本文關(guān)鍵詞： 登革病毒 中和作用 抗體依賴增強作用 prM抗體 prM抗獨特型抗體　出處：《深圳大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：登革病毒(dengue virus,DENV)是一種正鏈RNA病毒,在分類學(xué)上屬于黃病毒屬,分為4種血清型(DENV1-4)。四種不同血清型的登革病毒可以共循環(huán)在同一地區(qū)。初次感染登革病毒的患者出現(xiàn)輕微的登革熱癥狀,其體內(nèi)產(chǎn)生的抗體能夠?qū)ν活愋偷牟《井a(chǎn)生長時間的保護作用,但是二次異型感增加患者出現(xiàn)登革重癥疾病的風(fēng)險,出現(xiàn)威脅生命的登革出血熱(DHF)和登革休克(DSS)癥狀。異型交叉反應(yīng)的抗體介導(dǎo)了病毒與Fcγ受體細胞的結(jié)合,促進了登革病毒進入Fcγ受體細胞,這個過程被成為抗體依賴增強作用(antibody dependent enhancement,ADE)。許多研究表明人對登革病毒產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原主要是登革病毒的前膜prM蛋白,體內(nèi)外研究證實prM抗體增加了登革病毒的感染能力。在這篇研究中,通過空斑中和實驗,我們發(fā)現(xiàn)了一種能夠中和DENV-1的兔源性多抗。熒光定量PCR結(jié)果證明了DENV-2人免疫血清和鼠源性prM單抗顯著增加培養(yǎng)上清中的DENV-1的核酸拷貝數(shù),流式細胞儀顯示DENV-2人免疫血清和鼠源性prM單抗顯著增加DENV-1對K562細胞的感染率。隨后,我們通過向Balb/c小鼠免疫鼠源性prM單抗獲得了較高滴度的prM抗獨特型抗體(prM-AIDs)。熒光定量PCR結(jié)果表明prM-AIDs能夠顯著地抑制鼠源性prM單抗介導(dǎo)的DENV-1對K562細胞的感染,其抑制率最高達到90%。為了進一步探究是否prM-AIDs也能在體內(nèi)抑制ADE作用,我們建立了以一種干擾素-α和γ受體缺陷的AG6小鼠為背景的登革病毒ADE模型。熒光相對定量PCR檢測AG6小鼠外周血細胞中的病毒變化,空斑實驗檢測血漿中的活病毒粒子。顯微鏡計數(shù)血小板數(shù)量,ELISA試劑盒測定感染感染第三天時AG6小鼠的IL-10和ALT水平。實驗結(jié)果顯示鼠源性prM單抗增加了小鼠體內(nèi)的病毒滴度,升高了血漿中的白介素IL-10和轉(zhuǎn)氨酶ALT,減少了血小板的數(shù)量。然而,注射prM-AIDs降低了小鼠體內(nèi)的病毒滴度、IL-10和ALT水平。重要的是在感染第三天時小鼠的血小板數(shù)量也顯著回升。實驗結(jié)果證明prM-AIDs能夠有效地在體內(nèi)外抑制prM單抗介導(dǎo)的登革病毒ADE效應(yīng)。為治療登革重癥提供了一種有效的新策略。
[Abstract]:Dengue virus (DENVV) is a positive stranded RNA virus belonging to the genus yellow virus in taxonomy. There are four serotypes of DENV1-4. Four different serotypes of dengue virus can be circulated in the same area. Patients with initial dengue virus infection develop mild symptoms of dengue fever. Antibodies produced in the body can protect the same type of virus for a long time, but secondary allelopathy increases the risk of developing severe disease. The presence of life-threatening DHFs and DSSs. Heterogeneous cross-reaction antibodies mediate the binding of the virus to FC 緯 receptor cells. It promotes the entry of dengue virus into FC 緯 receptor cells, and this process is called antibody dependent enhancement antibody dependent enhancement. Many studies have shown that the antigen of human immune response to dengue virus is mainly the promembrane prM protein of dengue virus. In vivo and in vitro studies have confirmed that prM antibodies increase the ability to infect dengue viruses. In this study, plaque neutralization was used. We found a rabbit polyclonal antibody capable of neutralizing DENV-1. The results of fluorescence quantitative PCR showed that DENV-2 human immune serum and murine derived prM monoclonal antibody significantly increased DENV in culture supernatant. Copy number of nucleic acid. Flow cytometry showed that DENV-2 human immune serum and murine prM monoclonal antibody significantly increased the infection rate of DENV-1 on K562 cells. We obtained a higher titer of prM anti-idiotypic antibody (PRM-AIDs) by immunizing murine prM monoclonal antibody to Balb/c mice. The results of fluorescence quantitative PCR showed that prM-AIDs could significantly inhibit the infection of K562 cells by DENV-1 mediated by murine prM monoclonal antibody. In order to further explore whether prM-AIDs can also inhibit the effect of ADE in vivo. We established a ADE model of dengue virus (DV) in AG6 mice with interferon- 偽 and 緯 receptor deficiency. Fluorescence relative quantitative PCR was used to detect the viral changes in peripheral blood cells of AG6 mice. Plaque test was used to detect live virus particles in plasma. Microscopically counted platelet count. ELISA kit was used to measure the IL-10 and ALT levels of AG6 mice on the third day of infection. The results showed that the murine prM monoclonal antibody increased the virus titer in mice. Increased plasma levels of interleukin IL-10 and transaminase alt reduced platelet count. However, injection of prM-AIDs reduced the titer of the virus in mice. The levels of IL-10 and ALT. Importantly, the platelet count of mice also increased significantly on the third day of infection. The results show that prM-AIDs can effectively inhibit prM monoclonal antibody mediated in vivo and in vitro. The ADE effect of dengue virus provides an effective new strategy for the treatment of severe dengue disease.
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

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