發(fā)布時(shí)間：2018-01-12 23:26

  本文關(guān)鍵詞：電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮IRS-1-PI3K-Akt2-eNOS通路的影響　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：2型糖尿病是一個(gè)造成重大發(fā)病率和死亡率的全球性健康問題。而伴隨著的胰島素抵抗,不僅僅是諸多代謝性疾病的病理基礎(chǔ),也是心臟相關(guān)疾病或腦血管疾病的致病因素。眾多學(xué)者的研究表明:心腦血管疾病當(dāng)中伴隨有代謝障礙的核心因素離不開胰島素抵抗,而動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、心腦血管疾病的早期階段都會(huì)有血管的內(nèi)皮功能障礙。越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為,針灸在對(duì)高血糖、高血脂或者是心腦血管疾病等相關(guān)疾病的預(yù)先處理中,具有重要的意義。諸多的臨床試驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,針灸在對(duì)以上所述的疾病無(wú)論是預(yù)防還是更進(jìn)一步的干預(yù)處理,具有其獨(dú)特的地方。改善疾病當(dāng)中所存在的胰島素抵抗,這對(duì)針灸所起的療效及其作用機(jī)理起著十分重要的作用。根據(jù)前期所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果,我們綜合分析全面總結(jié)得出,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與我們所推測(cè)的相一致,以調(diào)整胰島素受體后水平為切入點(diǎn),針刺干預(yù)能通過(guò)以上的作用途徑,增強(qiáng)胰島素的敏感性,從而改善了整個(gè)機(jī)體的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。目的:以D12492配方的高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠為對(duì)象,誘導(dǎo)出胰島素抵抗模型,從宏觀到微觀、從器官到細(xì)胞到基因等層面,系統(tǒng)綜合地觀察電針對(duì)與胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)相關(guān)的內(nèi)皮功能紊亂的效應(yīng),驗(yàn)證、探討"針刺抗胰島素抵抗與針刺改善血管內(nèi)皮功能障礙密不可分,而IRS-1/PI3K/Akt2/eNOS信號(hào)通路是其發(fā)揮作用的關(guān)鍵分子機(jī)制之一"的科學(xué)假說(shuō)。方法:將所有的雄性SD大鼠予以普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后,將36只雄性SD大鼠按體重從大到小排序編號(hào),查《醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》中第832-833頁(yè)的隨機(jī)數(shù)字表(第二版,孫振球主編,人民衛(wèi)生出版社),將大鼠隨機(jī)分為了 3組,分別是空白組12只,模型組12只,電針組12只�？瞻捉M大鼠喂以普通飼料;模型組及電針組大鼠喂以D12492高脂飼料喂養(yǎng),共喂養(yǎng)12周。自第8周開始,36只SD大鼠每周隨機(jī)采集空腹時(shí)的眼眶靜脈竇血,檢測(cè)大鼠空腹時(shí)血清中FPG濃度、空腹血清中FINS濃度,并根據(jù)以上的數(shù)據(jù)計(jì)算出胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。當(dāng)與喂養(yǎng)普通飼料的空白組大鼠相比,喂養(yǎng)高脂飼料大鼠的胰島素抵抗指數(shù)水平明顯降低時(shí)(P0.05),即進(jìn)行高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn),而當(dāng)與空白組相比,喂養(yǎng)高脂飼料的大鼠的葡萄糖輸注率(GIR)明顯降低時(shí)(P0.05),則表明胰島素抵抗模型成功。電針組采取下列針刺方法進(jìn)行針刺干預(yù),模型組對(duì)照組及空白組不予針刺干預(yù)。穴取雙側(cè)"腎俞"、"內(nèi)關(guān)"、"足三里"、"三陰交",雙側(cè)"足三里"及"三陰交"加電,1次/日,持續(xù)4周。各組大鼠于治療結(jié)束后,予以10%水合氯醛麻醉充分后于眼眶靜脈竇中采血,用于檢測(cè)其血清中的FINS、FPG、C-P、TNF-α、IL-6、NO及ET-1等指標(biāo)含量,用HE染色法觀察各組大鼠胰島形態(tài)學(xué)影響并于電鏡下觀察血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)變化。取動(dòng)脈血管內(nèi)皮,使用RT-PCR及蛋白印跡檢測(cè)手段,觀察電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS基因及蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠整體狀態(tài)的影響在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,正常對(duì)照組大鼠,爬行翻身等動(dòng)作靈敏,好斗,具有良好的精神狀態(tài),毛發(fā)有光澤,無(wú)明顯脫落,墊料濕度正常,體重水平升高。針刺前可見模型組及電針組大鼠腹部肥胖,開始嗜睡懶動(dòng),動(dòng)作遲緩,大鼠皮毛泛黃無(wú)光澤、蓬亂易脫落,大便量相較空白組偏少,便質(zhì)軟色灰,尿量較多,墊料較濕。電針干預(yù)4周后,大鼠的整體狀態(tài)相比治療前,均有所好轉(zhuǎn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示電針組大鼠體重水平仍為升高趨勢(shì),但體重增長(zhǎng)的幅度相比模型組小。2胰島素抵抗模型大鼠成模的評(píng)價(jià)進(jìn)行針刺前,喂養(yǎng)12周D12492高脂飼料的模型組及電針組的葡萄糖輸注率(GIR)兩組相比無(wú)明顯差異(/0.05),兩組分別相比空白組的GIR水平顯著降低(P0.01)。模型組及電針組的空腹FPG、FINS及HOMA-IR水平兩組相比無(wú)明顯差異(P0.05),兩組分別相比空白組明顯升高(P0.01),表明胰島素抵抗模型造模成功。3電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠空腹FPG、FINS、C-P、HOMA-IR、C-P/FINS及GIR的影響模型組的空腹FPG、FINS、C-P及HOMA-IR相比空白組,水平顯著升高,而模型組的GIR及C-P/FINS水平相比空白組降低(P0.01)。經(jīng)過(guò)4周的治療,電針組的空腹FPG、FINS、C-P及HOMA-IR相較模型組顯著降低(P0.01),而GIR水平明顯升高(P0.01),C-P/FINS水平有所升高但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠胰島HE染色下的形態(tài)學(xué)影響HE染色后于10×20光鏡下,空白組大鼠胰島結(jié)構(gòu)完整,胰島內(nèi)各類細(xì)胞邊界清楚,形態(tài)正常,細(xì)胞排列規(guī)整,大小一致,分布均勻,未見明顯的病理學(xué)改變。模型組大鼠的胰島結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞之間的界限不清,細(xì)胞內(nèi)水腫,胞漿疏松,細(xì)胞碎裂,染色相對(duì)淺淡,排列不規(guī)則,細(xì)胞分布不均,并多處可見到空泡樣變性,見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。電針組大鼠胰島結(jié)構(gòu)較完整,胰島內(nèi)各類細(xì)胞邊界較清楚,形態(tài)接近正常,排列較規(guī)則,細(xì)胞分布較均勻,細(xì)胞腫脹、碎裂少見,少數(shù)可見空泡樣變性。5電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管HE染色下的形態(tài)學(xué)影響HE染色后于10×20光鏡下,可見空白組大鼠的主動(dòng)脈整個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞層為完整連續(xù)狀態(tài),內(nèi)皮層厚度未見明顯的變化,皮下緊密連接平滑肌層,且該層細(xì)胞排列規(guī)整。鏡下可見模型組大鼠的動(dòng)脈內(nèi)皮層相較空白組明顯增厚,且內(nèi)皮細(xì)胞間部分連接斷開、水腫,彈力纖維斷裂,其中的平滑肌細(xì)胞炎性增生、排列無(wú)序。電針組中大鼠的主動(dòng)脈內(nèi)皮層相對(duì)完整,相比模型組大鼠,無(wú)明顯增厚,血管中層的彈力纖維、平滑肌細(xì)胞無(wú)明顯的排列無(wú)序,總體的血管病理改變得到一定的改善。6電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)的影響正常組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜為單層扁平細(xì)胞,內(nèi)襯于動(dòng)脈壁,內(nèi)膜平坦,內(nèi)皮細(xì)胞下連接緊密,間隙窄,細(xì)胞器簡(jiǎn)單,未見明顯的線粒體異常;模型組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞下接連疏松,扁平細(xì)胞與動(dòng)脈壁間隙增寬,壁上出現(xiàn)多數(shù)的空泡樣線粒體;電針組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞與動(dòng)脈壁間隙稍寬,血管壁上少數(shù)線粒體的嵴部局部消失。7電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血清TNF-α、IL-6、NO及ET-1的影響相比空白組大鼠的血清TNF-α、IL-6、ET-1及NO水平,模型組大鼠的血清TNF-α、IL-6及ET-1水平明顯升高,而血清NO水平則明顯降低(P0.01)。經(jīng)過(guò)4周的針刺干預(yù)后,電針組大鼠的血清的TNF-α、IL-6及ET-1相比模型組明顯降低,血清NO水平明顯升高(P＜0.01)。8電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS基因表達(dá)水平的影響模型組大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS基因表達(dá)水平與空白組比較,顯著降低(P0.01);電針組大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS基因表達(dá)水平與模型組比較,明顯升高(P0.05)。9電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS蛋白表達(dá)水平的影響與空白組比較,模型組血管內(nèi)皮Akt2磷酸化水平及eNOS磷酸化水平明顯降低(P0.01),模型組大鼠血管內(nèi)皮IRS-1、PI3K、Akt2及eNOS蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.01);與模型組比較,電針組大鼠血管內(nèi)皮Akt2磷酸化水平及eNOS磷酸化水平明顯升高(P＜0.05),電針組大鼠血管內(nèi)皮PI3K、AKT2及eNOS蛋白表達(dá)水平顯著升高(P0.05),IRS-1蛋白表達(dá)水平有所升高但變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:研究結(jié)果表明,電針可以增強(qiáng)胰島素敏感性,通過(guò)上調(diào)IRS-1/PI3K/Akt2/eNOS信號(hào)通路,從而改善大鼠的內(nèi)皮功能障礙及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R245;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1416480