本文關鍵詞：出生后小鼠牙不同發(fā)育期β-catenin和DKK1表達特性研究　出處：《吉林大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:1、觀察出生后不同時間點小鼠牙齒發(fā)育形態(tài)特點。2、觀察出生后小鼠牙發(fā)育各階段β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和Dickkopf-1(DKK1)的時空表達特點,推測β-catenin和DKK1在牙體組織和牙周組織發(fā)育中所起到的作用,為闡明Wnt信號通路調(diào)控牙發(fā)育機制提供證據(jù)。方法:隔天中午取出生后第0.5天—30.5天的昆明小鼠并按時間分組,每組3只。頸椎脫臼法處死小鼠,仔細剝離含有下頜第一磨牙的下頜骨組織,浸泡于4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液中1晚進行固定,流水沖洗后置于10%乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)溶液中,存放于4℃冰箱內(nèi)進行脫鈣,根據(jù)組織硬度不同脫鈣時間1—30天不等。脫鈣完成后用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,常規(guī)組織脫水,石蠟包埋,制作5μm厚含有下頜第一磨牙的組織切片。采用蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察下頜第一磨牙的發(fā)育狀態(tài),應用免疫組化染色法顯示β-catenin和DKK1在牙體組織和牙周組織中的表達特點。結(jié)果:1、成功的制作了出生后小鼠各時間點包含下頜第一磨牙的組織切片,并通過HE染色觀察了出生后小鼠下頜第一磨牙在各時間點的發(fā)育情況。2、免疫組化方法觀察了出生后小鼠牙體和牙周組織中β-catenin和DKK1的時空表達特性。(1)小鼠出生后第0.5天時,β㧟catenin在牙髓組織中無表達,在成牙本質(zhì)細胞、成釉細胞和釉結(jié)節(jié)中輕微表達。4.5天時,β㧟catenin在成牙本質(zhì)細胞和成釉細胞中表達加深,上皮根鞘處無表達。6.5天時,牙髓中β㧟catenin已經(jīng)有輕微表達,此后其表達逐漸加深。12.5天時,牙髓中β㧟catenin表達加深,呈現(xiàn)陽性表達。此時牙根雛形已經(jīng)形成,在新形成的牙周膜中β㧟catenin也呈陽性表達。14.5㧟26.5天時,β㧟catenin在牙髓牙和周膜中表達穩(wěn)定,一直呈現(xiàn)強陽性表達,后期牙槽骨中也出現(xiàn)陽性表達。30.5天時,牙周膜和牙髓中的β㧟catenin表達均減弱。(2)小鼠出生后第0.5天時,牙胚組織中幾乎沒有DKK1表達。6.5天時,成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞和前期牙本質(zhì)中DKK1弱陽性表達,上皮根鞘組織呈現(xiàn)輕度表達,表達逐漸加深。12.5天時,DKK1在成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞、前期牙本質(zhì)和牙周膜中均呈陽性表達。14.5—18.5天時,成牙本質(zhì)細胞和前期牙本質(zhì)中DKK1仍呈陽性表達,含量基本未變化,而牙周膜中DKK1表達增強。20.5—24.5天時,牙周膜中DKK1成強陽性表達,值得注意的是,在根部的細胞性牙骨質(zhì)和牙槽骨中可見DKK1陽性表達的細胞。此種表達特點一直延續(xù)至第30.5天,而牙髓組織在各時期均未見DKK1陽性表達。結(jié)論:采用HE染色的方法,成功觀察了出生后小鼠牙齒的發(fā)育過程,為牙齒發(fā)育方面的研究奠定了組織學基礎。出生后小鼠牙不同發(fā)育期β㧟catenin和DKK1在牙體組織和牙周組織中的表達存在一定的規(guī)律性,本研究結(jié)果為闡明Wnt信號通路調(diào)控牙發(fā)育機制提供了證據(jù)。
[Abstract]:Objective to observe the morphological characteristics of tooth development in mice at different time points after birth. The temporal and spatial expression of 尾 -catenin and Dickkopf-1 DKK1 in postnatal mouse teeth were observed. The role of 尾 -catenin and DKK1 in the development of dental and periodontal tissues was speculated. Methods: Kunming mice from 0.5 to 30.5 days after birth were collected at noon the next day and divided into groups according to time. Three mice in each group were killed by cervical dislocated method. The mandibular bone tissue containing the first molar of mandible was carefully removed and fixed in 4% paraformaldehyde phosphate buffer solution for 1 night. Income was washed and placed in 10% ethylenediamine tetraacetic acid disodium EDTA solution and stored in refrigerator at 4 鈩，

本文編號：1415178