本文關鍵詞：玉米赤霉烯酮單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析法的建立　出處：《細胞與分子免疫學雜志》2013年07期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的制備并鑒定玉米赤霉烯酮(ZEN)單克隆抗體(mAb),并初步建立ZEN的膠體金免疫層析檢測方法。方法采用活潑酯法制備人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作為免疫原制備ZEN mAb。ELISA法鑒定抗體效價、亞類、特異性等。ZEN mAb-膠體金復合物包被于膠體金結合墊上,檢測原ZEN-BSA和山羊抗小鼠IgG分別結合于硝酸纖維膜上作為檢測線(T線)和質控線(C線),建立ZEN的膠體金免疫層析檢測法。結果經紫外分光光度法和SDS-PAGE鑒定,ZEN人工抗原合成成功。經3次克隆化后,篩選出1株能穩(wěn)定分泌ZEN mAb的雜交瘤細胞株1G4,腹水效價為1∶1.6×105;抗體亞類為IgG2b;對ZEN的IC50為10.2 ng/mL,檢測限為0.58 ng/mL。mAb對ZEN具有高度的特異性,除與β-玉米赤霉烯醇的交叉反應率為12.8%外,與其他ZEN代謝物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素嘔吐毒素、伏馬毒素、赭曲霉素A等幾乎無交叉反應。制備的膠體金免疫層析試紙條在5 min內即可肉眼觀察到結果,對ZEN的最低檢測限為100 ng/mL。結論成功制備出1株ZEN mAb,并初步建立了其膠體金免疫層析檢測方法,最低檢測限為100 ng/mL。
[Abstract]:Objective to prepare and identify zearalenone (ZEN) monoclonal antibody (mAb), and the initial establishment of colloidal gold immunochromatographic method. ZEN method using active ester preparation of artificial antigen of ZEN-OVA and ZEN-BSA, ZEN identified mAb.ELISA antibody titer, ZEN-OVA as immunogen to subtype specificity, etc..ZEN mAb- colloidal gold particles was coated with colloidal gold combined pad, check the original ZEN-BSA and Goat anti mouse IgG antibodies bind to nitrocellulose membrane as the test line (T line) and the control line (C line), colloidal gold immunochromatographic assay of ZEN was established. The results by UV spectrophotometry SDS-PAGE analysis and ZEN artificial antigen was synthesized successfully. After 3 times of cloning, screening of 1 hybridoma cell lines secreting ZEN mAb hybridoma cell line 1G4, titer of ascites was 1: 1.6 x 105; antibody subclass is IgG2b; the ZEN IC50 is 10.2 ng/mL, the detection limit is 0.58 ng/mL.mAb for ZEN high In addition to the degree of specificity, cross reactivity with beta - zearalenol rate was 12.8%, and the other ZEN metabolites alpha zearalanol, beta zearalanol zearalanone, and other similar toxin deoxynivalenol, fumonisins, ochratoxin A, almost no cross reaction. The preparation of colloidal gold immunochromatographic test strip within 5 min can be observed to the minimum detection limit for ZEN was 100 ng/mL. conclusion the successful preparation of the 1 strains of ZEN mAb, and established the detection method of the gold immunochromatographic assay, the detection limit was 100 ng/mL.

【作者單位】： 暨南大學廣東省分子免疫與抗體工程重點實驗室;
【基金】：天河區(qū)科技計劃項目(108ZH044) 暨南大學創(chuàng)新基金資助(11610312)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： )玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)又稱F-2毒素,是由多種鐮刀菌產生的一種類雌激素樣的真菌毒素。ZEN污染范圍廣泛,具有較強生殖毒性和致畸作用,可引起動物發(fā)生雌激素亢進癥,導致動物不孕或流產,對豬、家禽、反芻動物影響較大,給畜牧業(yè)帶來很大經濟損失[1-2];此外,ZEN還具有細

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1415994