本文關(guān)鍵詞：質(zhì)膜蛋白3參與的真菌耐多烯類AmB機制研究　出處：《東華大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： AmB 耐藥性 PMP3 ROS MAPK途徑

【摘要】：深部真菌感染是一種致病性真菌侵犯皮下組織和器官所引起的真菌感染性疾病,其死亡率較高且難以治療。兩性霉素B(Amphotericin B,AmB)是一種有效治療深部真菌感染的臨床用藥,但隨著AmB使用的增多,耐藥性問題日漸嚴峻,而且耐藥菌株的分子機制并不清楚。本實驗室前期研究表明質(zhì)膜蛋白3(PMP3p)高表達增加了細胞對AmB的抗性,但PMP3與AmB相關(guān)性的研究還很少。本文開展質(zhì)膜蛋白3在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和白色念珠菌(Canidia Albicans)中參與的耐AmB機制研究。文獻研究表明AmB的作用機制主要有兩種:一種是通過與甾醇結(jié)合,使細胞質(zhì)膜形成孔洞,胞內(nèi)物質(zhì)外流,造成細胞死亡;一種是AmB能增加細胞內(nèi)的氧化損傷,造成細胞死亡。因此,首先,本文通過PI染色質(zhì)完整性檢測實驗和羅丹明123吸收和外排實驗,發(fā)現(xiàn)過表達PMP3能增加細胞質(zhì)膜的穩(wěn)定性。因PMP3,最早是在植物中發(fā)現(xiàn)的,且對植物細胞內(nèi)離子的平衡有重要作用。因此我們探究了在酵母中,PMP3調(diào)控兩性霉素B抗性與離子的關(guān)系。實驗表明PMP3對Na+的平衡起重要作用,而與K+和Ca2+沒有相關(guān)性。同時還發(fā)現(xiàn),PMP3調(diào)節(jié)AmB的抗性與NHA1和VCX1通路是無關(guān)的。其次,我們在甾醇合成通路阻斷的突變體(erg2△,erg6△,erg24△,hmg1△和hmg2△)中超表達PMP3基因也能夠提高細胞對AmB的抗性,說明阻斷甾醇合成通路并不影響PMP3調(diào)節(jié)細胞對AmB的抗性。進一步研究在野生型(BY4741)及不同遺傳突變菌株中過表達PMP3甾醇含量沒有顯著變化。這表明PMP3不是通過調(diào)控甾醇的合成來影響細胞對AmB的抗性。最后,研究了PMP3與藥物誘導(dǎo)的氧化脅迫之間的關(guān)系。結(jié)果表明AmB能造成細胞內(nèi)活性氧的增加,使細胞內(nèi)的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(TBRAS)和蛋白羰基含量(CP)增加。并且抗氧化相關(guān)的酶如超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(Gpx)活性也增加,超表達PMP3能使細胞內(nèi)抗氧化酶合成升高,降低了細胞內(nèi)的活性氧含量,從而保護了細胞,這表明超表達PMP3能提高細胞內(nèi)抗氧化酶降低胞內(nèi)活性氧來增加細胞對AmB的抗性。同時,已有研究表明細胞內(nèi)ROS的降低不僅與抗氧化酶有關(guān),而且與MAPK通路有密切的關(guān)系。我們進一步研究表明,MAPK通路的中的關(guān)鍵基因SPC1和ATF1缺失的情況下(atf1△和spc1△),超表達PMP3不表現(xiàn)AmB抗性,也不能降低細胞內(nèi)活性氧;PT-PCR的檢測細胞PMP3表達水平與AmB處理或氧化脅迫的依賴關(guān)系被破壞�？傊�,PMP3調(diào)節(jié)AmB的抗性依賴于MAPK通路的完整性。
[Abstract]:Deep fungal infection is a fungal infectious disease caused by pathogenic fungi invading subcutaneous tissues and organs, and its mortality is high and difficult to treat. Amb is an effective clinical drug for the treatment of deep fungal infections, but with the increasing use of AmB, the problem of drug resistance is becoming more and more serious. In addition, the molecular mechanism of drug-resistant strains is not clear. Our previous study showed that the high expression of plasma membrane protein 3PMP3p increased the cell resistance to AmB. However, the correlation between PMP3 and AmB was seldom studied. In this paper, the plasma membrane protein 3 was developed in Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans (Candida albicans). Canidia Albicanss is involved in the mechanism of AmB tolerance. The literature shows that there are two main mechanisms of AmB: one is by binding with sterols. Make the cell plasma membrane to form a hole, intracellular material outflow, resulting in cell death; One is that AmB can increase the oxidative damage in cells and cause cell death. Therefore, firstly, the Pi chromatin integrity test and Rhodamine 123 absorption and efflux test were used. It was found that overexpression of PMP3 could increase the stability of cytoplasmic membrane. PMP3 was first found in plants and played an important role in the homeostasis of intracellular ions in plants. PMP3 regulates the relationship between amphotericin B resistance and ions. The results show that PMP3 plays an important role in Na balance, but has no correlation with K and Ca2. The resistance of PMP3 to AmB regulation was not related to the NHA1 and VCX1 pathway. Secondly, our mutant Erg2 / erg6 / Erg24 was blocked by sterol synthesis pathway. Overexpression of PMP3 gene in hmg1 and hmg2 can also enhance the cell resistance to AmB. It is suggested that blocking the sterol synthesis pathway does not affect the resistance of PMP3 to AmB. There was no significant change in the content of overexpressed PMP3 sterols in different genetic mutants, which indicated that PMP3 did not affect the resistance of cells to AmB by regulating the synthesis of sterols. The relationship between PMP3 and drug-induced oxidative stress was studied. The results showed that AmB could increase intracellular reactive oxygen species (Ros). The lipid peroxidation products (TBRAS) and protein carbonyl content (CPP) were increased, and antioxidant related enzymes such as superoxide dismutase (SOD), catalase (catalase). Glutathione peroxidase (GPX) activity was also increased. Overexpression of PMP3 could increase the synthesis of antioxidant enzymes and decrease the content of reactive oxygen species in the cells, thus protecting the cells. This suggests that overexpression of PMP3 can increase intracellular antioxidant enzymes and decrease intracellular reactive oxygen species (Ros) to increase cell resistance to AmB. Meanwhile, studies have shown that the decrease of intracellular ROS is not only related to antioxidant enzymes. Our further study shows that the key genes in the MAPK pathway SPC1 and ATF1 are absent in the presence of ATF1 and spc1). Overexpression of PMP3 did not show AmB resistance, nor did it reduce intracellular reactive oxygen species (Ros). The relationship between the PMP3 expression level of PT-PCR and AmB treatment or oxidative stress was destroyed. In a word, the regulation of AmB resistance by PMP3 depended on the integrity of MAPK pathway.
【學(xué)位授予單位】：東華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R379

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蘇尊瑋,王仁明,黃興清;腹水真菌感染2例報道[J];中華肝臟病雜志;2000年05期

2 佘尚揚;胃真菌感染研究進展[J];臨床薈萃;2001年02期

3 ;《真菌感染學(xué)》[J];微生物學(xué)通報;2001年06期

4 牛云彤,孫妮,李少平,牛云楓,王輝;武警部隊警犬與相關(guān)人群真菌感染調(diào)查[J];中國公共衛(wèi)生;2001年07期

5 沈麗,王宇,馬鏞;老年患者真菌感染82例分析[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年06期

6 ;《真菌感染學(xué)》[J];微生物學(xué)通報;2002年01期

7 馮雨;上海地區(qū)血液系統(tǒng)真菌感染學(xué)術(shù)研討會召開[J];中華血液學(xué)雜志;2002年07期

8 董央慶 ,陳雅娣 ,仲守珠;院內(nèi)真菌感染41例回顧分析[J];右江醫(yī)學(xué);2002年01期

9 李小英,王正,許慧;臨床真菌感染和相關(guān)因素的分析[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

10 舒守宏,錢葉長,程高;肺部疾病并發(fā)真菌感染21例[J];臨床肺科雜志;2003年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳世平;;醫(yī)院內(nèi)真菌感染010801[A];第二屆全國深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

2 何介武;喻飛;王佑清;周玉枝;;我院150例真菌感染的分析[A];第二屆全國深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 牛云彤;李少平;孫妮;王敬;王丹敏;李賢慧;;武警部隊運輸和訓(xùn)練人群真菌感染調(diào)查[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

4 王彩琴;梁根秀;段韶云;;臨床真菌感染的特點及藥敏分析[A];第九屆西北五�。▍^(qū)）檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

5 夏媛;;老年住院患者真菌感染臨床分析[A];2005全國首屆深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

6 沈銀忠;盧洪洲;;新發(fā)真菌感染[A];中華醫(yī)學(xué)會熱帶病與寄生蟲學(xué)分會機會性感染學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

7 謝振宇;祁浩;程金妹;郭玉德;;真菌在上呼吸道病理的作用(俄文文獻綜述)[A];第二屆全國深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

8 羅高興;彭毅志;聶志宏;張曉兵;莊穎;袁志強;張立輝;周秘;程文廣;吳軍;張家平;羅奇志;;臨床燒傷患者真菌感染研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

9 冉玉平;;復(fù)雜真菌感染診治經(jīng)驗分享[A];中國菌物學(xué)會2009學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2009年

10 羅高興;彭毅志;吳軍;;燒傷后真菌感染研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 馮衛(wèi)東;小小真菌里大乾坤[N];科技日報;2010年

2 本報記者 華凌;將真菌化敵為友[N];科技日報;2013年

3 常麗君;螞蟻感染真菌后行為大變[N];科技日報;2011年

4 程文沁;真菌耐藥困局尋解[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

5 本報記者 賈巖;抗真菌用藥的多學(xué)科考量[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

6 孟淑娟;如何減少癬的自身蔓延[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2009年

7 北京大學(xué)第一醫(yī)院皮膚科副教授 余進;真菌感染早診 搶回救治時間[N];健康報;2011年

8 江西醫(yī)學(xué)院一附院 教授 段德卿;老人肺部疾病應(yīng)防真菌感染[N];家庭醫(yī)生報;2005年

9 本報記者　徐棣軍;別把真菌感染誤當皮炎濕疹[N];深圳特區(qū)報;2006年

10 本報記者 王樂民;警惕腫瘤壞死因子抑制劑致真菌感染[N];健康報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 王濤;抗真菌化合物bacilysin的制備、抑菌機制研究及結(jié)構(gòu)改造的探索[D];浙江大學(xué);2016年

2 孫曉紅;真菌感染的流行病學(xué)分析及主要病原真菌檢測方法的研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 李紅娟;Lactobacillus casei AST18抗真菌代謝產(chǎn)物分析及抑菌作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

4 胡榮;血液腫瘤患者肺部侵襲性真菌來源及漱口預(yù)防研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

5 王雅玲;養(yǎng)殖環(huán)境真菌氣溶膠及相關(guān)真菌毒素的檢測[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 吳秀禎;雙聯(lián)芐類化合物羽苔素E的抗真菌機制[D];山東大學(xué);2010年

7 張曉利;病原性絲狀真菌快速診斷和鑒定的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

8 袁長婷;核糖體RNA基因間隔區(qū)ITS及IGS在真菌分子生物學(xué)鑒定和分型中的應(yīng)用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

9 王志東;伊曲康唑γ-干擾素對真菌感染小鼠免疫功能的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王歡;肝病患者真菌的感染特點和質(zhì)譜快速鑒定研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

2 徐春蘭;捕食線蟲性真菌的分離鑒定與主要生物學(xué)特性的研究[D];西北民族大學(xué);2015年

3 劉健;莜麥病程相關(guān)蛋白Permatin抗真菌機理的初步分析[D];山西大學(xué);2015年

4 李金;支氣管肺泡灌洗液標本細菌學(xué)與真菌學(xué)分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王浩志;肝移植術(shù)后真菌感染的特點及其因素分析[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

6 劉焱;儲糧中主要真菌生長和毒素形成與產(chǎn)生CO_2的關(guān)系[D];河南工業(yè)大學(xué);2015年

7 賀瀟蒙;新型抗真菌先導(dǎo)化合物的設(shè)計、合成和活性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 趙蕾;基于四氫萘骨架結(jié)構(gòu)的新型CYP51抑制劑的合成及抗真菌生物活性評價研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 劉傲;分子生物學(xué)方法檢測石蠟包埋肺組織中真菌的臨床研究[D];南京大學(xué);2015年

10 萬秋風(fēng);重癥患者下呼吸道標本真菌培養(yǎng)的臨床意義[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號：1404146