本文關(guān)鍵詞：葉黃素抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌感染的研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 單核細(xì)胞增生性李斯特菌 抗感染 溶血素 葉黃素

【摘要】：單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)是一種革蘭氏陽性機(jī)會致病菌,主要威脅孕婦、兒童和老年人等免疫機(jī)能較弱的群體,可引起涉及多種器官的全身性感染,最嚴(yán)重可引發(fā)細(xì)菌性腦膜炎。李斯特菌感染相對較為罕見,但其患者有極高的死亡率。臨床一般選取高劑量的青霉素G和阿莫西林聯(lián)合使用慶大霉素的抗生素療法對單增李斯特菌感染進(jìn)行治療。雖然單增李斯特菌對多種抗生素敏感,但近年來耐藥型單增李斯特菌不斷出現(xiàn),因此抗生素替代藥物的研發(fā)值得引起我們的重視。單增李斯特菌感染發(fā)病的過程需要多種毒力因子的參與,溶血素(Listeriolysin O,LLO)就是其中最重要的一員。LLO可與吞噬泡膜上的膽固醇結(jié)合,形成寡聚體并在膜上成孔,協(xié)助細(xì)菌逃避吞噬溶酶體的裂解。到達(dá)細(xì)胞溶質(zhì)的細(xì)菌迅速增殖,這一過程對細(xì)菌感染至關(guān)重要。另外,LLO缺失株幾乎喪失了致病能力,提示LLO是單增李斯特菌感染藥物研發(fā)的重要潛在靶標(biāo)。葉黃素是一種廣泛存在于蔬菜和水果之中的天然植物色素,屬于類胡蘿卜素類化合物,它對于年齡相關(guān)的黃斑變性,以及非霍奇金淋巴瘤的治療具有一定的積極作用。本研究發(fā)現(xiàn)天然植物色素葉黃素可以有效地抑制LLO寡聚,從而抑制其溶血活性。細(xì)菌生長曲線以及MIC結(jié)果提示,葉黃素對單增李斯特菌幾乎無抑菌活性(MIC≥1792μM)。我們使用巨噬細(xì)胞RAW 264.7體外建立了細(xì)菌感染模型,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明葉黃素對李斯特菌介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞損傷具有一定的緩解作用。細(xì)胞內(nèi)生長曲線結(jié)果顯示,葉黃素并未抑制細(xì)菌的內(nèi)化,而是抑制了細(xì)菌的逃逸及增殖。我們使用了免疫熒光法,對感染不同階段細(xì)胞內(nèi)的單增李斯特菌和肌動蛋白染色,并通過激光掃描共聚焦顯微鏡直接觀察,結(jié)果顯示葉黃素有效阻止了細(xì)菌從吞噬泡的逃逸,從而阻斷了其感染的最關(guān)鍵步驟。最后,我們應(yīng)用Balb/c小鼠建立了體內(nèi)細(xì)菌感染模型,探究了葉黃素對單增李斯特菌感染動物的實(shí)驗(yàn)治療學(xué)作用。結(jié)果顯示,皮下注射葉黃素可緩解非致死劑量細(xì)菌感染小鼠肝臟和脾臟的損傷,并顯著降低器官內(nèi)菌落的定殖數(shù)。在致死劑量細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)中,葉黃素治療延遲了小鼠死亡時(shí)間,并提高了其生存率。綜上所述,本研究結(jié)果表明天然化合物葉黃素可通過直接作用于LLO而抑制其介導(dǎo)的成孔活性,從而于體外和體內(nèi)降低單增李斯特菌致病力,提示葉黃素可能是一種潛在的抗感染藥物,具有深入研究的價(jià)值。
[Abstract]:Monocytogenes bacteria Lester (Listeria monocytogenes, L.monocytogenes) is a gram positive opportunistic bacteria, the main threat to pregnant women, children and the elderly immune function of weak groups, can cause systemic infection involving multiple organs, the most serious cause of bacterial meningitis. Lester infection is relatively rare, but the patients have a high mortality rate. Clinical antibiotic therapy usually takes high doses of penicillin G and amoxicillin combined with gentamicin on Listeria infection treatment. Although Lester Lester Listeria bacteria sensitive to many antibiotics, but in recent years, resistance to Listeria bacteria Lester appear constantly, so the alternative antibiotics drug development deserves our attention Lester. Listeria pathogenesis infection requires several virulence factors involved, hemolysin (Listeriolysin O LLO) is the The most important part of the.LLO with the phagosome membrane cholesterol binding, formation of oligomers and the membrane pore, assist the bacteria evade phagolysosome cracking. To reach the cell solute bacteria rapid proliferation, the process of infection. In addition, the LLO mutant almost lost its pathogenicity, tips LLO is an important potential target for drug development of Listeria Lester infection. Lutein is a widely present in vegetables and fruits of the natural plant pigment belongs to the carotenoid compounds, it is for age related macular degeneration, has a positive effect as well as the treatment of non Hodgkin lymphoma. This study found that natural plant pigment lutein can effectively inhibit LLO oligomers, thereby inhibiting its hemolytic activity. Bacterial growth curves and MIC results suggest that lutein almost no antimicrobial activity against Listeria bacteria (MIC = Lester 1792 mu M). We use RAW 264.7 macrophages in vitro established models of bacterial infection, cell toxicity experiment showed that lutein can relieve the damage of macrophage mediated. List Rand cell growth curve showed that lutein did not inhibit bacterial internalization, but inhibited the proliferation and escape of bacteria. We use immunofluorescence method in different stages of infection, intracellular Listeria bacteria Lester and actin staining, and by laser scanning confocal microscope to directly observe and results showed that lutein can effectively prevent bacteria escape from phagocytic vesicles, thereby blocking the key steps of the infection. Finally, we used Balb/c mouse model was established for bacterial infection in vivo, inquiry the lutein on Listeria bacteria infection in animal experimental treatment of Lester effect. The results showed that subcutaneous injection of lutein can alleviate non lethal agent The amount of bacterial infection in liver and spleen injury in mice, and significantly reduce the number of colonization organs within the colony. The lethal dose of bacterial infection in the experiment, the lutein treatment delay the death time of mice, and improve their survival rate. In conclusion, the results of this study show that pore activity of natural compounds leaves Huang Suke through direct interaction with LLO and inhibition the mediated in vitro and in vivo, thus to reduce Listeria Lester virulence, suggesting that lutein may be a potential anti infection drugs, has the value of further study.

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R378

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本文編號：1427468