郭建順;;重組雞痘病毒vFV282疫苗株免疫鴿抗體消長規(guī)律的檢測[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2005年

8 雷紅濤;方堅生;孫遠明;王弘;沈玉棟;黃曉鈺;馮偉雯;;丁草胺人工抗原及抗體制備研究[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集[C];2006年

9 曹玉紅;張國成;;人β防御素4的基因克隆、表達及其抗體的研究[A];西北五�。▍^(qū)）第六屆兒科學(xué)術(shù)交流大會論文匯編[C];2008年

10 朱文革;邵慶紅;邢佳鵬;楊吉濤;;雞新城疫濃縮滅活苗與常規(guī)滅活苗免疫效果對比試驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十四次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 湯芬;農(nóng)村畜禽防疫存在的誤區(qū)及應(yīng)對措施[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2009年

2 管維邋石先來;中山局研制出植物病毒抗血清[N];中國國門時報;2008年

3 海波邋通訊員 石先來;中山研制出三種病毒抗血清[N];廣東科技報;2008年

4 記者 黃啟艷邋通訊員 管維 石先來;其潛在價值超過億元[N];中山日報;2008年

5 王永坤 錢鐘 秦淑美 王暉;防治小鵝瘟的有效措施[N];中國畜牧報;2005年

6 記者 朱敏麗　通訊員 潘越;中國醫(yī)藥城首批融合蛋白試劑出口[N];泰州日報;2010年

7 吳紅梅;我省首批融合蛋白試劑出口美國[N];新華日報;2010年

8 金陵;融合蛋白試劑首次出口美國[N];中國醫(yī)藥報;2010年

9 孔國進;畜禽接種疫苗三誤區(qū)[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2006年

10 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院婦產(chǎn)科教授 姚若進邋謝明霞 整理;“三套車”法：對抗嚴重Rh溶血[N];健康報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姚衛(wèi)鋒;衣原體噬菌體Chp3衣殼蛋白VP1的表達及蛋白間作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

2 柏亞鐸;犬瘟熱病毒、犬冠狀病毒入侵宿主細胞機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 張懷;人Hepcidin融合表達載體的構(gòu)建、在大腸桿菌中的表達及制備研究[D];北京化工大學(xué);2005年

4 王玉梅;嵌合降鈣素基因的構(gòu)建及表達[D];中國海洋大學(xué);2005年

5 徐海燕;人BAFF基因轉(zhuǎn)染細胞及其單克隆抗體的生物學(xué)特性[D];蘇州大學(xué);2005年

6 石炳興;靶向溶栓抗凝雙功能融合蛋白的構(gòu)建表達及在血栓疾病治療中的應(yīng)用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

7 蔣驊;GST-EGFR融合蛋白沖擊樹突狀細胞治療頭頸部鱗狀細胞癌體內(nèi)外實驗觀察[D];浙江大學(xué);2008年

8 賀菽嘉;膠質(zhì)瘤相關(guān)抗原MAGE-D4基因重組、表達特性分析及抗體血清學(xué)檢測[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 徐越馳;組氨酸為活性中心的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶和細胞自噬標記物的研究[D];吉林大學(xué);2010年

10 劉榮;人4-1BBL/抗CD20融合蛋白增強抗CD3/抗CD20雙功能抗體的細胞毒作用及其機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李緒友;昆蟲圍食膜蛋白抗體對桿狀病毒感染性的影響[D];華中師范大學(xué);2006年

2 姜艷華;豬鏈球菌不同血清型抗血清的制備及在病原流行病學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 李潤成;口蹄疫基因工程疫苗的初步研制[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 劉鵬;MxA蛋白的抗體制備及其特異性分析[D];蘇州大學(xué);2008年

5 劉麗梅;登革2型病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS2B的表達、純化及其抗體制備[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 孫軍;粘著斑激酶的原核表達、純化及抗體的制備[D];東北師范大學(xué);2007年

7 林玲;環(huán)加氧酶-2啟動子區(qū)抑制性結(jié)合蛋白Nono的原核表達和多克隆抗體的制備[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

8 李袁飛;凋亡相關(guān)新基因apr-2的克隆、表達及多克隆抗血清的制備[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 白彥霞;營養(yǎng)相關(guān)基因(fdr3和TaNRT1)功能的進一步研究[D];首都師范大學(xué);2000年

10 李菁;A型口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

，

本文編號：1486383