本文關(guān)鍵詞：潛伏相關(guān)基因UL138在人巨細(xì)胞病毒潛伏—激活中的調(diào)控及機(jī)制　出處：《浙江大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是目前公認(rèn)的引起先天性感染最常見的病原體之一。先天性人巨細(xì)胞病毒感染會造成流產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、宮內(nèi)發(fā)育遲緩等嚴(yán)重后果。HCMV侵入機(jī)體后,具有潛伏-激活的感染特性。絕大多數(shù)的HCMV母嬰傳播由母體潛伏病毒的激活導(dǎo)致,因此潛伏-激活在先天性HCMV感染中的重要性尤為突出。UL138基因是重要的HCMV潛伏相關(guān)基因。一方面,UL138基因編碼的蛋白可能通過限制T細(xì)胞對感染細(xì)胞的識別,從而發(fā)揮促進(jìn)病毒潛伏的作用。另一方面UL138基因編碼的蛋白能促進(jìn)由TNF-α信號通路介導(dǎo)的潛伏病毒激活的過程。因此,目前仍不清楚UL138基因在HCMV潛伏-激活中的確切角色。另外研究發(fā)現(xiàn),病毒宿主細(xì)胞的分化狀態(tài)對.HCMV能否增殖感染起了關(guān)鍵性作用。迄今為止,有關(guān)UL138基因?qū)摲腥炯?xì)胞分化影響的研究未見報道。本研究以UL138基因作為研究對象,通過上調(diào)和下調(diào)UL138基因表達(dá),探索UL138基因?qū)摲腥緺顟B(tài)和宿主細(xì)胞分化狀態(tài)的影響,以期為UL138基因在HCMV潛伏-激活作用機(jī)制提供新思路。研究目的(1)闡明潛伏相關(guān)基因UL138在HCMV潛伏-激活感染中的調(diào)控作用;(2)闡明潛伏相關(guān)基因UL138是否影響宿主細(xì)胞分化狀態(tài)。研究方法和結(jié)果(1)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)室HCMV潛伏感染模型用HCMVTowne株感染單核細(xì)胞系THP-1作為潛伏組,用HCMVTowne株感染成纖維細(xì)胞HEF作為增殖對照組。①監(jiān)測感染細(xì)胞內(nèi)潛伏相關(guān)基因UL81-82ast的表達(dá),確定病毒是否成功感染細(xì)胞。結(jié)果顯示:潛伏相關(guān)基因UL81-82ast在增殖組和潛伏組的表達(dá)都逐漸上升。②監(jiān)測感染細(xì)胞內(nèi)病毒DNA復(fù)制情況和增殖相關(guān)基因UL122、UL123表達(dá)情況,確定是否建立實(shí)驗(yàn)室HCMV潛伏感染模型。結(jié)果顯示:隨著感染天數(shù)增加,增殖組病毒DNA量逐漸上升,潛伏組病毒DNA量逐漸下降;增殖組中UL122和UL123基因表達(dá)都一直增加;而潛伏組中這兩個基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)呈一過性,感染后期檢測不到。(2)UL138基因在HCMV潛伏-激活中的調(diào)控作用①構(gòu)建UL138基因的慢病毒過表達(dá)載體及干擾載體,侵染單核細(xì)胞建立UL138基因過表達(dá)細(xì)胞株和UL138基因干擾細(xì)胞株。②以實(shí)驗(yàn)室潛伏感染模型為對照,監(jiān)測UL138基因過表達(dá)及干擾后感染細(xì)胞內(nèi)病毒DNA水平及增殖相關(guān)基因UL122、UL123表達(dá)的變化,評價潛伏感染狀態(tài)是否改變。結(jié)果顯示:與對照組相比,UL138過表達(dá)后,HCMVDNA拷貝數(shù)下降,HCMV復(fù)制的關(guān)鍵基因UL122和UL123表達(dá)下降;UL138表達(dá)受到干擾后,HCMV DNA拷貝數(shù)上升,HCMV復(fù)制的關(guān)鍵基因UL122和UL123表達(dá)增加。(3)UL138基因?qū)摲腥炯?xì)胞分化的影響以實(shí)驗(yàn)室潛伏感染模型為對照,監(jiān)測UL138基因過表達(dá)及干擾后染前后以下內(nèi)容,從而判斷UL138基因?qū)摲腥炯?xì)胞分化的影響。①HCMV宿主細(xì)胞形態(tài);結(jié)果顯示:與對照組相比,UL138過表達(dá)后,宿主細(xì)胞伸展充分,突起明顯;UL138表達(dá)受到干擾后,宿主細(xì)胞分化未見明顯變化。② HCMV宿主細(xì)胞表面分化抗原;結(jié)果顯示:與對照組相比,UL138過表達(dá)后,宿主細(xì)胞表面分化抗原CD14表達(dá)下降;UL138表達(dá)受到干擾后,宿主細(xì)胞表面分化抗原CD45表達(dá)下降。③HCMV宿主細(xì)胞分化炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β和TGFβ1表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示:與對照組相比,UL138過表達(dá)后,分化相關(guān)的炎癥因子TGFβ1表達(dá)增加;UL138表達(dá)受到干擾后,分化相關(guān)的炎癥因子未見明顯變化。結(jié)論(1)HCMVTowne株感染單核細(xì)胞THP-1后成功建立HCMV潛伏感染模型。(2)UL138基因表達(dá)上調(diào)后促進(jìn)或維持病毒的潛伏感染。(3)UL138基因表達(dá)上調(diào)后促進(jìn)宿主細(xì)胞分化。
[Abstract]:Human cytomegalovirus ( HCMV ) is one of the most common pathogens causing congenital infection . ( 3 ) The effect of UL138 gene on cell differentiation of latent infection was determined by laboratory latent infection model .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 ;Human Cytomegalovirus UL138 Open Reading Frame Is Highly Conserved in Clinical Strains[J];Chinese Medical Sciences Journal;2009年02期

2 陳琳;萬艷平;;人巨細(xì)胞病毒IE1蛋白功能研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2007年04期

3 Carlos R BECERRA;;Dissecting role of regulatory factors in NF-κB pathway with siRNA[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年07期

4 方峰;經(jīng)母嬰傳播的巨細(xì)胞病毒感染[J];中國實(shí)用兒科雜志;2004年04期

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本文編號：1428797