發(fā)布時(shí)間：2018-01-26 23:57

  本文關(guān)鍵詞： 減味壽胎丸 卵巢功能不全 雌激素樣作用 卵巢 子宮 下丘腦 垂體 MCF-7細(xì)胞 ER熒光素酶報(bào)告基因　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探究減味壽胎丸對大鼠原發(fā)性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency, POI)模型的影響。探究減味壽胎丸提取物對MCF-7細(xì)胞增殖活力的影響。探究減味壽胎丸提取物對雌激素受體(Esterogen receptor, ER)熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響。方法：1.雷公藤多苷造大鼠POI模型SD大鼠分為5組：對照組、模型組、陽性對照組及減味壽胎丸高、中、低劑量組。雷公藤多苷片50mg/kg灌胃30d造大鼠POI模型,計(jì)算動(dòng)情周期紊亂次數(shù)、卵巢及子宮指數(shù)。放射免疫檢測血清雌二醇(Estradiol, E2)、卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、黃體生成素(Luteinizing hormone,LH)、 FSH/LH水平,HE染色法檢測卵巢及子宮病理形態(tài),western blot檢測卵巢、子宮ER表達(dá),免疫組化檢測下丘腦及垂體ER α的表達(dá)。2.MCF-7細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)MCF-7細(xì)胞96孔板接種,分為5組：1‰DMSO組、減味壽胎丸0.1mg/ml、0.01mg/ml、 0.001mg/ml組、0.1uM E2組,相應(yīng)藥物干預(yù)48h后以MTT法檢測MCF-7細(xì)胞的增殖活力。3.ER熒光素酶報(bào)告基因檢測實(shí)驗(yàn)MCF-7細(xì)胞接種6孔板,分為6組：1‰DMSO組、減味壽胎丸0.1mg/ml、0.01mg/ml、 0.001lmg/ml組、0.1uM E2及l(fā)uM ICI 182,780組,將質(zhì)粒用轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞內(nèi),檢測熒光素酶活性。結(jié)果：1.減味壽胎丸對大鼠POI模型的影響(1)動(dòng)情周期：與空白組相比,模型組大鼠D1-D30、D21-D30動(dòng)情周期紊亂次數(shù)較高,P0.01；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠D1-D30、D21-D30動(dòng)情周期紊亂次數(shù)較低,P0.5,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)血清激素水平：與空白組相比,模型組及減味壽胎丸低劑量組大鼠血清FSH較高,P0.001,有非常顯著差異。與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中劑量組大鼠血清FSH較低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組相比,模型組以及減味壽胎丸低劑量大鼠血清E2水平較低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高劑量組大鼠血清E2水平較高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組相比,模型組及減味壽胎丸低劑量組大鼠血清FSH/LH較高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比陽性組及減味壽胎丸高、中劑量組大鼠血清FSH/LH較低,P0.001,有非常顯著差異。各組與空白組相比,P0.05,各組血清LH無明顯差異；各組與模型組,P0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)卵巢及子宮指數(shù)：與空白組相比,模型組卵巢指數(shù)較低,P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組卵巢指數(shù)較高,P0.001,有非常顯著差異。與空白組相比,模型組子宮指數(shù)較低,P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組子宮指數(shù)較高,P0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)卵巢及子宮病理形態(tài)：模型組卵泡較少,而其它組均可見各級(jí)卵泡。各組大鼠子宮病理形態(tài)無明顯差異。(5)卵巢ER表達(dá)：與空白組相比,模型組卵巢ER α表達(dá)顯著下調(diào),P0.001,有非常顯著差異；與空白組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠卵巢ER α表達(dá)相比明顯增高,P0.001,有非常顯著差異。與空白組相比,模型組大鼠卵巢ERβ表達(dá)明顯下調(diào),P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸各劑量組大鼠卵巢ER β表達(dá)明顯上調(diào),P0.001,有非常顯著差異。(6)子宮ER表達(dá)：與空白組相比,模型組及減味壽胎丸中、低劑量組大鼠子宮ER α表達(dá)明顯下調(diào),P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸各劑量組大鼠子宮ER α表達(dá)明顯上調(diào),P0.001,有非常顯著差異。與空白組相比,模型組大鼠子宮ERβ表達(dá)明顯下調(diào),P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠子宮ERβ表達(dá)明顯上調(diào),P0.001,有非常顯著差異。(7)下丘腦及垂體ER α表達(dá)：與空白組相比,模型組大鼠下丘腦ERα表達(dá)下調(diào),P0.01,有顯著差異；同模型組相比,陽性組及減味壽胎丸高、中劑量組大鼠的下丘腦ER α表達(dá)明顯增高,P0.01,有顯著差異。與空白組相比,模型組大鼠的垂體ER α表達(dá)水平明顯降低,P0.001,有非常顯著差異；與模型組相比陽性組及減味壽胎丸高、中、低劑量組大鼠垂體ER α表達(dá)水平上調(diào),P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.減味壽胎丸對MCF-7細(xì)胞增殖活力的影響(1)與空白組相比0.001mg/ml減味壽胎丸提取物組及0.1uM E2組細(xì)胞增殖活力較高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)與空白組相比0.001mg/ml減味壽胎丸提取物組及0.1uM E2組細(xì)胞ER α表達(dá)水平較高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.減味壽胎丸對ER熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的影響與空白組相比,0.1mg/ml、0.01mg/ml減味壽胎丸及1uM ICI 182,780組提取物組熒光素酶活性降低,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。0.001mg/ml減味壽胎丸提取物及0.1uM E2組熒光素酶活性提高,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、結(jié)論1.以減味壽胎丸干預(yù)雷公藤多苷POI大鼠模型,具有上調(diào)血清E2水平、下調(diào)血清FSH及FSH/LH水平、提高POI大鼠卵巢、子宮指數(shù)及卵泡數(shù)量,上調(diào)POI大鼠卵巢、子宮、下丘腦及垂體的ER表達(dá),減少動(dòng)情周期紊亂次數(shù)等作用。減味壽胎丸對POI大鼠的影響表現(xiàn)出了一定的雌激素樣作用。2.0.001mg/ml減味壽胎丸提取物在體外表現(xiàn)出了一定的雌激素樣作用,可通過上調(diào)ER α的表達(dá)提高M(jìn)CF-7細(xì)胞的體外增殖活力。3.0.001mg/ml減味壽胎丸提取物在體外表現(xiàn)出了一定的雌激素樣作用,可激活ER,提高ER熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。0.1mg/ml及0.01mg/ml減味壽胎丸提取物可抑制ER活性,降低熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of life - reducing Shoutai Pill on the expression of estrogen receptor ( ER ) luciferase reporter gene in rats . Compared with the model group , the serum levels of FSH / LH were lower in the model group and the lower - dose group than those in the model group ( P0.05 ) . Compared with the blank group , the serum levels of FSH / LH were lower in the model group and the life - reducing Shoutai pill group than those in the blank group . ( 3 ) The ovary and uterus index : Compared with the blank group , the ovary index of the model group was lower , P0.001 , there was very significant difference . Compared with the model group , there was a significant difference between the positive group and the life - reducing life - prolonging pill . Compared with the model group , the uterus index of the model group was lower , P0.01 , the difference was significant . Compared with the blank group , the expression of ER尾 in the uterus of the model group was significantly lower than that in the blank group ( P < 0.001 ) . Compared with the blank group , the expression of ER 尾 in the uterus of the model group was significantly lower than that in the blank group . ( 1 ) Compared with the blank group , the expression level of ER偽 in the hypothalamus of the model group was significantly lower than that in the blank group ( P < 0.01 ) . Compared with the blank group , the expression of ER 偽 in the hypothalamus of the model group was significantly lower than that in the blank group . ( 2 ) Compared with blank group , the expression level of ER偽 was higher than that in the blank group , the expression level of ER偽 was higher than that in the blank group , and the activity of luciferase reporter gene was decreased in the group of 0.01 mg / ml , 0.01 mg / ml and 0.1 uM E2 group .

【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

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本文編號(hào)：1466964